農(nóng)業(yè)銀行如何服務(wù)新農(nóng)村建設(shè)及農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)BT毒蛋白櫻桃的初步研究

農(nóng)業(yè)銀行如何服務(wù)新農(nóng)村建設(shè)黨中央、國(guó)務(wù)院從國(guó)有商業(yè)銀行改革、農(nóng)村金融體系改革和社會(huì)主義新農(nóng)村建設(shè)的大局出發(fā)，確定了農(nóng)行“面向三農(nóng)、整體改制、商業(yè)運(yùn)作、擇機(jī)上市”的改革原則，為農(nóng)行確立獨(dú)具特色的市場(chǎng)定位戰(zhàn)略指明了方向，符合中國(guó)國(guó)情和農(nóng)行實(shí)際。一、正確認(rèn)識(shí)服務(wù)新農(nóng)村建設(shè)的機(jī)遇和挑戰(zhàn)新農(nóng)村建設(shè)為農(nóng)行的發(fā)展提供了廣闊的市場(chǎng)空間。隨著新農(nóng)村建設(shè)的深入，現(xiàn)代農(nóng)業(yè)加快發(fā)展，農(nóng)業(yè)綜合生產(chǎn)能力將大為增強(qiáng)，縣域經(jīng)濟(jì)將進(jìn)入前所未有的快速發(fā)展期，基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)力度加大，特色資源開發(fā)成為新亮點(diǎn)，中小企業(yè)異軍突起并出現(xiàn)集群化發(fā)展趨勢(shì)。農(nóng)村居民收入穩(wěn)步增長(zhǎng)，農(nóng)民投資和消費(fèi)能力日益增強(qiáng)，生活水平顯著提高?，F(xiàn)代農(nóng)業(yè)和縣域經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，必然對(duì)金融服務(wù)產(chǎn)生旺盛的需求，預(yù)計(jì)到2020年，新農(nóng)村建設(shè)需要投入資金15～20萬(wàn)億元，縣域商業(yè)金融市場(chǎng)將快速擴(kuò)大。農(nóng)行具有堅(jiān)實(shí)的縣域經(jīng)營(yíng)基礎(chǔ)、功能全面的業(yè)務(wù)產(chǎn)品體系和先進(jìn)的科技支持系統(tǒng)，并建立了專業(yè)化的“三農(nóng)”服務(wù)體系，在發(fā)展縣域業(yè)務(wù)方面具有很多有利條件。農(nóng)行要把握社會(huì)主義新農(nóng)村建設(shè)的新機(jī)遇，在服務(wù)“三農(nóng)”中實(shí)現(xiàn)縣域業(yè)務(wù)的新突破和新發(fā)展。但是，在服務(wù)新農(nóng)村的過(guò)程中，仍會(huì)面臨很多挑戰(zhàn)。（一）農(nóng)村的金融生態(tài)環(huán)境亟待改善。當(dāng)前，農(nóng)村的信用環(huán)境欠佳，農(nóng)村金融市場(chǎng)還遠(yuǎn)沒(méi)有達(dá)到完全競(jìng)爭(zhēng)的狀態(tài)，市場(chǎng)缺乏信息透明度，正規(guī)金融機(jī)構(gòu)獲取信息的成本非常高，信息不對(duì)稱導(dǎo)致道德風(fēng)險(xiǎn)問(wèn)題突出，信用風(fēng)險(xiǎn)較大。農(nóng)村經(jīng)濟(jì)自身的特點(diǎn)加上嚴(yán)重的信用風(fēng)險(xiǎn)，使得我國(guó)農(nóng)村金融服務(wù)體系的弱點(diǎn)突出，再加上農(nóng)村金融的政策環(huán)境不寬松，像市場(chǎng)準(zhǔn)入和退出、利率市場(chǎng)化等對(duì)農(nóng)村金融機(jī)構(gòu)發(fā)展有重要影響的金融政策仍然偏緊，所以總體上依然不利于農(nóng)村金融機(jī)構(gòu)的發(fā)展和開展靈活的金融服務(wù)。（二）農(nóng)村經(jīng)濟(jì)自身缺乏足夠的吸引力。農(nóng)業(yè)是弱勢(shì)產(chǎn)業(yè)，具有高投入、低產(chǎn)出、受自然因素影響較大的客觀特征。由于農(nóng)村集體土地上沒(méi)有“兩證”，一些企業(yè)和農(nóng)民的許多財(cái)產(chǎn)即使流動(dòng)性很好，而且已經(jīng)為使用者或所有者帶來(lái)了巨大的收入流，但由于這些財(cái)產(chǎn)無(wú)法按照現(xiàn)行法規(guī)進(jìn)行認(rèn)證、登記，也無(wú)法通過(guò)現(xiàn)行的貸款準(zhǔn)則獲得信用。農(nóng)行為了改善財(cái)務(wù)狀況，進(jìn)行全行統(tǒng)籌、統(tǒng)一調(diào)度資金，支持能夠帶來(lái)收益的發(fā)達(dá)地區(qū)大項(xiàng)目，并且營(yíng)業(yè)網(wǎng)點(diǎn)收縮，信貸管理權(quán)限上收，保留的農(nóng)村營(yíng)業(yè)網(wǎng)點(diǎn)幾乎成為單純的儲(chǔ)蓄所，信貸業(yè)務(wù)萎縮，導(dǎo)致目前農(nóng)行支持力不足。二、堅(jiān)持商業(yè)運(yùn)作，找準(zhǔn)服務(wù)新農(nóng)村建設(shè)的著力點(diǎn)（一）多措并舉，發(fā)揮農(nóng)行縣域金融主渠道作用。一是面向“三農(nóng)”，抓住高端客戶。當(dāng)前，在農(nóng)村地區(qū)、特別是縣域，農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化龍頭企業(yè)、農(nóng)業(yè)科技園區(qū)、農(nóng)業(yè)基礎(chǔ)設(shè)施和規(guī)模較大的工商企業(yè)，都應(yīng)是農(nóng)行的高端客戶。只要抓住這部分高端客戶，農(nóng)行就可以取得較好的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。二是要不斷創(chuàng)新金融產(chǎn)品。針對(duì)當(dāng)前農(nóng)村金融產(chǎn)品較少，不能滿足農(nóng)村經(jīng)濟(jì)發(fā)展需求的現(xiàn)實(shí)，農(nóng)行可在農(nóng)村開辦銀行卡、代理、租賃、擔(dān)保、代保管等業(yè)務(wù)，滿足農(nóng)業(yè)多元化的金融服務(wù)要求。三是服務(wù)農(nóng)村商品流通體系建設(shè)，加大對(duì)“萬(wàn)村千鄉(xiāng)市場(chǎng)”等工程中大型農(nóng)村流通企業(yè)、農(nóng)產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)以及新興農(nóng)資連鎖超市的信貸投入，暢通城鄉(xiāng)商品雙向流動(dòng)渠道。四是加大與其他農(nóng)村金融機(jī)構(gòu)的合作。針對(duì)當(dāng)前流動(dòng)性過(guò)剩和農(nóng)村資金需求較大的現(xiàn)實(shí)，農(nóng)行可以對(duì)農(nóng)信社、農(nóng)商行等其他農(nóng)村金融機(jī)構(gòu)做貸款批發(fā)業(yè)務(wù)，間接地為農(nóng)戶提供貸款。（二）加快農(nóng)業(yè)銀行改革步伐，構(gòu)建適應(yīng)新農(nóng)村建設(shè)的經(jīng)營(yíng)機(jī)制。第一，完善農(nóng)業(yè)銀行法人治理結(jié)構(gòu)，股改上市后更要強(qiáng)化為“三農(nóng)”服務(wù)的市場(chǎng)定位和社會(huì)責(zé)任，充分利用農(nóng)行在縣域的資金、網(wǎng)絡(luò)和專業(yè)等方面的優(yōu)勢(shì)，更好地為“三農(nóng)”和縣域經(jīng)濟(jì)服務(wù)。第二，控制股改后的新風(fēng)險(xiǎn)，建立風(fēng)險(xiǎn)防范長(zhǎng)效機(jī)制。農(nóng)行股改上市后，風(fēng)險(xiǎn)控制的要求更高了，為此，要按照現(xiàn)代商業(yè)銀行要求，健全風(fēng)險(xiǎn)控制制度管理體系，堅(jiān)持風(fēng)險(xiǎn)覆蓋利潤(rùn)、“合規(guī)創(chuàng)造價(jià)值”理念不動(dòng)搖。第三，大力實(shí)施業(yè)務(wù)經(jīng)營(yíng)戰(zhàn)略轉(zhuǎn)型，走以質(zhì)取勝、有效發(fā)展的道路，在堅(jiān)定不移地拓展大城市、大客戶的同時(shí)，堅(jiān)定不移地發(fā)展縣域中高端業(yè)務(wù)，積極發(fā)展優(yōu)質(zhì)成長(zhǎng)型中小客戶。第四，適當(dāng)放寬權(quán)限，增強(qiáng)縣域行的自主權(quán)。上級(jí)行應(yīng)本著“風(fēng)險(xiǎn)可控———放權(quán)，業(yè)績(jī)突出———升格，業(yè)務(wù)增長(zhǎng)———增人”的指導(dǎo)原則，實(shí)施“有效配置、動(dòng)態(tài)管理、分類指導(dǎo)”的方針，鼓勵(lì)和支持縣域農(nóng)行進(jìn)一步做大做強(qiáng)。（三）推行精細(xì)化管理，促進(jìn)縣域貸款業(yè)務(wù)的拓展。一是探索適應(yīng)新農(nóng)村特點(diǎn)的個(gè)性化信貸運(yùn)作模式，開發(fā)適應(yīng)“三農(nóng)”特點(diǎn)的貸款產(chǎn)品。要研究農(nóng)村經(jīng)濟(jì)、承貸主體的特點(diǎn)、貸款擔(dān)保的實(shí)現(xiàn)途徑，“量身定做”符合“三農(nóng)”特點(diǎn)的貸款產(chǎn)品，在有適當(dāng)?shù)膿?dān)保時(shí)，適度降低貸款準(zhǔn)入門檻。二是提高貸款運(yùn)作效率。要適度擴(kuò)大授權(quán)，簡(jiǎn)化操作流程，提高審批效率，降低貸款時(shí)間成本。三是在風(fēng)險(xiǎn)可控的前提下，通過(guò)簡(jiǎn)化貸款手續(xù)，改進(jìn)貸款方式，減少中介“四費(fèi)”（評(píng)估費(fèi)、登記費(fèi)、擔(dān)保費(fèi)、保險(xiǎn)費(fèi)），降低貸款準(zhǔn)入成本。四是針對(duì)“三農(nóng)”貸款產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)概率較高的特點(diǎn)，對(duì)“三農(nóng)”貸款營(yíng)銷業(yè)績(jī)考核方面給予適當(dāng)傾斜，對(duì)貸款風(fēng)險(xiǎn)的責(zé)任追究應(yīng)制定適合“三農(nóng)”貸款特點(diǎn)的免責(zé)條款。五是創(chuàng)新投資理財(cái)產(chǎn)品。要結(jié)合農(nóng)村企業(yè)和農(nóng)民的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)出易理解、易操作的理財(cái)產(chǎn)品。只有在金融產(chǎn)品的細(xì)分和服務(wù)方式上下功夫，才能提升在農(nóng)村金融服務(wù)的水平和覆蓋面?；蚬こ陶n題設(shè)計(jì)課題名稱：農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)BT毒蛋白櫻桃的初步研究班級(jí)：姓名：學(xué)號(hào)：課題基本信息研究課題摘要研究目標(biāo)、內(nèi)容、方法及意義Bt毒蛋白基因是目前世界上應(yīng)用最為廣泛的抗蟲基因,已經(jīng)被轉(zhuǎn)入多種作物中。其中,棉花、玉米、馬鈴薯等轉(zhuǎn)Bt毒蛋白基因抗蟲作物已經(jīng)商品化生產(chǎn),創(chuàng)造了可觀的經(jīng)濟(jì)效益。結(jié)合轉(zhuǎn)Bt毒蛋白基因技術(shù)的成熟以及轉(zhuǎn)Bt毒蛋白基因抗蟲作物的培育現(xiàn)狀,以及櫻桃易受蟲害危害的事實(shí)，主要研究運(yùn)用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將Bt毒蛋白基因轉(zhuǎn)入櫻桃中，以獲得轉(zhuǎn)Bt毒蛋白的抗蟲櫻桃。以此提高櫻桃的產(chǎn)量及減少農(nóng)藥對(duì)人體的危害。同時(shí)降低櫻桃昂貴的價(jià)格，使櫻桃成為廣大消費(fèi)者食用的佳品。課題研究目的和意義蟲害是制約農(nóng)作物高產(chǎn)的重要因素，世界每年因蟲害造成的損失約占農(nóng)作物總產(chǎn)量的15%以上。化學(xué)農(nóng)藥的施用在減少蟲害的同時(shí)引起一系列副作用，如提高成本、污染環(huán)境、誘導(dǎo)害蟲產(chǎn)生抗藥性、引起次要害蟲的大發(fā)生等。而通過(guò)基因工程手段培育抗蟲新品種可從根本上解決問(wèn)題，對(duì)哺乳動(dòng)物和一些有益昆蟲不產(chǎn)生毒害作用，且不造成環(huán)境污染。人們已從細(xì)菌中、植物本身以及昆蟲體內(nèi)發(fā)現(xiàn)并分離到許多抗蟲基因，其中棉花、玉米、馬鈴薯等轉(zhuǎn)Bt毒蛋白基因抗蟲作物已經(jīng)商品化生產(chǎn),創(chuàng)造了可觀的經(jīng)濟(jì)效益。櫻桃屬于薔薇科落葉喬木果樹，我國(guó)華東和河北、山西、河南、湖北、四川等地均有栽培，夏初果實(shí)成熟時(shí)采收，洗凈鮮用。櫻桃醫(yī)療保健價(jià)值頗高。櫻桃味甘微酸，入脾、肝經(jīng)。補(bǔ)中益氣，祛風(fēng)勝濕，主水谷痢，止泄精。主治病后體虛氣弱，氣短心悸，倦怠食少，咽干口渴，及風(fēng)濕腰腿疼痛，四肢不仁，關(guān)節(jié)屈伸不利，凍瘡等病癥。常食櫻桃可補(bǔ)充體內(nèi)對(duì)鐵元素量的需求，促進(jìn)血紅蛋白再生，既可防治缺鐵性貧血，又可增強(qiáng)體質(zhì)，健腦益智。給小兒飲用櫻桃汁能夠預(yù)防感染麻疹。櫻桃核則具有發(fā)汗透疹解毒的作用。櫻桃可祛風(fēng)勝濕、殺蟲櫻桃性溫?zé)?，兼具補(bǔ)中益氣之功，能祛風(fēng)除濕，對(duì)風(fēng)濕腰腿疼痛有良效。櫻桃樹根還具有很強(qiáng)的驅(qū)蟲、殺蟲作用，可驅(qū)殺蛔蟲、蟯蟲、絳蟲等。櫻桃可以治療燒燙傷，起到收斂止痛，防止傷處起泡化膿的作用。同時(shí)櫻桃還能治療輕、重度凍傷。櫻桃所含蛋白質(zhì)、糖、磷、胡蘿卜素、維生素C等均比蘋果、梨高，尤其含鐵量高，常用櫻桃汁涂擦面部及皺紋處，能使面部皮膚紅潤(rùn)嫩白，去皺消斑。在水果家族中，一般鐵的含量較低，櫻桃卻卓然不群，一枝獨(dú)秀：每百克櫻桃中含鐵量多達(dá)59毫克，居于水果首位；維生素A含量比葡萄、蘋果、橘子多4～5倍。2.含糖、枸椽酸、酒石酸、胡蘿卜素、維生素C、鐵、鈣、磷等成分。櫻桃的栽培過(guò)程中，噴灑了大量的農(nóng)藥和其他化學(xué)物質(zhì)，其殘留的農(nóng)藥和化學(xué)物質(zhì)在人食用之后會(huì)對(duì)人體造成巨大的危害。