決明子真?zhèn)舞b別研究

目錄TOC\o"1-3"\u摘要 -25-前言決明子為豆科植物決明CassiaobtusifoliaL.或小決明CassiatoraL.的干燥成熟種子，主要成分為蒽醌類及萘駢吡喃酮類[1]，2015《中國(guó)藥典》規(guī)定大黃酚與橙黃決明素含量分別不能低于0.20%和0.080%，水分不能超過15.0%，總灰分不能超過5.0%，黃曲霉素含量不得超過相關(guān)規(guī)定[2]。決明子作為民間常用藥材之一，擁有悠久藥用歷史，最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[3]中，其性狀描述與決明、小決明一致，而決明、小決明形態(tài)差異極小，因此無法將其區(qū)分，猜測(cè)古代并未將其兩個(gè)品種進(jìn)行區(qū)分。通過產(chǎn)地考證發(fā)現(xiàn)，決明子主要產(chǎn)于長(zhǎng)江以南各省份，北方氣候并不適宜，即使引種也無法開花結(jié)果。《圖經(jīng)本草》中記載道，“今出廣州、桂州”，指的是今天廣州與桂林一帶。除了國(guó)內(nèi)，決明子還有國(guó)外的進(jìn)口產(chǎn)品，由于基源不同存在差異，進(jìn)口決明子不能達(dá)到《中國(guó)藥典》要求，同時(shí)由于決明子市場(chǎng)已充斥著廉價(jià)的進(jìn)口決明子，決明子價(jià)格一直較低，藥農(nóng)積極性較低，所以產(chǎn)量與質(zhì)量一直不高。本研究以《中國(guó)藥典》方法為參考，對(duì)比決明子正品、偽品及市售不符合中國(guó)藥典樣品的區(qū)別，建立一整套可快速準(zhǔn)確評(píng)價(jià)決明子藥材質(zhì)量的方法體系，用于決明子藥材的真?zhèn)舞b別。概述1中藥材決明子及其偽品國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢(shì)隨著現(xiàn)代醫(yī)藥觀念的進(jìn)步，人們漸漸認(rèn)可了中醫(yī)藥在防治各種疾病中的療效和作用[4]。決明子為豆科植物決明CassiaobtusifoliaL.或小決明CassiatoraL.的干燥成熟種子。主產(chǎn)于河南、安徽、四川等地。其性微寒，味甘、苦、咸，入肝、大腸和腎經(jīng)，具清肝明目、潤(rùn)腸通便之功，臨床常用其生品和炮制品。主治目赤澀痛、羞明多淚、頭痛眩暈、大便秘結(jié)等證?，F(xiàn)代研究表明，決明子主含蒽醌、吡酮和脂肪酸類等多種化學(xué)成分，具有降壓、降血脂、保肝、瀉下和抑菌等多種生物活性[5]。歷代文獻(xiàn)資料也早有記載，如《本草綱目》[6]：“除肝膽風(fēng)熱，淫膚白膜，青盲”?？梢姡瑳Q明子不僅具有良好的療效，也被人們列為藥食兩用之品。在我國(guó)種植分布廣、采購來源簡(jiǎn)單容易、價(jià)格低，且提取方便，其保健食品必將擁有廣闊的市場(chǎng)前景和經(jīng)濟(jì)效益。而其代用品望江南CassiaoccidentalisL.，是蘇木科決明屬亞灌木狀一年生草本植物；性喜高溫，不耐寒，野生為主。其性涼味甘苦，有清熱解毒、潤(rùn)腸通便、清肝明目的作用。民間常用其鮮葉搗爛外用，可治毒蟲、毒蛇咬傷或鰲傷等癥。其種子含有毒蛋白表現(xiàn)明顯的毒性，具抗原性質(zhì)。因?yàn)槎舅氐拇嬖?，望江南的新鮮種子有微毒[7]。曾經(jīng)有兩位臨床的專家[8][9]就有分別報(bào)道過有關(guān)誤食望江南使人中毒的病例?，F(xiàn)在望江南子中毒案例逐漸地增多，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)望江南子中毒原理的研究。在臨床上望江南子非常容易與決明子混淆，這是導(dǎo)致中毒的關(guān)鍵原因。2決明子的真?zhèn)舞b別研究現(xiàn)狀本次研究以《中國(guó)藥典》方法為參考，評(píng)價(jià)不同品種、企業(yè)、產(chǎn)地、炮制品、不同價(jià)格規(guī)格商品決明子質(zhì)量，建立一整套可快速準(zhǔn)確評(píng)價(jià)決明子藥材質(zhì)量的方法體系。2.1決明子正/偽品性狀鑒別決明子為豆科植物決明CassiaobtusifoliaL.或小決明CassiatoraL.的干燥成熟種子。該品略呈四方形或短圓柱形，兩端近平行，稍傾斜，長(zhǎng)3～7毫米，寬2～4毫米，綠棕色或暗棕色，平滑有光澤，背腹面各有1條突起的棱線，棱線兩側(cè)各有1條淡黃色的線形凹紋；質(zhì)堅(jiān)硬，不易破碎。橫切面可見薄的種皮和2片3形折曲的黃色子葉。氣微，味微苦。望江南子為豆科植物望江南CassiaoccidentalisL的干燥種子，其種子扁平狀近圓形[10]，一端略長(zhǎng)，長(zhǎng)3.5～4.5mm，寬2.5～3.5mm，厚1.0～1.5mm。表面灰棕或灰綠色，兩平面的中央有類橢圓形凹斑。質(zhì)堅(jiān)硬，不易破碎，橫切面可見灰白色胚乳與兩片平直緊貼的黃色子葉。無臭，味淡[11]。2.2決明子正/偽品顯微性狀鑒別望江南與決明屬的大小決明相比較，其顯微結(jié)構(gòu)大體相似：都有支持細(xì)胞層、角質(zhì)層、子葉、柵狀細(xì)胞層、胚乳及營(yíng)養(yǎng)層，葉片皆為異面葉、葉中皆有2層?xùn)艡诩?xì)胞等，但在形狀、多少、大小上存在差異；因此可用顯微特征來進(jìn)行兩者的鑒別[12]。兩者差異主要在于草酸鈣簇晶的有無，若藥材粉末中不存在草酸鈣簇晶，則可推測(cè)其粉末并非決明子，決明子粉末中富含草酸鈣簇晶，而兩者在柵狀細(xì)胞及支持細(xì)胞形態(tài)上區(qū)別較小，因此粉末顯微特征可作為判別決明子真?zhèn)蔚妮o助手段[13]。2.3決明子正/偽品TLC鑒定研究藥典中要求決明子含大黃酚（C15H10O4）不得少于0.12%，含橙黃決明素（C17H14O7）不得少于0.080%。而望江南子種子中含有大黃酚、β－谷甾醇、胡蘿卜苷、大黃素甲醚吡喃葡糖苷、大黃素甲醚、蘆薈大黃素、大黃酸等成分[14]；不含橙黃決明素。TLC法在藥物分析方面是一個(gè)很重要的鑒定方法，且是目前藥典中收載最多的鑒別與有關(guān)物質(zhì)檢查方法之一[15]，所以可通過TLC鑒定對(duì)比不同樣品的橙黃決明素斑點(diǎn)的有無區(qū)別決明子和望江南子；還可通過對(duì)比不同產(chǎn)地來源樣品的大黃酚及橙黃決明素斑點(diǎn)亮度不同判斷其含量的區(qū)別。2.4決明子正/偽品HPLC含量測(cè)定目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于決明子含量測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道較多。張毅等教授用HPLC法測(cè)定了決明子中7個(gè)蒽醌類成分[16]；劉松青等教授用HPLC法測(cè)定決明子中決明子苷A、B含量[17]；蘇會(huì)娟等教授用HPLC同時(shí)測(cè)定決明子中4個(gè)主要成分的含量[18]；唐力英等教授用HPLC測(cè)定決明子中紅鐮霉素龍膽二糖苷的含量[19]；XuLJ等教授用HPLC測(cè)定了決明子中8個(gè)成分的含量[20]；袁曉等教授用HPLC測(cè)定了不同產(chǎn)地決明子中9個(gè)蒽醌類成分[21]等等。迄今為止,關(guān)于決明子炒制的研究主要進(jìn)行了炮制工藝的對(duì)比研究[22]，以不同的指標(biāo)測(cè)定不同的炮制品總蒽醌或水解后蒽醌類成分含量[23]。方法學(xué)的考察表明HPLC法靈敏、準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)單，可作為決明子的藥材質(zhì)量控制方法之一。