高效液相色譜

第17章高效液相色譜17.1概述17.2HPLC儀器包括：高壓輸液裝置;進(jìn)樣系統(tǒng);別離系統(tǒng);檢測(cè)系統(tǒng);輔助系統(tǒng)17.3流動(dòng)相和固定相簡(jiǎn)介17.4高效液相色譜方法各論分配色譜、吸附色譜、離子交換色譜、尺寸排阻色譜和親和色譜17.1概述高效液相色譜(HPLC)是以溶劑液體為流動(dòng)相的色譜方法。按照固定相不同可分為：液液分配色譜；吸附色譜(液固色譜)；離子交換色譜；尺寸排阻色譜(凝膠滲透色譜)。此外，還有親和色譜、平板色譜(薄層色譜)等。早期液相色譜，包括Tswett的工作，都是在直徑1~5cm,長(zhǎng)50~500cm的玻璃柱中進(jìn)行的。為保證有一定的柱流速，填充的固定相顆粒直徑多在150~200m范圍內(nèi)。即使這樣，流速仍然很低(<1mL/min)，分析時(shí)間仍然很長(zhǎng)！當(dāng)加壓增加流速(真空或空氣泵)時(shí)，盡管分析時(shí)間減少，但柱塔板高度Hmin也相應(yīng)增加了！或者說(shuō)柱效下降了。為了解決分析時(shí)間及柱效問(wèn)題，人們認(rèn)識(shí)到：最為有效地增加柱效的唯一方法是減小填充物的粒徑〔3~10m〕！直到60年代，由于在高壓下操作的液壓設(shè)備、高效固定相以及高靈敏檢測(cè)器的出現(xiàn)及開(kāi)展，才徹底解決了分析時(shí)間及柱效的問(wèn)題。即所謂的高效液相色譜技術(shù)才真正得到廣泛應(yīng)用。1.高效液相色譜與經(jīng)典液相色譜方法的比較高速：HPLC采用高壓輸液設(shè)備，流速大增加，分析速度極快，只需數(shù)分鐘；而經(jīng)典方法靠重力加料，完成一次分析需時(shí)數(shù)小時(shí)。高效：填充物顆粒極細(xì)且規(guī)那么，固定相涂漬均勻、傳質(zhì)阻力小，因而柱效很高?？梢栽跀?shù)分鐘內(nèi)完成數(shù)百種物質(zhì)的別離。高靈敏度：檢測(cè)器靈敏度極高：UV——10-9g,熒光檢測(cè)器——10-11g。2.HPLC與GC的比較分析對(duì)象及范圍：GC分析只限于氣體和低沸點(diǎn)的穩(wěn)定化合物，而這些物質(zhì)只點(diǎn)有機(jī)物總數(shù)的20%；HPLC可以分析高沸點(diǎn)、高分子量的穩(wěn)定或不穩(wěn)定化合物，這類物質(zhì)占有機(jī)物總數(shù)的80%。流動(dòng)相的選擇：GC采用的流動(dòng)相中為有限的幾種“惰性”氣體，只起運(yùn)載作用，對(duì)組分作用??；HPLC采用的流動(dòng)相為液體或各種液體的混合，可供選擇的時(shí)機(jī)多。它除了起運(yùn)載作用外，還可與組分作用，并與固定相對(duì)組分的作用產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)，即流動(dòng)相對(duì)別離的奉獻(xiàn)很大，可通過(guò)溶劑來(lái)控制和改進(jìn)別離。操作溫度：GC需高溫；HPLC通常在室溫下進(jìn)行。3.應(yīng)用由于HPLC別離分析的高靈敏度、定量的準(zhǔn)確性、適于非揮發(fā)性和熱不穩(wěn)定組分的分析，因此，在工業(yè)、科學(xué)研究，尤其是在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)等方面應(yīng)用極為廣泛。如氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸、烴、碳水化合物、藥品、多糖、高聚物、農(nóng)藥、抗生素、膽固醇、金屬有機(jī)物等分析，大多是通過(guò)HPLC來(lái)完成的。右圖是各種HPLC方法的應(yīng)用范圍及對(duì)象極性增加不溶于水溶于水非極性離子非離子極性吸附反向分配分配正向分配離子交換尺寸排阻凝膠滲透凝膠過(guò)濾分子量17.2HPLC儀器HPLC儀器包括：高壓輸液裝置;進(jìn)樣系統(tǒng);別離系統(tǒng);檢測(cè)系統(tǒng);此外還配有梯度淋洗、自動(dòng)進(jìn)樣和數(shù)據(jù)處理裝置。其工作過(guò)程如下圖。He儲(chǔ)液瓶分布器過(guò)濾2

m高壓泵入口檢查出口檢查脈流消除抽氣過(guò)濾器反壓調(diào)節(jié)壓力計(jì)注樣閥分離柱到檢測(cè)器HPLC儀器詳解1.高壓輸液系統(tǒng)1〕貯液器：1-2L的玻璃瓶，配有溶劑過(guò)濾器(Ni合金)，其孔很約2m，可防止顆粒物進(jìn)行泵內(nèi)。2〕脫氣：超聲波脫氣或真空加熱脫氣。溶劑通過(guò)脫氣器中的脫氣膜，相對(duì)分子量小的氣體透過(guò)膜從溶劑中除去。3〕高壓泵：對(duì)輸液泵的要求：密封性好、輸液流量穩(wěn)定無(wú)脈動(dòng)、可調(diào)范圍寬、耐腐蝕。輸液泵種類：恒壓型和恒流型。恒壓泵(類似于風(fēng)箱)可迅速獲得高壓，適于柱的勻漿填充。但因泵腔體積大，在往復(fù)推動(dòng)時(shí)，會(huì)引起脈動(dòng)，且輸出流量隨色譜系統(tǒng)阻力〔主要是柱填充物〕變化而變化，現(xiàn)已較少使用。恒流型溶劑流量恒定，與柱填充情況無(wú)關(guān)，使用較多。有機(jī)械注射式和機(jī)械往復(fù)式兩種。應(yīng)用最多的是機(jī)械往復(fù)式恒流泵(見(jiàn)以下圖。每分鐘往復(fù)25~100次，因此脈動(dòng)小。對(duì)流量變化敏感的檢測(cè)器也會(huì)有噪聲干擾，此時(shí)可連接一脈動(dòng)阻尼器)。馬達(dá)往復(fù)式拉動(dòng)密封溶劑球閥脈動(dòng)阻尼器到色譜柱機(jī)械往復(fù)柱塞泵示意圖4〕梯度淋洗裝置：在別離過(guò)程中逐漸改變流動(dòng)相組成的裝置。如果只有一個(gè)泵，可采用低壓混合設(shè)計(jì)〔將兩種或以上的溶劑按一定比例混合，再由高壓泵輸出〕；如果有兩個(gè)或以上泵，調(diào)節(jié)各自的流量，在高壓下混合。2.進(jìn)樣系統(tǒng)與GC相比，HPLC柱要短得多，因此由于柱本身所產(chǎn)生的峰形展寬相對(duì)要小些。即，HPLC的展寬多因一些柱外因素引起。這些因素包括：進(jìn)樣系統(tǒng)、連接管道及檢測(cè)器的死體積。進(jìn)樣裝置包括兩種。1〕隔膜注射進(jìn)樣：使用微量注射器進(jìn)樣。裝置簡(jiǎn)單、死體積小。但進(jìn)樣量小且重現(xiàn)性差。2〕高壓進(jìn)樣閥：目前最常用的為六通閥。由于進(jìn)樣量可由樣品管控制，因此進(jìn)樣準(zhǔn)確，重復(fù)性好，如圖。裝入樣品出口進(jìn)樣采樣環(huán)泵入溶劑進(jìn)色譜柱3.色譜柱1〕對(duì)色譜柱的要求：內(nèi)壁光滑的優(yōu)質(zhì)不銹鋼柱，柱接頭的死體積盡可能小。柱長(zhǎng)多為15~30cm，內(nèi)徑為4~5mm(尺寸排阻色譜柱常大于5mm，制備色譜柱內(nèi)徑更大)；2〕柱的填充：主要采用勻漿法。根據(jù)使用勻漿試劑的性質(zhì)不同可分為：平衡密度法：即使溶劑密度和填充顆粒密度相近，此時(shí)顆粒沉降速度趨于0。