櫻桃的栽培過(guò)程中主要害蟲有介殼蟲、卷葉蛾、綠盲蝽、梨小食心蟲、金龜子、梨花網(wǎng)蝽（梨軍配蟲）、象甲、葉螨（山楂葉螨、二斑葉螨等）、葉蟬等。而且對(duì)櫻桃樹的用藥也分為地面處理用藥和樹上用藥，不僅造成農(nóng)藥殘留，還會(huì)造成土壤和水源的污染和環(huán)境的破壞。隨著現(xiàn)代分子生物技術(shù)的發(fā)展，我們擁有了將櫻桃樹轉(zhuǎn)基因的條件。擁有了新的方法來(lái)減少櫻桃所遭受的蟲害，即轉(zhuǎn)Bt基因櫻桃。轉(zhuǎn)Bt基因櫻桃是將人工分離和修飾過(guò)的Bt毒蛋白基因?qū)氲綑烟覙浠蚪M中。我們主要是將蘇云金芽孢桿菌中可以產(chǎn)生殺蟲晶體蛋白的基因片段導(dǎo)入櫻桃樹生殖細(xì)胞，并將其培育成成熟植株。，使這些櫻桃樹具有殺蟲能力。蘇云金芽孢桿菌是一種分布廣泛的革蘭氏陽(yáng)性土壤細(xì)菌，在形成芽孢的同時(shí)會(huì)在菌體的一端或兩端形成伴孢晶體，即殺蟲晶體蛋白。伴孢晶體被敏感昆蟲幼蟲吞食后，在腸道堿性環(huán)境和蛋白酶作用下釋放出的毒性肽與昆蟲中腸上皮細(xì)胞的特異受體結(jié)合形成離子通道，破壞細(xì)胞滲透平衡，使細(xì)胞腫脹破裂，最終導(dǎo)致昆蟲死亡。其對(duì)鱗翅目、鞘翅目、雙翅目和膜翅目等多種重要的農(nóng)林業(yè)害蟲都具毒殺作用。國(guó)內(nèi)外同類研究現(xiàn)狀、水平及發(fā)展趨勢(shì)泰國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)的AnonThammasittirong和TipvadeeAttathom通過(guò)PCR技術(shù)，檢測(cè)了泰國(guó)當(dāng)?shù)氐奶K云金芽孢桿菌中殺蟲晶體蛋白基因。這篇文獻(xiàn)中，兩位科學(xué)家運(yùn)用PCR技術(shù)對(duì)泰國(guó)不同地區(qū)，不同生態(tài)環(huán)境的134種蘇云金芽孢桿菌菌群進(jìn)行了殺蟲晶體蛋白基因序列的檢測(cè)。并將得到的結(jié)果與前人所做的進(jìn)行了對(duì)比。兩位科學(xué)家先將菌株在37攝氏度條件下，在天然培養(yǎng)基瓊脂平板上培養(yǎng)16小時(shí)。然后將一環(huán)菌體轉(zhuǎn)移到3ml的LB培養(yǎng)基中，震蕩培養(yǎng)一夜。之后將其兩次離心，上清液加入到苯酚中再進(jìn)行離心。再經(jīng)過(guò)氯仿、乙醇、TE緩沖液等的處理，最后得到進(jìn)行PCR測(cè)定需要的DNA。由前人研究已知基因Cry1,Cry2和Cry9對(duì)產(chǎn)生特異性殺死鱗翅目昆蟲的晶體蛋白是必須的。通過(guò)PCR檢測(cè)，分析得到的三種基因的分布頻率與其他的研究相比較多。兩位科學(xué)家分析認(rèn)為這是由于他們使用的探針不同所致。研究結(jié)果還得到了基因Cry1的不同亞型的分布頻率。以及基因Cry2的分布頻率，并發(fā)現(xiàn)，其在各個(gè)地區(qū)的分布頻率都很高。除此之外，許多因素都會(huì)影響B(tài)t蛋白。例如，揚(yáng)州大學(xué)園藝與植物保護(hù)學(xué)院的徐健、劉琴、譚永安和祝樹德研究了粘蟲顆粒體病毒對(duì)蘇云金桿菌的增效特性及對(duì)Bt毒蛋白的降解活化作用。許多作物，例如小麥、甘薯、谷子、花生等，都通過(guò)導(dǎo)入Bt蛋白基因來(lái)提高抗蟲性。其中玉米是應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)較早的作物之一。玉米是世界三大糧食作物之一，也是重要的飼料及工業(yè)原料作物。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界有玉米害蟲約350種，其中以鱗翅目害蟲一玉米螟分布最廣泛、危害最嚴(yán)重，是玉米產(chǎn)量和品質(zhì)的重要影響因素。