TBWDP 0002-2022 北京市酒莊葡萄酒赭曲霉毒素A 限量及檢測方法

ICS67.160.10CCSX62團 體 標 準T/BWDP0002-2022北京市酒莊葡萄酒赭曲霉毒素A限量及檢測方法LimitanddeterminationofOchratoxinAinBeijing2022-10-28發(fā)布 2022-10-28實施北京酒莊葡萄酒發(fā)展促進會 發(fā) 布T/BWDP0002-2022T/BWDP0002-2022前 言本文件參考GB5009.96-2016，主要變化如下：——；——提高了葡萄酒中赭曲霉毒素A的檢測靈敏度（檢出限和定量限從1.0μg/kg和3.μkg提高到0.02μkg和0.05μkg；——（從15mn縮短為6mn。本文件所規(guī)定附錄為資料性附錄。GB/T1.1—20201部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別這些專利的責任。本標準由北京酒莊葡萄酒發(fā)展促進會提出并歸口。20221028日首次發(fā)布。1T/BWDP0002-2022T/BWDP0002-2022PAGEPAGE1北京市酒莊葡萄酒赭曲霉毒素A限量及檢測方法范圍本文件規(guī)定了北京市酒莊葡萄酒中赭曲霉毒素A的限量要求和測定方法。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB2761GB/T6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB5009.96A的測定術語和定義下列術語和定義適用于本文件。A（OchratoxinA）赭曲霉毒素A是一種由曲霉屬和青霉屬霉菌產生的次級代謝產物，化學式為C20H18ClNO6，CAS號：303-47-9，具有腎毒性和致癌性，在2017年被世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構劃分為2B類致癌物，能在葡萄酒中積累。原理A的含量（液相色試劑和材料除非另有說明，所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。試劑乙腈（HNAS號：7505-甲醇（HOHAS號：6756-甲酸（HOOH：AS號：6418-試劑配制（/=23。標準品赭曲霉毒素A（21NO6，AS號：30347-9，純度≥99%?；蚪泧艺J證并授予標準物質證書的標準物質。標準溶液配制A10μmLA20m精0.1mg）10mL10μg/mL-20℃避光保存，有效期3個月。赭曲霉毒素A標準工作液：量取的赭曲霉毒素A標準儲備液（5.4.，用提取液進行A0.1ng/mL0.5ng/mL1.0ng/mL2.5ng/mL5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL的標準工作溶液，標準工作溶液現用現配。儀器和設備液相色譜-串聯質譜儀：配有電噴霧電離源。分析天平：感量0.01g和0.0001g。離心機：轉速不低于6000rpm。超聲波清洗儀：功率不低于200w。分析步驟試樣制備與提取取脫氣酒類試樣(4℃30min,過濾或超聲50Hz5min脫氣)或取其他不含二氧化碳的酒類試樣5mL5000rpm離心3mn，100μ精確至1μL900μL2.2.0.22μm聚四氟乙烯濾膜于液相小瓶中，待上機檢測。儀器參考條件高效液相色譜參考條件列出如下：色譜柱：C18100mm2.1mm1.7μm，或等效柱；b) 柱溫：40℃；進樣量：5μL；流速：0.3mL/min；A液：0.2%1mL500mL水中，混勻，脫氣，備用；B液：0.2%1mL500mL色譜級乙腈中，混勻，脫氣，備用。1。1流動相及梯度洗脫條件時間/min流動相A/%流動相B/%070302.040604.020804.601004.870306.07030質譜參考條件質譜參考條件列出如下：（I；毛細管電壓：3.2kV；離子源溫度：150℃；脫溶劑溫度：500℃；1000L/h150L/h；掃描方式：正離子掃描；2；A標準品高效液相色譜四極桿質譜聯用選擇離子流圖見圖１。2多反應監(jiān)測參數毒素采集時間/min母離子/子離子（m/z）錐孔電壓/V碰撞電壓/V赭曲霉毒素A3.10403.99>238.93*2622403.99>220.9134*為定量子離子圖１赭曲霉毒素A標準物質的多反應監(jiān)測（MRM）色譜圖注：圖中赭曲霉毒素A的濃度為10μg/L液相色譜-串聯質譜測定A3規(guī)定的范圍。3定性時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度≥50%20%~50%10%~20%≤10%允許相對偏差±20%±25%±30%±50%（特征離子對/定量離子對所對應的色譜峰面積相儀器最佳工作條件下，用系列基質標準工作溶液分別進樣，以峰面積為縱坐標，以基質混合標準工作溶液濃度為橫坐標，繪制標準工作曲線。用標準工作曲線對樣品進行定量，A的響應值均應在儀器測定的線性范圍內。5.2A標準工作溶液按濃度從低到高依次注入高效液-xy（1計算：式中：

y=ax+b （1）ya回歸曲線的斜率；xb分析結果和表述試樣中赭曲霉毒素A的含量按式（2）計算：X=ρ×V×1000×f （2）m×1000式中：X———Aμ/g；A（nmL；V———（μL；1000——單位換算常數m———（mg；f———10。（需扣除空白值以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，