不同產(chǎn)地、不同制法的蒽醌類成分含量差別較大，所以可以用大黃酚含量為指標(biāo)鑒定決明子的質(zhì)量；同時(shí)因望江南子不含橙黃決明素成分，所以可以用橙黃決明素為指標(biāo)鑒定偽品。研究部分1決明子藥材及其偽品的收集收集決明子藥材及其偽品，并拍照留存。1.1實(shí)驗(yàn)步驟通過互聯(lián)網(wǎng)采購、藥材市場(chǎng)購買及委托順慶生教授收集等途徑，收集不同產(chǎn)地、不同炮制方式、不同品種的決明子藥材，同對(duì)決明子藥材的偽品進(jìn)行收集。1.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果總共收集樣品15批，其中正品13批，偽品2批。兩批偽品望江南子分別由順老提供以及網(wǎng)上購買。13批正品中，分為決明子及小決明兩個(gè)品種，小決明品種一個(gè)批次，為順老提供。決明子則分為決明子與炒決明子，普通干品有采芝林樣品2批次，無限極樣品3批次，康美樣品2批次，三只松鼠2批次，順老提供的樣品1批次。炒決明子為同仁堂樣品2批次。本次收集的決明子樣品見表1及圖1-1至1-14。表1決明子、小決明子及偽品望江南子樣品信息編號(hào)名稱產(chǎn)地來源時(shí)間備注S1決明子廣東采芝林2017/6/18圖1-1S2決明子廣東采芝林2017/6/18圖1-2S3決明子河北無限極2017/6/18圖1-3S4決明子安徽無限極2017/6/18圖1-4S5決明子河北無限極2017/6/18圖1-5S6決明子安徽康美2017/9/11圖1-6S7決明子安徽康美2017/9/11圖1-7S8決明子安徽三只松鼠2017/9/11圖1-8S9決明子安徽三只松鼠2017/9/30圖1-9S10決明子上海順慶生教授提供2017/9/30圖1-10S11望江南子上海順慶生教授提供2017/9/11圖1-11S12小決明子上海順慶生教授提供2017/10/12圖1-12S13決明子（炒）安徽同仁堂2017/10/12圖1-13S14決明子（炒）安徽同仁堂2017/10/12圖1-14圖1-1決明子（廣東-采芝林）圖1-2決明子（廣東-采芝林）圖1-3決明子（河北-無限極）圖1-4決明子（安徽-無限極）圖1-5決明子（河北-無限極）圖1-6決明子（安徽-康美）圖1-7決明子（安徽-康美）圖1-8決明子（安徽-三只松鼠）圖1-9決明子（安徽-三只松鼠）圖1-10決明子（上海-順慶生教授提供）圖1-11望江南子（上海-順慶生教授提供）圖1-12小決明子（上海-順慶生教授提供）圖1-13炒決明子（安徽-同仁堂）圖1-14炒決明子（安徽-同仁堂）2決明子藥材及其偽品外觀性狀特征通過對(duì)決明子藥材及其偽品進(jìn)行外觀性狀觀察，建立一套可用于區(qū)分決明子及其偽品望江南子的外觀性狀方法。2.1實(shí)驗(yàn)材料正品決明子；偽品望江南子。2.2實(shí)驗(yàn)步驟將決明子正品及偽品望江南子置于白底攝影棚中，進(jìn)行拍照并對(duì)比其外觀性狀的差異，通過標(biāo)尺對(duì)其相關(guān)數(shù)據(jù)如長(zhǎng)度、厚度等進(jìn)行測(cè)量并統(tǒng)計(jì)。2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.3.1外觀性狀描述兩者在外觀性狀上可顯著區(qū)分，如下圖2-1及2-2所示：圖2-1決明子外觀性狀特征圖2-2望江南子外觀性狀特征2.3.2外觀性狀匯總表表2決明子與望江南子外觀性狀匯總表品名決明子望江南形狀略呈短圓柱形或菱方形，兩端平行傾斜。長(zhǎng)3-7mm，寬2-4mm。呈扁平狀，長(zhǎng)3.5-4.5mm，寬2.5-3.5mm，厚1.0-1.5mm。外表面表面暗棕或綠棕色，平滑有光澤。