常用的勻漿試劑有四氯乙烯、四溴乙烷和二碘甲烷等；非平衡密度法：當(dāng)采用粘度較大的試劑，如CC4，CH3OH,丙酮，二氧雜環(huán)已烷、THF等。填充方法：填充時(shí)，按上述方法制作勻漿液，用流動(dòng)相充滿色譜柱及其延長(zhǎng)管中，然后將勻漿液倒入勻漿填充器，在較高壓力下迅速將其注入色譜柱內(nèi)。要求填充速度快(防凝聚、沉降或結(jié)塊)、且無(wú)空氣進(jìn)入(影響填充均勻性)。4.檢測(cè)器液相色譜檢測(cè)器包括紫外吸收、熒光發(fā)射、示差折光和安培檢測(cè)器等。1〕紫外檢測(cè)器其檢測(cè)原理和UV-Vis方法一樣。只是，此時(shí)所采用的吸收池為微量吸收池，通常其光程為2-10mm,體積約為1~10L。HPLC分析中，約有80%的物質(zhì)可以在254nm或280nm處產(chǎn)生紫外吸收。因此該類檢測(cè)器應(yīng)用很廣。在選擇測(cè)量波長(zhǎng)時(shí)注意：溶劑必須能讓所選擇的光透過(guò)，即所選波長(zhǎng)不能小于溶劑的最低使用波長(zhǎng)。石英窗接色譜柱UV光電倍增管廢液波長(zhǎng)可的松氟美松皮質(zhì)酮快速掃描—光電二極管陣列〔PDA〕檢測(cè)所獲得的三維色譜-光譜圖2）熒光檢測(cè)器許多有機(jī)物具熒光活性，尤其是芳香族化合物具有很強(qiáng)的活性。熒光檢測(cè)器是一種選擇性很強(qiáng)的檢測(cè)器，其靈敏度比UV檢測(cè)器高2~3個(gè)數(shù)量級(jí)。3）示差折光檢測(cè)器原理：利用兩束相同角度的光照射溶劑相和樣品+溶劑相，利用二者對(duì)光的折射率不同，其中一束（通常是通過(guò)樣品+溶劑相）光因?yàn)榘l(fā)生偏轉(zhuǎn)造成兩束光的強(qiáng)度差發(fā)生變化，將此差示信號(hào)放大并記錄，該信號(hào)代表樣品的濃度。為通用型檢測(cè)器，靈敏度為10-7g/mL。但對(duì)溫度變化敏感，且不適于梯度淋洗。光源調(diào)零光學(xué)零參比樣品平面鏡透鏡光電轉(zhuǎn)換記錄儀放大器遮光板4〕安培檢測(cè)器由恒電位儀和一薄層反響池〔體積為1~5L〕組成。如圖。該檢測(cè)器是利用待測(cè)物流入反響池時(shí)在工作電極外表發(fā)生氧化或復(fù)原反響，兩電極間就有電流通過(guò)，此電流大小與待測(cè)物濃度成正比。采用安培檢測(cè)器時(shí)，流動(dòng)相必須含有電解質(zhì)，且呈化學(xué)隋性。它最適于與反相色譜匹配。但此檢測(cè)器只能檢測(cè)具有電活性的物質(zhì)。接參比電極和對(duì)電極接色譜柱Teflon塑料塊1cm工作電極(Pt,Au,碳糊)5〕電導(dǎo)檢測(cè)器電導(dǎo)檢測(cè)器主要用于離子色譜的檢測(cè)。其原理是基于待測(cè)物在一些介質(zhì)中電離后所產(chǎn)生的電導(dǎo)〔電阻的倒數(shù)〕變化來(lái)測(cè)量電離物質(zhì)的含量。電導(dǎo)檢測(cè)器的主要部件是電導(dǎo)池。其響應(yīng)受溫度影響較大，因此需要將電導(dǎo)池置于恒溫箱中。另外，當(dāng)pH>7時(shí)，該檢測(cè)器不夠靈敏。其它檢測(cè)器還包括：MS、IR、Evaporativelightscatteringdetector(光散射)、極譜等。17.3HPLC流動(dòng)相和固定相簡(jiǎn)介一、流動(dòng)相與GC流動(dòng)相不同，HPLC流動(dòng)相為溶劑，它既有運(yùn)載作用，又和固定相一樣，參予對(duì)組分的競(jìng)爭(zhēng)，因此溶劑的選擇對(duì)別離十分重要。