醫(yī)學(xué)知識(shí)一大腸桿菌的培養(yǎng)與分離

實(shí)驗(yàn)1.

大腸桿菌的培養(yǎng)與分離3/6/20241微生物病毒細(xì)菌放線菌真菌原生生物原核細(xì)胞真核細(xì)胞非細(xì)胞結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,形體微小.通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu).一、基礎(chǔ)知識(shí):1.微生物的種類:3/6/20242關(guān)于大腸桿菌:革蘭氏染色：代謝類型：主要分布：危害：應(yīng)用：革蘭氏陰性菌（不著色）異養(yǎng)兼性厭氧型腸道一般無(wú)害，少數(shù)有害是基因工程中的主要受體菌之一2核糖體1閱讀P18-193/6/202432.微生物的培養(yǎng):1)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分:2)培養(yǎng)基的種類:碳源氮源水分無(wú)機(jī)鹽生長(zhǎng)因子按物理性質(zhì)分液體培養(yǎng)基:擴(kuò)大培養(yǎng)固體培養(yǎng)基:分離、鑒定、純化按功能分普通培養(yǎng)基：選擇培養(yǎng)基：篩選鑒別培養(yǎng)基：鑒定含氨卞青霉素的培養(yǎng)基伊紅——美藍(lán)培養(yǎng)基3/6/202443.細(xì)菌的分離:原理:不同的細(xì)胞具有不同的菌落特征;有些微生物對(duì)抗生素、高鹽等具有抗性的特點(diǎn)。方法:劃線法、涂布法選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)3/6/20245二、大腸桿菌的培養(yǎng)與分離實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、進(jìn)行大腸桿菌的擴(kuò)增，利用______培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)操作。2、進(jìn)行大腸桿菌的分離，利用______培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌的劃線培養(yǎng)。3、說(shuō)明大腸桿菌培養(yǎng)的條件和操作要求的原理。液體固體3/6/20246一、配制培養(yǎng)基，調(diào)整pH并滅菌，倒平板備用。按一定營(yíng)養(yǎng)比例配制培養(yǎng)基+瓊脂，融化調(diào)整pH滅菌倒平板、擱斜面細(xì)菌:中性偏堿霉菌:中性偏酸1、放走冷空氣；2、滅菌鍋壓力與大氣壓相同時(shí)才能打開。3/6/20247倒平板、擱置斜面待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)，在酒精燈附近倒平板。凝固后，倒置放置思考：如何鑒定滅菌是否徹底？放入培養(yǎng)箱中，2d后觀察平板是否有菌落生成3/6/20248二、接種、擴(kuò)大培養(yǎng)1、擴(kuò)大培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基是？2、接種的場(chǎng)所是？3、為何要等接種環(huán)冷卻后，再取菌體？3/6/20249三、劃線分離1、第2、3、4級(jí)劃線前是否都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌？2、下級(jí)劃線開始于上一級(jí)劃線的起始端還是末端？3/6/2024103/6/202411四、培養(yǎng)將接種后的培養(yǎng)皿放入恒溫箱內(nèi)，在37℃下倒置培養(yǎng)12-24h。平板稀釋涂布法平板劃線法3/6/202412平板劃線分離法用途：一般多用于從菌種的純化；

優(yōu)點(diǎn)：可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離；

缺點(diǎn)：不能計(jì)數(shù)稀釋涂布平板法

用途：一般多用于篩選菌株。一般用于平板培養(yǎng)基的回收率計(jì)數(shù)。

優(yōu)點(diǎn)：可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征。

缺點(diǎn)：吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延。如果菌液密度大的話，長(zhǎng)不出單菌落。

3/6/202413五、純化與保存1、如何進(jìn)一步純化菌種？2、如何保存菌種？3/6/2024141.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？問(wèn)題討論答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3/6/2024153.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿壁的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成菌落的細(xì)菌隨水而擴(kuò)散，得不到單細(xì)胞菌落；防止雜菌污染。答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿壁的培養(yǎng)基上滋生而造成污染，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。3/6/2024165.如何操作才可以盡量避免被雜菌污染？6.在培養(yǎng)后如何判斷是否有雜菌污染？7.實(shí)驗(yàn)完成后，接觸過(guò)細(xì)菌的器皿應(yīng)如何處理？操作快捷,減少操作時(shí)間;滅菌要徹底,降低環(huán)境污染幾率;注意微生物生長(zhǎng)條件,如pH、滲透壓、溫度等。是否有不同形態(tài)的菌落；用顯微鏡鏡檢細(xì)胞、孢子、芽孢等形態(tài)。高壓蒸氣滅菌3/6/2024178、轉(zhuǎn)基因用的質(zhì)粒通常加入了如抗氨芐青霉素基因。轉(zhuǎn)基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入大腸桿菌后，能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而未被轉(zhuǎn)化的就不能生長(zhǎng)，其他沒(méi)有抗氨芐青霉素基因的雜菌與不能生長(zhǎng)。如何分離轉(zhuǎn)基因工程菌，并保證不被普通的大腸桿菌污染？將菌種接種在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。3/6/2024181、高壓蒸氣滅菌2、灼燒滅菌3、紫外線滅菌4、過(guò)濾（去除雜菌）思考：滅菌與消毒有何區(qū)別？滅菌的方法：消毒：利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致病微生物的過(guò)程。滅菌:以化學(xué)劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉菌