豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因與豬瘟病毒E2基因在奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞中的表達(dá)與生物活性的鑒定

豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因與豬瘟病毒E2基因在奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞中的表達(dá)與生物活性的鑒定

引言：

豬圓環(huán)病毒2型（PorcineCircovirusType2，PCV2）是一種引起豬圓環(huán)病毒病的病毒，主要侵害幼豬，導(dǎo)致豬瘦肉病等嚴(yán)重疾病。豬瘟病毒（ClassicalSwineFeverVirus，CSFV）是一種致命的豬類病毒性疾病，造成豬群的嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。為了更好地了解這兩種病毒的表達(dá)與生物活性特性，本研究旨在鑒定豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因和豬瘟病毒E2基因在奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞中的表達(dá)情況和生物活性。

材料與方法：

1.實(shí)驗(yàn)所需材料：

本實(shí)驗(yàn)所需的材料包括奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞（FetalGoatFibroblastCells），豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因和豬瘟病毒E2基因的質(zhì)粒DNA，靶向連接酶，轉(zhuǎn)染試劑等。

2.質(zhì)粒構(gòu)建：

將pcDNA3.1(+)質(zhì)粒與ORF2基因或E2基因分別通過(guò)限制性內(nèi)切酶切割，加入靶向連接酶，反應(yīng)后回收得到pcDNA3.1-ORF2和pcDNA3.1-E2。

3.細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染：

將奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞接種于含有DMEM培養(yǎng)基和10%胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)板中，37°C、5%CO2條件下培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)至80%。

4.轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)：

將pcDNA3.1-ORF2和pcDNA3.1-E2質(zhì)粒DNA分別與轉(zhuǎn)染試劑混合，靜置15分鐘后滴加到培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)。

結(jié)果與討論：

通過(guò)熒光顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)后，奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞中出現(xiàn)了明顯的熒光信號(hào)，表明ORF2基因和E2基因在細(xì)胞中得到了成功表達(dá)。進(jìn)一步通過(guò)Westernblotting和免疫熒光染色等技術(shù)鑒定，結(jié)果證實(shí)了ORF2和E2蛋白在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的存在。

為了進(jìn)一步了解ORF2和E2的生物活性，我們進(jìn)行了細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的增殖能力明顯受到抑制，表明ORF2和E2的表達(dá)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)具有一定的負(fù)面影響；同時(shí)，RT-PCR分析顯示，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中的PCV2和CSFV的核酸含量明顯升高，進(jìn)一步驗(yàn)證了ORF2和E2的生物活性。

結(jié)論：

本研究通過(guò)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)確認(rèn)了豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因和豬瘟病毒E2基因在奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞中的成功表達(dá)，并通過(guò)Westernblotting和免疫熒光染色等技術(shù)鑒定了蛋白的存在。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)證實(shí)這兩種基因的表達(dá)能抑制細(xì)胞增殖，并提高了PCV2和CSFV的核酸含量。這些結(jié)果對(duì)豬圓環(huán)病毒2型和豬瘟病毒的研究以及相關(guān)疫苗的開發(fā)具有重要的參考價(jià)值。

通過(guò)本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們成功地在奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞中表達(dá)了豬圓環(huán)病毒2型的ORF2基因和豬瘟病毒的E2基因。通過(guò)熒光顯微鏡觀察、Westernblotting和免疫熒光染色等技術(shù)的驗(yàn)證，我們證實(shí)了ORF2和E2蛋白在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的存在。此外，我們的結(jié)果還顯示，ORF2和E2的表達(dá)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)具有一定的