理想的溶劑應(yīng)有以下特性：1〕對(duì)待測(cè)物具一定極性和選擇性；2〕使用UV檢測(cè)器時(shí)，溶劑截止波長(zhǎng)要小于測(cè)量波長(zhǎng)(為什么？)；使用折光率檢測(cè)器，溶劑的折光率要與待測(cè)物的折光率有較大差異；3〕高純度。否那么基線不穩(wěn)或產(chǎn)生雜峰，同時(shí)可使截止波長(zhǎng)增加；4〕化學(xué)穩(wěn)定性好；5〕適宜的粘度。粘度過(guò)高，柱壓增加；過(guò)低，易產(chǎn)生氣泡。二、固定相載體由于各種HPLC別離方法的流動(dòng)相均為液體，因此，HPLC通常是按照固定相載體或固定液的不同來(lái)分類的。1.按承受壓力分剛性固體：SiO2為基質(zhì)，耐壓為7.0×108~1.0×109Pa?？芍瞥芍睆?、形狀和孔隙深度不同的顆粒；主要用于吸附、分配和鍵合色譜；硬膠：以聚合物為基質(zhì)(常用苯乙烯與二乙烯苯交聯(lián)而成)，耐壓上限為3.5×108Pa,主要用于離子交換和尺寸排阻色譜。2.按孔隙深度分外表多孔型：以實(shí)心玻璃珠為基體，在基體外表覆蓋一層多孔活性材料(如硅膠、氧化鋁、離子交換劑、分子篩、聚酰胺等)。外表多孔型固定相的顆粒大(易裝柱)、多孔層厚度小且孔淺(滲透性好，出峰快)；但交換容量小。適于常規(guī)別離分析。全多孔型：全部由硅膠或氧化鋁微粒聚集而成，因顆粒極細(xì)，因而孔徑小、傳質(zhì)快、柱效高。特別適于復(fù)雜混合物的別離。3.按別離原理分：分配色譜、吸附色譜、離子交換色譜、尺寸排阻色譜和親和色譜等17.4高效液相色譜方法各論按別離原理可將HPLC分為分配色譜、吸附色譜、離子交換色譜、尺寸排阻色譜和親和色譜等?，F(xiàn)在作分別介紹。一、分配色譜原理：根據(jù)各待測(cè)物在互不相溶的兩溶液中的溶解度不同，因而具不同的分配系數(shù)。在色譜柱中，隨著流動(dòng)相的移動(dòng)，這種分配平衡需進(jìn)行屢次，造成各待測(cè)物的遷移速率不同，從而實(shí)現(xiàn)別離的過(guò)程。2.流動(dòng)相:HPLC分析中，為防止固定相的流失，流動(dòng)相與固定液應(yīng)盡量不互溶，或者說(shuō)二者的極性相差越大越好。因此，根據(jù)流動(dòng)相與固定相極性的差異程度，可將液液色譜分為正相分配色譜〔流動(dòng)相極性小于固定相極性，極性小的先流出，適于極性組分別離〕和反相分配色譜〔流動(dòng)相極性大于固定相極性，極性大的先流出，適于非極性組分別離〕。2.固定相原那么上，用于GC的固定相也可用于HPLC作固定相。但HPLC固定液易流失，因此常用的只有機(jī)種，按極性由高到低為：,’-氧二丙腈(ODPN)、聚乙二醇(PEM)、三甲撐二醇(TMG)、十八烷(C18)、角鯊?fù)?SQ)。根據(jù)涂漬方法的不同，可將固定相分為機(jī)械涂漬型和化學(xué)鍵合型，后者應(yīng)用更為廣泛。1〕機(jī)械涂漬固定相：將固定液通過(guò)機(jī)械混合的方法涂漬到外表多孔型(0.5-1.5%涂布量)或全多孔型載體(5-10%涂布量)上形成的液液色譜固定相。該種固定相最大的缺乏是固定液易流失、別離穩(wěn)定性及重現(xiàn)性差，不適合梯度淋洗。為減少固定液的流失，通常在柱前加一根很短的前置柱，該柱涂有與分析柱相同但有更高含量的固定液，使流動(dòng)相進(jìn)入分析柱之前，預(yù)先被固定液飽和。2）化學(xué)鍵合固定相化學(xué)鍵合固定相是通過(guò)化學(xué)反應(yīng)將有機(jī)分子鍵合在載體表面所形成的柱填充劑，具有穩(wěn)定、流失小、適于梯度淋洗等特點(diǎn)。