DB21-T 3116-2019葡寡糖含量的檢測 液相色譜法

ICS71.040.01

A43

備案號：62029-2019DB21

遼寧省地方標準

DB21/T3116—2019

葡寡糖含量的檢測液相色譜法

Determinationmethodforglucanoligosaccharides—Liquidchromatographymethod

DB21/T3116—2019

葡寡糖含量的檢測--液相色譜法

1范圍

本標準規(guī)定了葡寡糖含量檢測的術語和定義、原理、儀器設備、操作步驟、結果表示和重復性。

本標準適用于以酵母細胞壁、真菌、褐藻、地衣、谷物以及其熱凝膠等聚糖為原料，經(jīng)加工制成的

的葡寡糖產(chǎn)品中β-1,3-葡寡糖（聚合度2-6）含量的測定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1

葡寡糖

葡聚糖在酸水解或生物酶水解條件下降解為聚合度為2～6的線性低聚糖。

3.2

葡寡糖含量

葡寡糖產(chǎn)品中β-1,3-葡寡糖（聚合度2-6）的質量百分比。

4原理

葡寡糖經(jīng)過色譜柱分離后可得到多個單一聚合度的寡糖組分，分離后的葡寡糖組分進入檢測器進行

檢測，在一定濃度范圍內，檢測信號的強度與葡寡糖濃度呈線性關系。通過外標法測定并計算得到葡寡

糖產(chǎn)品中不同聚合度葡寡糖組分的濃度和質量。不同聚合度葡寡糖的質量總和與其產(chǎn)品總質量比值的百

分比結果，即為葡寡糖的含量。

5儀器和設備

5.1高效液相色譜儀：配有脈沖式安培檢測器（PAD,pulsedamperometricdetector）。

5.2分析天平：感應量為0.0001g。

5.3濾膜：聚四氟乙烯膜，0.2μm。

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6試劑和材料

6.1水：符合GB/T6682規(guī)定的一級水的規(guī)定，即電導率（25℃）/（mS/m）≤0.01；

6.2氫氧化鈉溶液（ω(NaOH)=50%）：色譜純。

6.3三水乙酸鈉：色譜純。

6.4100mmol/L氫氧化鈉溶液：量取5.23mL氫氧化鈉溶液（6.2），用水定容至1000mL。

6.5800mmol/L三水乙酸鈉/100mmol/L氫氧化鈉溶液：稱取108.86g三水乙酸鈉，用水（6.1）溶

解后加入5.23mL氫氧化鈉溶液（6.2），再用水（6.1）定容至1000mL。

6.6葡寡糖標準品：昆布二糖，純度≥95%，昆布三糖，純度≥95%；昆布四糖，純度≥95%；昆布五

糖，純度≥90%；昆布六糖，純度≥90%；結構式參見附錄A。

7測定步驟

7.1標樣溶液的配置

7.1.1標樣溶液A：分別稱取10.00mg經(jīng)105℃干燥至恒重的5種葡寡糖標準品(6.6)于50mL燒杯

中，加入20mL水（6.1），振蕩使其充分溶解，轉移至100mL容量瓶中，用水（6.1）定容至刻度，

葡寡糖濃度為100μg/mL。

7.1.2標樣溶液B：吸取10.00mL標準溶液A轉移至100mL容量瓶中，用水（6.1）定容至刻度，葡

寡糖濃度為10μg/mL。

7.1.3標樣溶液C：吸取10.00mL標準溶液B轉移至100mL容量瓶中，用水（6.1）定容至刻度，葡

寡糖濃度為1μg/mL。

7.2樣品溶液的制備

當樣品是顆粒狀態(tài)時，應先將其在研缽中研細成粉末。

將粉末狀樣品在105℃干燥至恒重。稱取25.0mg樣品于50mL燒杯中，加入20mL水（6.1），振蕩

使其充分溶解，轉移至100mL容量瓶中，用水（6.1）定容至刻度，搖勻。用液相色譜儀測定前，樣品

溶液用0.2μm濾膜過濾。

7.3檢測條件

需滿足如下色譜條件：

a)流動相A：100mmol/L氫氧化鈉溶液（6.4）；

b)流動相B：800mmol/L三水乙酸鈉/100mmol/L氫氧化鈉溶液（6.5）；

c)色譜柱：離子交換色譜柱，粒徑5μm，柱長250mm，內徑4.6mm；

d)柱溫：30℃；

e)流速：1.0mL/min；

f)進樣體積：10μL。

g)洗脫方式：梯度洗脫：

0-1min：0%流動相B；

1-30min：0%-37.5%流動相B；

30-35min:37.5%-62.5%流動相B；

35-40min:62.5%-0%流動相B。

7.4分析步驟

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7.4.1標準曲線繪制

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，將標樣溶液A（7.1.1）、標樣溶液B（7.1.2）、標樣溶液

C（7.1.3）進樣10μL。標準溶液的典型色譜圖參見附錄B。

根據(jù)已知標樣含量與檢測器響應值建立線性方程：

YaXb.......................................(1)

式中：

a\b—已知系數(shù)；

X—溶液中葡寡糖的濃度值（μg/mL）；

Y—溶液中葡寡糖的色譜峰面積。

7.4.2樣品測定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，將樣品溶液（7.2）連續(xù)進樣3次，進樣體積10μL，得到

樣品中不同聚合度葡寡糖峰面積Yi。

8結果的計算

8.1葡寡糖的濃度計算

將樣品檢測響應值代入公式（1），計算得到不同聚合度葡寡糖濃度Xi。

8.2葡寡糖的含量計算

Xi100Vs

Wi100.............................(2)

m1000

式中：

Xi—樣品溶液中葡寡糖的濃度值（μg/mL）；

m—樣品的質量，單位為毫克（mg）；

Vs—樣品稀釋倍數(shù)；

Wi—樣品中葡寡糖的含量，%；

9重復性

在同一實驗室由同一操作人員完成的三個平行測定結果，相對標準偏差不大于5%；以三次平行測

定結果的算術平均值為測定結果。

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AA

附錄A

（資料性附錄）

β-1,3-葡寡糖的化學結構式

圖A.1葡寡糖的化學結構式（n=1,2,3,4）

4

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BB

附錄B

（資料性附錄）

標準溶液的典型液相色譜圖

圖B.1標準溶液的典型液相色譜圖

（1-昆布二糖，2-昆布三糖，3-昆布四糖，4-昆布五糖，5-昆布六糖）

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前言

本標準是依據(jù)GB/T1.1—2009《標準化工作導則第1部分：標準的結構和編寫》給出的規(guī)則起草

的。

本標準由大連市質量技術監(jiān)督局提出。

本標準由中國科學院沈陽分院歸口。

本標準起草單位：中國科學院大連化學物理研究所。

本標準主要起草人：陳瑋、尹恒。

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