在中國(guó)，玉米螟在全國(guó)各玉米產(chǎn)區(qū)均有不同程度的發(fā)生，常年發(fā)生面積達(dá)一千三百多萬(wàn)公頃，一般年份減產(chǎn)lO％～30％，嚴(yán)重時(shí)減產(chǎn)超過(guò)50％，危害損失五十多億千克。近年來(lái)，隨著玉米種植面積的擴(kuò)大，加之全球氣候變暖，玉米螟安全越冬基數(shù)增高，導(dǎo)致玉米螟發(fā)生呈加重趨勢(shì)。由于這種情況，1990年，美國(guó)孟山都公司和迪卡公司開始研究轉(zhuǎn)基因玉米。1993年，Koziel等人工合成了一個(gè)G+C含量達(dá)到65％的結(jié)構(gòu)基因(與野生型CryL4(6)基因的同源性為65％)，利用基因槍技術(shù)把該合成基因?qū)胗衩灼贩N，獲得2個(gè)轉(zhuǎn)基因玉米品系能夠抵御歐洲玉米蜞在生長(zhǎng)季節(jié)的反復(fù)危害。1996年抗蟲轉(zhuǎn)基因玉米開始進(jìn)入商業(yè)化生產(chǎn)階段，1999年即有3種轉(zhuǎn)Bt毒蛋白基因玉米在美國(guó)進(jìn)行商業(yè)化生產(chǎn)。轉(zhuǎn)基因玉米商業(yè)化生產(chǎn)以來(lái)，全球共有17個(gè)國(guó)家種植轉(zhuǎn)基因玉米，其中有7個(gè)歐盟國(guó)家正式商業(yè)化種植抗蟲Bt玉米。國(guó)內(nèi)在抗蟲轉(zhuǎn)基因玉米研究方面雖然起步較晚，但進(jìn)展較快。目前，國(guó)內(nèi)外轉(zhuǎn)脅毒蛋白基因玉米的主要轉(zhuǎn)化方法有：基因槍法、農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、子房注射法、花粉介導(dǎo)法超聲波法等?；驑尫ㄓ址Q粒子轟擊，高速粒子噴射技術(shù)或基因槍轟擊技術(shù)。其基本原理是通過(guò)動(dòng)力系統(tǒng)將帶有基因的金屬顆粒（金?；蜴u粒），將DNA吸附在表面，以一定的速度射進(jìn)植物細(xì)胞，由于小顆粒穿透力強(qiáng)，故不需除去細(xì)胞壁和細(xì)胞膜而進(jìn)入基因組，從而實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的目的。國(guó)內(nèi)外許多科學(xué)家已經(jīng)運(yùn)用這種方法成功的將Bt蛋白基因?qū)胗衩字?。農(nóng)桿菌介導(dǎo)法主要以植物的分生組織和生殖器官作為外源基因?qū)氲氖荏w，通過(guò)真空滲透法、浸蘸法及注射法等方法使農(nóng)桿菌與受體材料接觸，以完成可遺傳細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，然后利用組織培養(yǎng)的方法培育出轉(zhuǎn)基因植株，并通過(guò)抗生素篩選和分子檢測(cè)鑒定轉(zhuǎn)基因植株后代。農(nóng)桿菌有這樣的作用是由于它的細(xì)胞中分別含有Ti質(zhì)粒和Ri質(zhì)粒，其上有一段T-DNA，農(nóng)桿菌通過(guò)侵染植物傷口進(jìn)入細(xì)胞后，可將T-DNA插入到植物基因組中。因此，農(nóng)桿菌是一種天然的植物遺傳轉(zhuǎn)化體系。隨著轉(zhuǎn)Bt毒蛋白基因作物的大規(guī)模種植，許多人開始擔(dān)心它對(duì)人類及生態(tài)環(huán)境的影響。許多人質(zhì)疑，在殺死昆蟲的同時(shí)，對(duì)人也會(huì)產(chǎn)生毒性。我認(rèn)為，由導(dǎo)入基因產(chǎn)生的毒蛋白對(duì)人是基本無(wú)害的。