DB21-T 2827.5-2017畜禽疫病防治與凈化技術規(guī)范 第5部分：雞白痢平板凝集試驗操作技術規(guī)范

ICS11.220

B41

備案號：58540-2018DB21

遼寧省地方標準

DB21/T2827.5—2017

畜禽疫病防治與凈化技術規(guī)范

第5部分：雞白痢平板凝集試驗操作技術

規(guī)范

Technicalspecificationsofpreventionanderadicationofanimalepidemicdisease

Part5:Technicalspecificationsoftheoperationinplateagglutinationtestonpullorum

disease

DB21/T2827.5—2017

前言

標準《畜禽疫病防治與凈化技術規(guī)范》按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草，分為七個部分：

——豬繁殖與呼吸綜合征美洲經(jīng)典株與高致病性變異株病毒RT-PCR鑒別檢測方法

——動物炭疽防治技術規(guī)范

——豬偽狂犬病防治技術規(guī)范

——規(guī)模豬場藍耳病免疫凈化技術規(guī)范

——雞白痢平板凝集試驗操作技術規(guī)范

——種雞場雞白痢凈化技術規(guī)范

——鵝血清HA-HI抗體檢測技術規(guī)范

本部分為標準《畜禽疫病防治與凈化技術規(guī)范》的第5部分

本部分由遼寧省動物疫病預防控制中心提出。

本部分由遼寧省畜牧獸醫(yī)局歸口。

本部分負責起草單位：遼寧省動物疫病預防控制中心，遼寧省動物醫(yī)學研究院。

本部分主要起草人：王宏燕，顧貴波，薛樹山，石霖，閆海濱，高原，何利昆，蘭德松，鄧文超，

孫世宇，鄭洪玲，孟祥菲，王竹，關淼。

II

DB21/T2827.5—2017

畜禽疫病防治與凈化技術規(guī)范

第5部分：雞白痢平板凝集試驗操作技術規(guī)范

1范圍

本標準規(guī)定了雞白痢檢測的全血平板凝集試驗、血清平板凝集試驗和種蛋蛋黃平板凝集試驗的技術

要求。

本標準適用于雞白痢的現(xiàn)場檢測。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

NY/T536-2002雞傷寒和雞白痢診斷技術

3實驗準備

3.1實驗材料

3.1.1雞白痢雞傷寒多價染色抗原、強陽性血清、弱陽性血清、陰性血清。

3.1.2透明塑料薄膜：A4紙規(guī)格。

3.1.3襯板：在A4紙上，分割出96個方形區(qū)域，每一個方形區(qū)域里有一個直徑為2cm的圓，該圓形

區(qū)域即為凝集試驗的反應區(qū)。凝集試驗時，涂布成該圓形區(qū)域大小的面積。

3.1.4移液器、槍頭、酒精棉球、注射器、15mL離心管、1.5mL離心管、手電筒。

3.2實驗樣品

3.2.1全血制備

用酒精棉球?qū)﹄u的翅靜脈或雞冠進行消毒后，用針頭刺破雞的翅靜脈或雞冠，用移液器吸取0.05mL

血液備用。

3.2.2血清制備

將雞側(cè)臥保定后，用酒精棉球消毒翅靜脈窩區(qū)后，在距離翅靜脈窩大約0.3cm處，使針管與近心端

保持45度進針，稍稍將針頭輕插進血管，輕拉活塞，當有血液開始被吸出后，保持注射器位置不動，讓

血液緩緩吸入注射器針管內(nèi)，達到所需的采血量后，用棉球壓迫血管上的傷口約30s止血，將針頭拔掉，

把注射器內(nèi)的血液徐徐注入15mL離心管，不能有氣泡，也不能振蕩。逐一編號，仔細核對，傾斜放置。

血液樣品夏天在常溫下，冬天在25℃～37℃溫箱中放置1h左右，即可析出血清，將血清吸入1.5mL

離心管備用。

3.2.3卵黃制備

1

DB21/T2827.5—2017

用碘酒和酒精棉球?qū)ΨN蛋表面進行消毒，在種蛋的小端，用鑷子打破蛋殼，留一個蠶豆大小的孔，

把蛋清流盡，用移液器吸取0.5mL蛋黃，放入1.5mL離心管中，吸取等量的生理鹽水加入離心管中，

與蛋黃充分混勻，吸取0.05mL卵黃稀釋液備用。

3.3實驗操作

3.3.1將透明塑料薄膜放在襯板上，使透明塑料薄膜與襯板完全重合，襯板上的凝集反應區(qū)域（直徑

為2cm的圓形區(qū)域）即可透過塑料薄膜呈現(xiàn)在操作者面前；

3.3.2移液器吸取0.05mL的抗原滴在圓形反應區(qū)域的中心；

3.3.3用移液器吸取0.05mL血液（或血清或卵黃），滴在抗原上，然后用槍頭將抗原和血液混合均

勻，并涂布成襯板上圓形區(qū)域大??；

3.3.4反應在20℃～25℃條件下進行，反應2min，用手電筒反照塑料薄膜即可判定結(jié)果；

3.3.5設置陰性血清、強陽性血清、弱陽性血清的對照反應。

3.4結(jié)果判定

3.4.1凝集反應判定標準

3.4.1.1100%凝集（＋＋＋＋）：紫色凝集塊大而明顯，混合液稍渾濁；

3.4.1.275%凝集（＋＋＋）：紫色凝集塊較明顯，混合液有輕度渾濁；

3.4.1.350%凝集（＋＋）：出現(xiàn)明顯的紫色凝集顆粒，但混合液較為渾濁；

3.4.1.425%凝集（＋）：僅出現(xiàn)少量的細小顆粒，而混合液渾濁；

3.4.1.5不凝集（－）：無凝集顆粒出現(xiàn)，混合液渾濁。

3.4.2在2min內(nèi)，強陽性血清與抗原呈現(xiàn)100%凝集（＋＋＋＋），弱陽性血清與抗原呈現(xiàn)50%凝集

（＋＋），陰性血清與抗原不發(fā)生凝集反應（－）。

3.4.3在2min內(nèi)，被檢全血（或血清或卵黃）與抗原出現(xiàn)≥50%凝集，則為陽性，不發(fā)生凝集反應

則為陰性，凝集反應＜50%則判為可疑，將可疑雞隔離飼養(yǎng)一個月后，再做檢測，若仍為可疑反應，則

判為陽性。

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2

DB21/T2827.5—2017

目次

前言................................................................................II

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3實驗準備...........................................................................1

3.1實驗材料.........................................................................1

3.2實驗樣品.........................................................................1

3.2.1全血制備.......................................................................1

3.2.2血清制備.......................................................................1

3.2.3卵黃制備.......................................................................1

3.3實驗操作.........................................................................2

3.4結(jié)果判定.........................................................................2

I

DB21/T2827.5—2017

目次

前言................................................................................II

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3實驗準備...........................................................................1

3.1實驗材料.........................................................................