一端較平坦，另端較斜尖，背腹各有一條突起的棱線，兩側(cè)各有一條斜向?qū)ΨQ色淺的凹紋。表面灰棕或灰綠色，兩面中央有類橢圓形的凹斑，有的邊緣有白色網(wǎng)格狀花紋。質(zhì)地質(zhì)硬，不易破碎。質(zhì)堅(jiān)硬，不易破碎斷面種皮薄，子葉2，黃色，呈S形折曲重疊。種皮薄，子葉2，黃色，不呈S形折曲氣味氣微，味微苦。無臭，味淡2.4總結(jié)通過外觀性狀總結(jié)發(fā)現(xiàn)，決明子及其偽品望江南子在外觀性狀上存在較大差別，除了質(zhì)地一致外，無論是性狀、外表面、斷面及氣味均存在較大差異，因此，可通過簡(jiǎn)單的外觀性狀區(qū)分決明子及其偽品望江南子。3決明子藥材及其偽品粉末顯微鑒定通過對(duì)比小決明子、決明子藥材及其偽品望江南子的粉末顯微特征，總結(jié)兩者在粉末顯微特征上的區(qū)別。3.1實(shí)驗(yàn)步驟用牙簽取已粉碎過的藥材粉末適量置于載玻片上，滴加適量透化劑水合氯醛與粉末相混合，在酒精燈上反復(fù)透化2~3次，然后滴加適量稀甘油作為封藏劑，蓋上蓋玻片，避免產(chǎn)生氣泡，在顯微鏡下觀察,并進(jìn)行顯微拍照。3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.2.1粉末性狀描述由于決明子與小決明子的顯微圖片特征完全一致，因此本部分圖片只展示決明子顯微特征圖。結(jié)果顯示，決明子及其偽品望江南子粉末區(qū)別較小，在決明子粉末中可見草酸鈣簇晶、支持細(xì)胞、柵狀細(xì)胞及角質(zhì)層碎片。而望江南子粉末與決明子粉末特征類似，最大區(qū)別在于望江南子粉末不存在草酸鈣簇晶。兩者在柵狀細(xì)胞區(qū)別在于長(zhǎng)度的差別，而支持細(xì)胞區(qū)別在于望江南子種皮支持細(xì)胞可見兩個(gè)同心圓圈，內(nèi)圓多呈紅棕色，而決明子內(nèi)圓則無明顯顏色。決明子與望江南子粉末顯微特征如下圖3-1與圖3-2。1.柵欄細(xì)胞（a.表面觀b.側(cè)面觀）；2.支持細(xì)胞（a.表面觀b.側(cè)面觀）；3.角質(zhì)層；4.簇晶圖3-1決明子顯微特征圖1.柵欄細(xì)胞（a.表面觀b.側(cè)面觀）；2.支持細(xì)胞（a.表面觀b.側(cè)面觀）；3.角質(zhì)層；4.簇晶圖3-2望江南子顯微特征圖3.2.2決明子藥材及其偽品粉末顯微特征匯總表表3決明子與望江南子粉末顯微特征匯總表品種柵狀細(xì)胞側(cè)面觀支持細(xì)胞頂面觀角質(zhì)層碎片草酸鈣簇晶決明種皮柵狀細(xì)胞無色或淡黃色，側(cè)面觀細(xì)胞一列呈長(zhǎng)方形，排列稍不整齊，長(zhǎng)42-55μm,壁較厚，厚4-7μm，光輝帶兩條；表面觀類多角形，壁稍皺縮。種皮支持細(xì)胞表面觀呈類圓形，直徑15-24μm，可見兩個(gè)同心圓圈；側(cè)面觀呈啞鈴狀或葫蘆狀，長(zhǎng)20-30μm，寬20-30μm。無色透明，厚11-19μm。草酸鈣簇晶眾多，多存在于薄壁細(xì)胞中，直徑8-21μm。望江南種皮柵狀細(xì)胞無色或淡黃色，側(cè)面觀細(xì)胞一列呈長(zhǎng)方形，排列稍不整齊，長(zhǎng)60-80μm,壁較厚，光輝帶兩條；表面觀類多角形，壁稍皺縮。種皮支持細(xì)胞表面觀呈類圓形，直徑15-24μm，可見兩個(gè)同心圓圈，內(nèi)圓多呈紅棕色；側(cè)面觀呈啞鈴狀或葫蘆狀，長(zhǎng)20-30μm，寬20-30μm。無色透明，厚11-19μm。無3.3總結(jié)決明子與望江南子的粉末顯微特征存在差異，差異主要在于草酸鈣簇晶的有無，若藥材粉末中不存在草酸鈣簇晶，則可推測(cè)其粉末并非決明子，決明子粉末中富含草酸鈣簇晶，而兩者在柵狀細(xì)胞及支持細(xì)胞形態(tài)上區(qū)別較小，因此粉末顯微特征可作為判別決明子真?zhèn)蔚妮o助手段。