TQBAA 001-2023 釀酒酵母培養(yǎng)物中甘露聚糖含量的測定 高效液相色譜法

S0SB6團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)3釀酒酵母培養(yǎng)物中甘露聚糖含量的測定高效液相色譜法e—y1發(fā)布 1實(shí)施中關(guān)村量子生物農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新戰(zhàn)略聯(lián)盟 發(fā)布中 國 標(biāo) 準(zhǔn) 出 版 社 出版33爛爛爛爛前 言本文件按照標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。本文件由中關(guān)村量子生物農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新戰(zhàn)略聯(lián)盟標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口。本文件起草單位北京農(nóng)學(xué)院北京中農(nóng)弘科生物技術(shù)有限公司安琪酵母股份有限公司安徽東方新新生物技術(shù)有限公司中國農(nóng)業(yè)大學(xué)北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司鐵騎力士食品有限責(zé)任公司河北弘科榮達(dá)生物技術(shù)有限公司。本文件主要起草人劉明王宗義蔣林樹王文歡覃先武謝申猛陸文清曹云鶴周建川白秀梅、董彥君趙學(xué)軍戴晉軍夏冰徐建晨周俊言龐遠(yuǎn)祥劉茹劉運(yùn)平趙莉莉張?jiān)瞥Ｍ趸蹌⒄?。Ⅰ?言本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)提請注意聲明符合本文件時(shí)可能涉及與一種酵母培養(yǎng)物中甘露聚糖的檢測相關(guān)的專利的使用。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)對該專利的真實(shí)性有效性和范圍無任何立場。該專利持有人已向本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)承諾他愿意同任何申請人在合理且無歧視的條款和條件下就該專利授權(quán)許可進(jìn)行談判。該專利持有人的聲明已在本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)備案。相關(guān)信息可以通過以下聯(lián)系方式獲得:專利持有人姓名北京中農(nóng)弘科生物技術(shù)有限公司。地址北京市昌平區(qū)中關(guān)村生命科學(xué)園北清創(chuàng)意園。請注意除上述專利外本文件的某些內(nèi)容仍可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。Ⅱ33爛爛爛爛22釀酒酵母培養(yǎng)物中甘露聚糖含量的測定高效液相色譜法范圍本文件描述了釀酒酵母培養(yǎng)物中甘露聚糖含量的高效液相色譜測定方法。本文件適用于釀酒酵母培養(yǎng)物中甘露聚糖的測定。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中注日期的引用文件僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件。2分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法5動(dòng)物飼料試樣的制備術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。1 ( )2

釀酒酵母培養(yǎng)物ee以釀酒酵母為菌種經(jīng)固體發(fā)酵后濃縮干燥獲得的產(chǎn)品。甘露聚糖 n甘露糖為骨架鏈23連接甘露糖殘基側(cè)鏈的高度分支的糖多聚體。原理樣品經(jīng)酸水解使甘露聚糖轉(zhuǎn)化為甘露糖以吡唑啉酮為衍生劑進(jìn)行衍生經(jīng)高效液相色譜分離紫外檢測器檢測外標(biāo)法進(jìn)行定量。將測得的甘露糖含量通過轉(zhuǎn)化系數(shù)校正計(jì)算得到甘露聚糖的含量。試劑和材料試劑水一級水。濃鹽酸分析純。氫氧化鈉分析純。二氯甲烷2分析純。甲醇色譜純。1乙腈色譜純。乙酸銨4色譜純。吡唑啉酮分析純。試劑配制氫氧化鈉溶液6稱取精確至氫氧化鈉緩緩加入盛有00L水的燒杯中使其完全溶解待溶液冷卻后移至0L容量瓶中定容。氫氧化鈉溶液3稱取精確至氫氧化鈉緩緩加入盛有00L水的燒杯中使其完全溶解待溶液冷卻后轉(zhuǎn)移至0L容量瓶中定容。鹽酸溶液3移取5精確至1鹽酸緩緩加入盛有00L水的燒杯中待溶液冷卻后轉(zhuǎn)移至0L容量瓶中定容。