T-SDYYXH 01-2023 基于斑馬魚模型的藥物早期肝毒性快速評價(jià)方法

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C10SDYYXH T/SDYYXH

基于斑馬魚模型的藥物早期肝毒性快速評價(jià)方法A

rapid

method

evaluating

early

hepatotoxicity

of

drugs

using

zebrafish

model 山東省醫(yī)藥行業(yè)協(xié)會(huì)??發(fā)

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10

11

12

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012023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載本文件按照

1.12020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則

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GB/T

GB/T

魚類延長毒性14天試驗(yàn)GB

5749

3.1

3.2Tg（L-FABP:EGFP

strain

transgenic

3.3

3.4

3.5

lack

of

beat3.610

10%

lethal

concentration（LC3.7

fluorescence

microscopy3.8

tissue

3.9

quantitative

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以斑馬魚為試驗(yàn)動(dòng)物，應(yīng)用熒光顯微成像、組織切片和熒光實(shí)時(shí)定量PCR等技術(shù)，以肝臟面積、肝臟組

5.1

非水溶性藥物：選用有機(jī)溶劑、乳化劑或分散劑等進(jìn)行助溶，制備成均勻分散的懸濁液或乳濁5.2

10mg～50

30mL～505.3

受試物的名稱、來源、性狀、批號、規(guī)格、生產(chǎn)日期、保存條件、有效期和配制方法。

a)

b)

c)

6.1

6.2 量筒。500

0.5

6.3

40

6.4

6.5

RT-qPCR

96

PCR

℃～99.9

6.6

6.7

6.8

6.9

試驗(yàn)容器。玻璃或聚苯乙烯容器。如受試物可能吸附于聚苯乙烯容器時(shí)，應(yīng)選用惰性材料（如

7.1

發(fā)育至72

hpf肝臟顯示綠色熒光的健康Tg（L-FABP:EGFP）品系轉(zhuǎn)基因斑馬魚。斑馬魚的應(yīng)用符合GB/T

7.2

斑馬魚培養(yǎng)水使用靜置24

GB

5749標(biāo)準(zhǔn)），內(nèi)含

mmol/L

0.17

mmol/L

mmol/L

CaCl

0.16

mmol/L

MgSO

14.625

MgSO

000

mL

50

20

mL

50

980

mL

pHCaCO計(jì)）為10

mg/L～250

6.0

7.3

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pH

6.5～8.0

pH

如果加入受試物后試驗(yàn)溶液的

pH

值小于

6.5

或大于

8.0，按照

GB/T

的相關(guān)規(guī)

pH

非水溶性受試物，添加有機(jī)溶劑、乳化劑或分散劑提高受試物溶解度和試驗(yàn)溶液的均勻度。受

100

8.1

8.2

mL斑馬魚培養(yǎng)水。8.3

mL助溶劑溶液。助溶劑溶液濃度為受試物組使用助溶劑的最高濃度。8.4

15

mL

mM。8.5

挑取肝臟顯示綠色熒光的健康

Tg（L-FABP:EGFP）品系轉(zhuǎn)基因斑馬魚，置于

孔板中，每孔含

15

mL

8.6

8.7

暴露結(jié)束，熒光顯微鏡下觀察拍攝仔魚顯示綠色熒光的肝臟組織圖像（典型圖片見附錄A），并測8.8

暴露結(jié)束，4%多聚甲醛固定仔魚組織，應(yīng)用石蠟將其包埋后，將仔魚制備為厚度為5-10μm的石蠟8.9

caspase-8

9.1

90

9.2

水溶性受試物可配制成澄清溶液，非水溶性受試物可選用二甲基亞砜、乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑9.3

10

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bax、caspase-3、caspase-8

caspase-9

11

性評指標(biāo)斑馬的肝面積臟組病理變、亡相基因bax、caspase-3、caspase-8

caspase-9）表達(dá)量。

T-test

12

a)

b)

c)

1)

2)

3)

4)

斑馬魚培養(yǎng)水特性：pH

5)

試驗(yàn)容器內(nèi)的水質(zhì)：pH

6)

d)

1)

2)

3)

4)

凋亡相關(guān)基因（bax