4決明子藥材及其偽品TLC鑒定研究對(duì)不同產(chǎn)地、炮制方式、來源的決明子及小決明，偽品望江南子進(jìn)行TLC鑒定，區(qū)分決明子藥材及其偽品。4.1實(shí)驗(yàn)材料、儀器與試劑表4-1實(shí)驗(yàn)材料材料來源藥材見表1大黃酚中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110796-201621橙黃決明素中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111900-201605決明子對(duì)照品中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：121011-201506表4-2實(shí)驗(yàn)儀器儀器來源超聲波清洗器昆山市超聲儀器有限公司水浴鍋TAISITE公司分析天平賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司薄層色譜硅膠H薄層板煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所表4-3實(shí)驗(yàn)試劑試劑來源甲醇天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：201711324鹽酸天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：201711839乙醚天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：201711125三氯甲烷天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：201711034乙酸乙酯天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：2017110574.2實(shí)驗(yàn)方法4.2.1供試品的制備按照2015版《中國(guó)藥典》決明子項(xiàng)下的薄層內(nèi)容，對(duì)所收集的樣品進(jìn)行提取，來源相同的樣品選取其中1個(gè)批次進(jìn)行提取，方法如下：圖4-1供試品的制備方法流程圖4.2.2標(biāo)準(zhǔn)品的制備另取橙黃決明素、大黃酚對(duì)照品，加入無水乙醇-乙酸乙酯（2:1）制成1mL含對(duì)照品1mg，作為對(duì)照品溶液。4.2.3實(shí)驗(yàn)方法圖4-2TLC實(shí)驗(yàn)方法流程圖供試品色譜中，在對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯示相同顏色。4.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖4-3所示，通過薄層色譜圖可見，各決明子正品樣品斑點(diǎn)清晰，無拖尾現(xiàn)象；通過對(duì)比對(duì)照品薄層圖譜發(fā)現(xiàn)，決明子正品樣品（3至9號(hào)，11號(hào)）在相應(yīng)位置上有橙黃色斑點(diǎn)，表明所有決明子正品均含有橙黃決明素及大黃酚；偽品望江南子（10號(hào)）只在大黃酚標(biāo)準(zhǔn)品相應(yīng)位置上有橙黃色斑點(diǎn)，并不含有橙黃決明素；通過薄層圖譜，可將正品決明子與偽品望江南子區(qū)分。大黃酚；2.橙黃決明素；3.決明子（安徽）；4.炒決明子（安徽）；5.小決明子（上海）；6.決明子（河北）；7.決明子（上海）；8.決明子（安徽）；9.決明子（廣東）；10.望江南子（上海）；11.對(duì)照藥材圖4-3各樣品薄層鑒別色譜圖4.4總結(jié)在正品決明子樣品中，3號(hào)至7號(hào)及11號(hào)五個(gè)樣品的大黃酚斑點(diǎn)清晰明亮，而8號(hào)、9號(hào)兩個(gè)樣品大黃酚斑點(diǎn)較暗，表明其大黃酚含量較前者低。