這種固定相分離機(jī)理既不是簡(jiǎn)單的吸附，也不是單一的液液分配，而是二者兼而有之?；瘜W(xué)鍵合的表面覆蓋度決定哪種機(jī)理起主要作用。對(duì)多數(shù)鍵合相來(lái)說(shuō)，以分配機(jī)理為主。通常，化學(xué)鍵合相的載體主要是硅膠（表面有硅醇基）：Si-O-R：對(duì)熱不穩(wěn)定、遇水、乙醇等強(qiáng)極性會(huì)水解，使酯鏈斷裂，因此只適于以不含水或醇的流動(dòng)相。Si-R(或Si-N)：不水解，熱穩(wěn)定性比硅酸脂好。但所用的格式反應(yīng)不方便。使用水溶液作流動(dòng)相時(shí)，其pH應(yīng)在4-8之間。Si-O-Si-R：不水解，熱穩(wěn)定性好，在pH2-8范圍內(nèi)對(duì)水穩(wěn)定。3.正相和反相鍵合色譜法正相鍵合色譜中，隨流動(dòng)相極性增加，組分分配比k增加。在HPLC分析中，有時(shí)要在流動(dòng)相中參加適量的鹽(碳酸銨、四烷基銨鹽)或酸，為什么？答：都是為防止峰形拖尾。參加鹽類是為了減少待測(cè)物與鍵合相外表的殘留硅醇基作用；參加酸是抑制酸類待測(cè)物的離解，使其以游離酸在柱內(nèi)別離。何為正相色譜，何為反相色譜？正相色譜低極性流動(dòng)相反相色譜高極性流動(dòng)相中等極性流動(dòng)相中等極性流動(dòng)相時(shí)間時(shí)間時(shí)間時(shí)間待測(cè)物極性：A>B>C正、反相色譜中極性和保留時(shí)間的關(guān)系時(shí)間，min固定相：C1固定相：C8固定相：C18硅膠-烷基鍵合相中烷基鏈長(zhǎng)對(duì)反相色譜分離的影響1-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯可見(jiàn)：反相鍵合色譜中，鍵合相碳鏈越長(zhǎng)，分離效果越好。二、離子交換色譜此法是利用離子交換原理和液相色譜技術(shù)相結(jié)合，測(cè)定各類陰、陽(yáng)離子的別離分析方法。它既適于無(wú)機(jī)離子，也適于有機(jī)物別離，如蛋白質(zhì)、氨基酸、核酸等。1.原理：利用不同等測(cè)離子對(duì)固定相的親和能力〔或離子交換能力〕的差異來(lái)實(shí)現(xiàn)別離的。待測(cè)離子與離子交換樹(shù)脂固定相上帶電荷基團(tuán)或游離的離子發(fā)生可逆交換反響：對(duì)陽(yáng)離子，滯留順序?yàn)椋篎e3+,Ba2+,Pb2+,Sr2+,Ca2+,Ni2+,Cd2+,Cu2+,Co2+,Zn2+,Mg2+,UO22+,Tl+,Ag+,Cs+,Rb+,K+,NH4+,Na+,H+,Li+對(duì)陰離子，滯留順序?yàn)椋簷幟仕岣?SO42-,C2O4,I-,HSO4-,NO3-,CrO42-,Br-,SCN-,Cl-,HCOO-,CH3COO-,OH-,F-思考：待測(cè)陽(yáng)離子電荷越小、其水合離子的半徑越大，那么越先出峰？對(duì)嗎？2.固定相按離子交換劑類型分四種：

按固定相制作方法可分為：多孔型離子交換樹(shù)脂(包括微孔型和大孔型)；外表多孔型(包括薄膜型〕離子交換樹(shù)脂；離子交換鍵合型。1）多孔型：聚苯乙烯+二乙烯苯交聯(lián)，分微孔型和大孔型。交換基團(tuán)多——交換容量大，穩(wěn)定。但易溶脹，傳質(zhì)慢、柱效低、分析速度慢。2）表面多孔型：薄膜型=惰性核+樹(shù)脂薄層(1-2