吡唑啉酮溶液5稱取g的吡唑啉酮溶液用甲醇溶解定容至0即配即用。乙酸銨溶液1稱取g的乙酸銨加入適量水溶解定容至0過m的濾膜后備用。標(biāo)準(zhǔn)品甘露糖6S號純度8或經(jīng)國家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。甘露糖標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液0稱取甘露糖標(biāo)準(zhǔn)品精確至用水溶解并定容至0L容量瓶中搖勻于儲液瓶中4℃保存有效期為使用前放置至室溫。標(biāo)準(zhǔn)中間溶液0移取5L標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液于0L容量瓶中用水定容。即配即用。系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別移取標(biāo)準(zhǔn)中間溶液0000、0L和0L于0L容量瓶中用水定容得到質(zhì)量濃度分別為、L和L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。即配即用。材料三角瓶0配留有氣孔的膠塞。塑料離心管50帶螺口蓋。濾膜水系。H精密試紙H范圍為。定量濾紙。儀器高效液相色譜儀配有紫外檢測器。2分析天平感量g和。離心機(jī)轉(zhuǎn)速。高壓滅菌鍋工作壓力24工作溫度1℃4℃控溫精度1℃。恒溫水浴鍋控溫精度1℃。渦旋振蕩器。樣品按照5制備樣品至少粉碎使其完全通過5m孔徑的分析篩充分混勻裝入磨口瓶中備用。試驗(yàn)步驟水解準(zhǔn)確稱取g試樣精確至于0L塑料離心管中加入6L鹽酸旋緊離心管蓋于渦旋振蕩器上渦旋2充分浸潤混勻全部轉(zhuǎn)入0L三角瓶中用0L水分?jǐn)?shù)次清洗離心管清洗液并入三角瓶中塞上瓶口塞置于高壓滅菌鍋1℃水解0。取出冷卻至室溫使用氫氧化鈉水溶液1和調(diào)水解液H至中性轉(zhuǎn)移水解液至0L容量瓶中用水定容。取適量水解液過濾濾液備用。高甘露聚糖含量試樣過濾液需適當(dāng)用水稀釋后備用。衍生吸取濾液0L于5L塑料離心管中加入5L吡唑啉酮溶液3L氫氧化鈉溶液各充分混勻于0℃水浴衍生化反應(yīng)0。取出冷卻至室溫加入3L鹽酸溶液混勻。加入5L二氯甲烷渦旋n離心5棄去下層二氯甲烷相上層水相使用5L二氯甲烷重復(fù)萃取3次最后取上層水相過m濾膜待測定。同樣方法對系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行衍生化處理。測定色譜條件色譜條件如下。色譜柱8柱柱長0內(nèi)徑6粒徑或性能相當(dāng)者。柱溫5℃。檢測波長。進(jìn)樣量。流動(dòng)相A為1L乙酸銨溶液B為乙腈。流動(dòng)相流速0。流動(dòng)相洗脫參考程序見表。表1流動(dòng)相洗脫參考程序n//05505500000005505533344爛爛爛爛標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將經(jīng)衍生化處理后的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液在上述色譜條件下準(zhǔn)確進(jìn)樣以系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為橫坐標(biāo)峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)溶液衍生色譜圖見附錄A中圖。試樣溶液的測定定性分析將經(jīng)衍生化處理后的樣品水解液在上述色譜條件下準(zhǔn)確進(jìn)樣同樣測試條件下試樣溶液中目標(biāo)物的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中甘露糖衍生物的保留時(shí)間相比偏差應(yīng)在5范圍內(nèi)。樣品水解液衍生色譜圖見圖。定量檢測在定性分析的基礎(chǔ)上將得到的峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算得最終試樣溶液中甘露糖的質(zhì)量濃度。試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中甘露聚糖的含量按式計(jì)算:m XρVn0 1m 式中:X甘露聚糖含量;ρ由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算獲得樣品水解液中甘露糖的質(zhì)量濃度單位為微克每毫升;V水解液定容體積單位為毫升;n水解液稀釋倍數(shù);甘露糖轉(zhuǎn)化為甘露聚糖的系數(shù);m用于水解的樣品質(zhì)量單位為克。方法