Bt殺蟲晶體蛋白被敏感昆蟲取食后，在昆蟲中腸堿性和還原性條件下，溶解為前毒素，然后被蛋白酶水解為抗酶活性毒素分子，該活性毒素分子可與中腸上皮細(xì)胞紋緣膜上特異受體結(jié)合，插入膜內(nèi)使細(xì)胞膜穿孔，破壞消化道細(xì)胞的離子、滲透壓平衡，最終導(dǎo)致昆蟲死亡。而這種酶在人體內(nèi)是沒(méi)有的。美國(guó)國(guó)家科學(xué)、工程和醫(yī)學(xué)學(xué)院也發(fā)布了一份大型報(bào)告，試圖回答一些轉(zhuǎn)基因領(lǐng)域“令人困惑的”問(wèn)題。這份得到學(xué)術(shù)界贊許的報(bào)告再次確認(rèn)，轉(zhuǎn)基因食品對(duì)健康無(wú)不利影響，可安全食用。但同時(shí)認(rèn)為，轉(zhuǎn)基因技術(shù)不像支持者所宣稱的那樣有助提高糧食增產(chǎn)率。這份報(bào)告指出，從上世紀(jì)80年代開始，基因工程技術(shù)被應(yīng)用于使植物產(chǎn)生特定的特性，如延長(zhǎng)水果保存時(shí)間、提高食品維生素含量或增強(qiáng)作物抗病能力等，但只有兩種轉(zhuǎn)基因特性得到廣泛的商業(yè)應(yīng)用，即抗除草劑與抗蟲害。今天最廣泛種植的轉(zhuǎn)基因作物主要有3種，分別是大豆、棉花和玉米。參考文獻(xiàn)：植物抗蟲基因工程的研究進(jìn)展李海燕，朱延明，馬鳳鳴解讀最新美國(guó)轉(zhuǎn)基因報(bào)告新華社三、課題研究采用的主要方法和技術(shù)路線（一）主要研究?jī)?nèi)容1、Bt毒蛋白基因的提取:提取方法：TritonX-IO0溫和裂解法。提取蘇云芽孢桿菌質(zhì)粒上的編碼Bt毒蛋白基因。這種Bt毒蛋白基因位于質(zhì)粒DNA上，蘇云金桿菌質(zhì)粒DNA含量極其豐富(從1.5MD到大于130MD)，組成極其多樣化，不僅不同變種間而且同一變種不同菌株間，其質(zhì)粒組成也不同，所以Bt質(zhì)粒DNA的提取一直是實(shí)驗(yàn)中較難解決的問(wèn)題．以往多采用堿裂解法和SDS裂解法，但在質(zhì)粒DNA質(zhì)量和產(chǎn)量、實(shí)驗(yàn)重復(fù)性等方面有一些缺陷。改進(jìn)的TritonX-IO0溫和裂解法提取Bt質(zhì)粒DNA，取得較理想的效果。菌株:蘇云芽孢桿菌試劑：提取質(zhì)粒DNA所用試劑為國(guó)產(chǎn)分析純；RNase；DNAmolecularweightMarker。儀器：離心機(jī)。蘇云金桿菌質(zhì)粒DNA的提?。簩⑻K云金桿菌株接種在LB平板上，培養(yǎng)16～18h后，取單菌落于3mlLB液體培養(yǎng)基中，30℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。取培養(yǎng)液于Ep管中。以4000r/min離心5min，去掉上清液；加入100ul的TES洗滌菌體，以4000r/min離心2min，棄上清液。LB：胰化蛋白胨1%，酵母提取物0.5%，NaCl1%。TES：50mmol/LTris-HCl，5mmol/LEDTA，50mmol/LNaCl，pH8.0。TritonX-100裂解法提取質(zhì)粒DNA于Ep管內(nèi)加入100ul的溶液A，37℃水溶6Omin；加入溶液B，37℃水浴90min，每隔30min搖勻一次；加入40ul的5mmol/LNaC1，混勻，室溫放置2min；用等體積飽和酚連續(xù)抽取3次，再用酚、氯仿1和氯仿2各抽取一次；離心棄上清液，加兩倍體積無(wú)水乙醇沉淀，-2O℃放置1h，離心，再用70％乙醇洗滌，真空抽干，即得質(zhì)粒DNA；用2OulTE(10mmol/LTris-HCl，1mmol/LEDTA，DH80)緩沖液溶解質(zhì)粒DNA后，于-20℃保存?zhèn)溆?。溶液A：5mg/mlLysozyme，100ug/mlRNase溶于TES。