m)多孔型=惰性核+硅膠微球+樹(shù)脂薄層?？朔硕嗫仔碗x子交換樹(shù)脂的不足，但交換容量低，柱子易超負(fù)荷。3）離子交換鍵合相：利用化學(xué)反應(yīng)將離子交換基團(tuán)鍵合到惰性載體表面。載體可以是薄殼玻珠，也可以是多孔硅膠微粒。使用后者為載體，可得到性能穩(wěn)定、耐壓、高柱效的柱子。微孔型大孔型微孔微孔薄膜型表面多孔型離子交換層惰性核惰性核離子交換劑硅膠層涂覆3.流動(dòng)相離子交換色譜流動(dòng)相為鹽類緩沖溶液(有一定pH和離子強(qiáng)度)，通過(guò)改變pH、緩沖劑類型、離子強(qiáng)度、參加有機(jī)試劑和配位劑等條件來(lái)控制分配比k，改變交換劑的選擇性，進(jìn)而影響樣品待測(cè)物的別離。pH值：影響酸或堿的離解平衡，控制組別離子形式所占的分?jǐn)?shù)。當(dāng)組分以分子形式存在時(shí)，那么不被保存；離子分?jǐn)?shù)越高，保存值越大。常用的有檸檬酸鹽、磷酸鹽、甲酸鹽、乙酸鹽和氨水等。離子強(qiáng)度I：對(duì)保存值的影響比pH更大。組分保存值受流動(dòng)相中鹽類總濃度控制。增加外加陰或陽(yáng)離子將增加它們對(duì)—R+或—R-的競(jìng)爭(zhēng)能力，使組分保存值減小。通過(guò)參加不同種類的鹽，可影響柱的選擇性，因?yàn)椴煌镔|(zhì)對(duì)交換劑的親和能力不同。有機(jī)溶劑：外加有機(jī)溶劑通常減小組分的保存值。其極性越小，保存值越小。常用的有機(jī)溶劑有甲醇、乙醇、乙腈和二氧雜環(huán)已烷等。配離子L：當(dāng)大量L、組分X隨流動(dòng)相進(jìn)入柱后，發(fā)生配位劑交換：RM-L+XRM-X+L該法用于別離各種氨基酸或堿類。思考：離子交換色譜法中，流動(dòng)相常以無(wú)機(jī)鹽的緩沖液為流動(dòng)相。請(qǐng)問(wèn)緩沖液的pH值及離子強(qiáng)度對(duì)別離各有何影響？三、離子色譜離子色譜(IC)是70年代開(kāi)展的新方法。其別離原理與離子交換色譜原理一樣，只是流出的各種離子用電導(dǎo)檢測(cè)器檢測(cè)。但由于流動(dòng)相都是強(qiáng)電解質(zhì)，其電導(dǎo)率比待測(cè)離子約高2個(gè)數(shù)量級(jí)，這種強(qiáng)背景電導(dǎo)會(huì)完全掩蓋待測(cè)離子信號(hào)。為解決此問(wèn)題，1975年Small提出，在離子交換柱之后，再串結(jié)一根抑制柱。該柱裝填與別離柱電荷完全相反的離子交換樹(shù)脂。通過(guò)別離柱后的樣品再經(jīng)過(guò)抑制柱，使具有高背景電導(dǎo)的流動(dòng)相轉(zhuǎn)變?yōu)榈捅尘半妼?dǎo)的流動(dòng)相，從而可用電導(dǎo)檢測(cè)器檢測(cè)各種離子的含量。例如：分析陽(yáng)離子時(shí)，以無(wú)機(jī)酸為流動(dòng)相，抑制柱為高容量的強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂，那么發(fā)生以下反響：R+—OH+HCl(流動(dòng)相)——R+—Cl-+H2OR+—OH+MCl(待測(cè)物)——R+—Cl+M+OH-可見(jiàn)，不僅大量酸轉(zhuǎn)化為低電導(dǎo)的水，而且待測(cè)離子轉(zhuǎn)化為具有更大淌度的堿。該法的缺乏之處在于：抑制柱要定期再生、譜峰在經(jīng)過(guò)抑制柱后會(huì)展寬，降低別離度。因此有人提出了使用電導(dǎo)率很低的溶液(如苯甲酸鹽稀溶液)作流動(dòng)相。思考：IC別離中，何為抑制柱？分析陰離子時(shí)