DB35T 73-1996血漿中去甲腎上腺素和腎上腺素的測(cè)定方法

福建省地方標(biāo)準(zhǔn)血漿中去甲腎上腺素和腎上腺素的測(cè)定方法1996一04—0發(fā)布1996-o5—0實(shí)施去甲腎上腺素及腎上腺素是機(jī)體產(chǎn)生的調(diào)節(jié)代謝反應(yīng)的一類生物胺，是重要的神經(jīng)遞質(zhì)，對(duì)心血管的生理活動(dòng)能產(chǎn)生直接影響。其血漿濃度測(cè)定可以為臨床嗜鉻細(xì)胞瘤等疾病的診斷提供有力依據(jù)。嗜鉻細(xì)胞瘤分泌大量?jī)翰璺影?，作用于腎上腺素受體，引起嚴(yán)重甲腎上腺素及腎上腺素可直接損害心肌，可誘致心衰，導(dǎo)致心肌梗塞。目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)關(guān)于血中去甲腎上腺素及腎上腺素含量測(cè)定的現(xiàn)成標(biāo)準(zhǔn)可循。故我們特編制本標(biāo)準(zhǔn)，以利開(kāi)展血中去甲腎上腺素及腎上腺素含量的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)由福建省衛(wèi)生廳提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：福建省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：鄭玉聰謝狄霖福建省地方標(biāo)準(zhǔn)和腎上腺素的測(cè)定方法DB35/T73-1996本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用熒光法測(cè)定血漿去甲腎上腺素及腎上腺素。本標(biāo)準(zhǔn)適用于血漿去甲腎上腺素及腎上腺素的測(cè)定。3.1去甲腎上腺素(Dl-Noradrenaline,SERVA)及腎上3.2偏亞硫酸鈉3.5抗壞血酸：0.1%3.6四硼酸鈉一鹽酸緩沖液(pH7.0):0.1mol/l3.7鐵氰化鉀：0.25%3.8氯化銅：0.002%3.92-巰基乙醇3.12冰醋酸(重蒸)福建省技術(shù)監(jiān)督局1996-04-0|批準(zhǔn)1996-05-0|實(shí)施3.15氧化鋁3.16樹(shù)脂AmberliteCG-50(SIGMA)4.儀器與設(shè)備4.1MPF-4型熒光分光光度計(jì)4.2玻璃層析柱A,B4.4低速離心機(jī)5.分析步驟5.1血漿處理：取靜脈血5～6ml注入預(yù)冷的肝素化試管內(nèi)，2500rpm離心5分鐘，每1.0ml血漿加偏亞硫酸鈉1mg。5.2提取與洗脫5.2.1取血漿2.0ml加5%乙二胺四乙酸二鈉5.0ml,10%偏亞硫酸鈉0.2ml,氧化鋁500mg及水17.8ml,加0.25mol/I碳酸鈉使pH達(dá)8.4～8.5,攪拌7min,傾去上清。將氧化鋁傾入玻璃層析柱A內(nèi)，用10ml水洗滌，用6.0ml的0.05mol/l過(guò)氯酸洗脫，前4滴棄去，其余的洗脫液收集在已放有5%乙二胺四乙酸二鈉0.1ml及0.1%抗壞血酸0.1ml的燒杯中，滴速7-9滴/min。5.2.2將樹(shù)脂AmberliteCG50傾入玻璃層析柱B內(nèi)，樹(shù)脂高約3cm,用5ml水洗柱。洗脫液用0.1mol/l碳酸鈉調(diào)節(jié)pH至6.0～6.2后上柱，滴速6～7滴/min,然后再用5ml水洗柱。再以四硼酸鈉一鹽酸緩沖液(pH7.0)1.5ml洗脫，開(kāi)始2滴棄去，將收集到的標(biāo)本洗脫液吸取1.2ml置10ml玻璃磨口試管中。另外吸取四硼酸鈉—鹽酸緩沖液1.2ml作為試劑空白液。5.3標(biāo)準(zhǔn)工作液配制：取去甲腎上腺素和腎上腺素標(biāo)準(zhǔn)試劑分別用0.01ml/l鹽酸配制成濃度為10ng/ml的溶液，再分別用四硼酸鈉一鹽酸緩沖液稀釋成濃度為1ng/ml的去甲腎上腺素和腎上腺素的標(biāo)準(zhǔn)工作液，并分別吸取1.2ml待用。5.4氧化：去甲腎上腺素和腎上腺素的標(biāo)準(zhǔn)工作液、標(biāo)本洗脫液及試劑空白液均按以下步驟氧化：加0.01mol/l鹽酸0.12ml及0.002%氯化銅0.06ml,加0.25%鐵氰化鉀0.06ml氧化3min后，加10%2-巰基乙醇0.06ml。在10-20秒內(nèi)加10mol/l氫氧化鈉0.24ml。5-7分鐘內(nèi)加冰醋酸0.18ml,此時(shí)pH達(dá)5.30～5.45。50分鐘后進(jìn)行熒光測(cè)定。5.5測(cè)定：兩組激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)分別為410nm/500nm及450nm/500nm,狹縫均為10nm,激發(fā)濾光板用UV-35,發(fā)射濾光板用Y43,電壓為750V。F?及F?為410nm/500nm及450nm/500nm時(shí)的熒光值。N?及N?為標(biāo)準(zhǔn)去甲腎上腺素在410nm/500nm