溶液B：0.6％TritonX—100，50mmol/LTris-HCl，pH8.0，10mmol／LEDTA，100ug/LPronaseK.Bt毒蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建：酶和生化試劑：表達(dá)載體質(zhì)粒pBI121；限制性內(nèi)切酶BamHI和SacI，TaqDNA聚合酶，T4DNA連接酶，質(zhì)粒提取試劑盒，膠回收試劑盒，其他生化試劑均為分析純?；蛞铮篜rimer1：5′一AACAGTGCCCTFACAACC一3′Primer2：5′一TCCCGTCAAGAACAGATAG一3′主要儀器：離心機(jī)，恒溫水浴搖床，PCR儀，紫外分光光度計(jì)，電泳儀。Bt基因的克隆及測(cè)序：將Bt基因和載體質(zhì)粒pBI121用限制性內(nèi)切酶BamHI和SacI進(jìn)行雙酶切，把切下來(lái)的基因與測(cè)序載體用T4DNA連接酶在4℃下連接過(guò)夜，然后將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，涂平板后挑單菌落提取質(zhì)粒。提取質(zhì)粒后，分別酶切回收脅Bt基因和去掉gus基因的片斷，然后用T4連接酶連接。酶切體系為質(zhì)粒3.0uL，0.5×kBuffer(10×)3.0uL，SacI0.5uL，BamHI0.5uL，ddH?O13.0uL，總體積20．0uL，37℃保溫4h。連接體系為Bt基因片斷10.0uI，載體質(zhì)粒pBI121(去除gus基因)片斷2.0uL，T4DNA連接酶1.0uL，T4buffer(10×)2.0uL，ddH?O5.0L，總體積20.0uI，4℃連接過(guò)夜。將重組質(zhì)粒pBI121—Bt轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中，用PCR方法和酶切檢測(cè)。PCR反應(yīng)條件為ddH?O15.0uL，buffer2．5uL，Mg2+2.0uL，dNTP2.0uL，Primerl1.0uL，Primer21.0uL，TagDNA0.5uL，模板1.0uL，總體積25.0ulPCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性10min，94℃變性1min．53℃復(fù)性1min，72℃延伸2．5min，循環(huán)30次，72℃保溫5min，0.8％瓊脂糖凝膠電泳。采用凍融法將含有pBI121—Bt的大腸桿菌轉(zhuǎn)化到根癌農(nóng)桿菌中。載體pBll21-Bt基因的構(gòu)建3、受體材料的準(zhǔn)備：櫻桃葉片愈傷組織的誘導(dǎo)：將櫻桃幼嫩的葉片切下，其邊長(zhǎng)為3CM的正方形一塊,用75%乙醇滅菌5min,再用2.5%的次氯酸鈉滅菌處理不同時(shí)間(40min,37min,30min和25min),以確定最佳滅菌時(shí)間,滅菌后用無(wú)菌水沖洗6～8次,于MS固體培養(yǎng)基上28℃避光培養(yǎng),8天、10天。12天、14天依次查看愈傷組織生長(zhǎng)情況。將愈傷組織進(jìn)行繼代培養(yǎng),得到胚性愈傷組織。4、轉(zhuǎn)化櫻桃葉愈傷組織：材料：含Bt基因的根癌農(nóng)桿菌,櫻桃胚性愈傷組織步驟：用AB固體培養(yǎng)基+氯霉素25mg/L+利福平20mg/L+AS20mg/L培養(yǎng)農(nóng)桿菌,在20℃下培養(yǎng)5～6d。用無(wú)菌勺子輕輕刮下培養(yǎng)的農(nóng)桿菌,放入AAM液體培養(yǎng)基中(加有2mg/L2,4-D,0.7g/L脯氨酸,20mg/LAS),在80rpm/min,27℃下,搖蕩培養(yǎng)4h。將挑好的櫻桃葉胚性愈傷組織放入錐形瓶,菌液倒入另一