而通過對(duì)比不同樣品的橙黃決明素斑點(diǎn)可發(fā)現(xiàn)，4號(hào)至9號(hào)、11號(hào)樣品斑點(diǎn)清晰，顏色較深，而3號(hào)樣品則斑點(diǎn)顏色較淺。通過對(duì)比發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地來源樣品的大黃酚及橙黃決明素斑點(diǎn)亮度不同，下一步通過高效液相色譜法對(duì)此兩種成分進(jìn)行含量測(cè)定，以期找出其中規(guī)律。5決明子藥材及其偽品HPLC含量測(cè)定對(duì)不同產(chǎn)地、炮制方式、批次的決明子及小決明子，偽品望江南子按照2015版《中國(guó)藥典》決明子項(xiàng)下條件進(jìn)行含量測(cè)定，根據(jù)含量測(cè)定結(jié)果，區(qū)分決明子及其偽品望江南子，并通過含量測(cè)定，對(duì)不同產(chǎn)地、炮制方式及批次的決明子，小決明子根據(jù)《中國(guó)藥典》中所規(guī)定的指標(biāo)性成分含量進(jìn)行測(cè)定，對(duì)比其品質(zhì)優(yōu)劣。5.1實(shí)驗(yàn)材料與試劑乙腈（德國(guó)默克公司）；其余實(shí)驗(yàn)材料、儀器、試劑同表4-1、表4-2、表4-3。5.2實(shí)驗(yàn)方法5.2.1樣品水分含量的測(cè)定取決明子藥材，使用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎處理，并過三號(hào)篩，得到?jīng)Q明子粉末，取粉末適量，在熱重分析儀中對(duì)其水分含量進(jìn)行測(cè)定；5.2.2對(duì)照品的配置精密稱取取大黃酚、橙黃決明素對(duì)照品3.0及2.0mg，定容至10mL容量瓶中，充分溶解，搖勻，配成300及200μg/mL的對(duì)照品準(zhǔn)備液，吸取對(duì)照品準(zhǔn)備液1mL，定容至10mL容量瓶中，將大黃酚及橙黃決明素對(duì)照品稀釋至30及20μg/mL濃度，使用0.22μm微孔濾膜過濾至液相瓶中備用。5.2.3供試品溶液的配置圖5-1供試品溶液配制方法流程圖5.2.4色譜條件與液相系統(tǒng)條件液相柱為AngilentXBDC18，流動(dòng)相條件為乙腈-0.1%磷酸溶液。按照表5-1中條件進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為284nm。理論塔板數(shù)按橙黃決明素峰計(jì)算，不低于3000。表5-1液相色譜條件時(shí)間流動(dòng)相（A）流動(dòng)相（B）0~15406015~3040→9060→1030~4090105.2.5含量測(cè)定方法對(duì)所有決明子樣品中的大黃酚及橙黃決明素含量進(jìn)行測(cè)定，其計(jì)算公式如下:5.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果5.3.1水分測(cè)定結(jié)果水分測(cè)定結(jié)果表5-2所示，所有樣品的水分含量均低于2015版《中國(guó)藥典》決明子項(xiàng)下的12.0%的要求，因此所有樣品的水分含量均達(dá)標(biāo)。表5-2各樣品的水分含量樣品來源水分含量（%）采芝林11.95采芝林21.97決明子1.98康美12.18康美22.19三只松鼠12.47三只松鼠22.05同仁堂11.6同仁堂21.59望江南子10.81望江南子20.91無限極11.2無限極23.21無限極32.93小決明2.05對(duì)照藥材1.885.3.2含量測(cè)定結(jié)果含量測(cè)定結(jié)果如表5-3所示，結(jié)果表明，所有樣品均含有橙黃決明素與大黃酚兩種成分，而兩個(gè)批次的偽品望江南子則不含或含量及其低。在所有決明子及小決明子樣品中，橙黃決明素的含量范圍為0.824~2.432mg/g，含量較高的樣品批次為采芝林及三只松鼠的樣品，其次是無限極的決明子樣品，含量較低的樣品為康美及同仁堂，由順慶生教授所收集的決明子與小決明子含量最低。在所有的決明子與小決明子樣品中，大黃酚含量范圍為0.599~8.004mg/g之間，其中，康美的樣品大黃酚含量最高，其次則是無限極及同仁堂的樣品，順慶生教授收集的決明子與小決明子大黃酚含量均較高，而采芝林及三只松鼠的樣品大黃酚含量則較低。所有的正品樣品橙黃決明素的含量均達(dá)到藥典要求的標(biāo)準(zhǔn)，而采芝林、三只松鼠及對(duì)照藥材的大黃酚含量未達(dá)標(biāo)。表5-3含量測(cè)定結(jié)果樣品來源橙黃決明素(mg/g)大黃酚(mg/g)采芝林12.4320.730采芝林22.3490.599決明子0.8774.464康美10.9088.004康美20.9037.994三只松鼠12.2661.608三只松鼠21.4901.159同仁堂11.0493.962同仁堂20.9665.325望江南子10.0100.141望江南子20.0100.147無限極11.3274.236無限極21.3444.166無限極30.9182.967小決明0.8243.356對(duì)照藥材0.4021.1925.3.3所有樣品液相色譜圖1.橙黃決明素；2.對(duì)照藥材；3.小決明子（上海）；4.決明子（安徽-無限極）；5.決明子（河北-無限極）；6.決明子（河北-無限極）；7.望江南子（上海）；8.望江南子（網(wǎng)上購買）；9.炒決明（安徽-同仁堂）；10.炒決明（安徽-同仁堂）；11.決明子（安徽-三只松鼠）；12.決明子（安徽-三只松鼠）；13.決明子（安徽-康美）；14.決明子（安徽-康美）；15.決明子（上海）；16.決明子（廣東-采芝林）；17.決明子（廣東-采芝林）圖5-2各樣品液相色譜圖圖5-2所展示的是所有樣品、標(biāo)準(zhǔn)藥材及標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC色譜圖，從圖可知，所有決明子及小決明子樣品均含有橙黃決明素（11.06min）及大黃酚（32.176min）兩個(gè)色譜峰，而兩個(gè)批次的偽品望江南子則基本在此兩個(gè)保留時(shí)間位置沒有明顯的色譜峰，因此，使用HPLC含量測(cè)定方法可區(qū)分決明子及其偽品望江南子。5.4總結(jié)2015版《中國(guó)藥典》中規(guī)定，決明子飲片水分不得大于12.0%，大黃酚及橙黃決明素含量不得低于0.12%及0.08%，即兩者含量分別不能低于1.2mg/g及0.8mg/g。在所有樣品中，采芝林樣品大黃酚含量低于規(guī)定值，而所有樣品的橙黃決明素含量均合格。從樣品含量上看，采芝林樣品的橙黃決明素含量遠(yuǎn)高于大黃酚含量，而三只松鼠的決明子樣品的橙黃決明素含量與大黃酚含量接近，橙黃決明素含量大于大黃酚含量。而其他樣品如順慶生教授收集的決明子、小決明子，其大黃酚含量均遠(yuǎn)高于橙黃決明含量，康美、同仁堂及無限極所收集的決明子樣品，也有類似情況。以此推斷，不同來源的決明子樣品，其橙黃決明素含量與大黃酚含量的比值存在一定的規(guī)律。在所有樣品中，采芝林樣品橙黃決明素含量遠(yuǎn)高于大黃酚含量，兩者比值大于3：1，其樣品來源于廣東，因此推斷，廣東來源的決明子與其他產(chǎn)地的存在差異。而康美樣品、同仁堂樣品、無限極一個(gè)樣品及三只松鼠的樣品來源于安徽，但其橙黃決明素與大黃酚含量比值存在差異，三只松鼠的橙黃決明素與大黃酚比值小于1，可能此產(chǎn)地的決明子實(shí)際上來源于廣東。在這些樣品中，同仁堂來源樣品為炒決明子，與決明子樣品相比，其大黃酚及橙黃決明素