藥物分析第七章芳香胺類藥物的分析課件

第七章芳香胺類藥物的分析匯報人：某某某匯報時間：2024.X.X常見的芳胺類藥物

對氨基苯甲酸酯類藥物的基本結(jié)構(gòu)第一節(jié)芳胺類藥物的分析苯佐卡因鹽酸氯普魯卡因鹽酸丁卡因鹽酸普魯卡因胺酰胺類藥物的基本結(jié)構(gòu)對乙酰氨基酚（撲熱息痛）醋氨苯砜鹽酸利多卡因鹽酸布比卡因鹽酸羅哌卡因鹽酸妥卡尼

一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（一）具有芳伯氨基或潛在的芳伯氨基，可用重氮化—偶合反應(yīng)鑒別或亞硝酸鈉滴定法測定含量。

（二）酯鍵或酰胺鍵易水解

（三）具脂烴胺側(cè)鏈，弱堿性，可與生物堿沉淀試劑發(fā)生沉淀反應(yīng)進(jìn)行鑒別或非水堿量法測定含量。（四）游離堿多為堿性油狀液體或低熔點固體，難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑，其鹽酸鹽具有一定的熔點，易溶于水和乙醇，難溶于有機(jī)溶劑。

（六）UV

（七）IR

（五）某些特征取代基（如酚羥基）的反應(yīng)二、鑒別試驗

（一）重氮化—偶合反應(yīng)

芳香第一胺類鑒別反應(yīng)

直接：鹽酸普魯卡因、對氨基水楊酸鈉、鹽酸氯普魯卡因、苯佐卡因、鹽酸普魯卡因胺鹽酸普魯卡因Ch.P（2005）【鑒別】

（4）本品顯芳香第一胺類的鑒別反應(yīng)（附錄Ⅲ）取供試品約50mg，加稀鹽酸1m1，必要時緩緩煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亞硝酸鈉溶液數(shù)滴，滴加堿性β-萘酚試液數(shù)滴，視供試品不同，生成由橙黃到猩紅色沉淀。

間接：對乙酰氨基酚、醋氨苯砜、貝諾酯

對乙酰氨基酚Ch.P（2005）【鑒別】

（2）取本品約0.1g，加稀鹽酸5m1，置水浴中加熱40分鐘，放冷；取0.5m1，滴加亞硝酸鈉試液5滴，搖勻，用水3ml稀釋后，加堿性β-萘酚試液2m1，振搖，即顯紅色。

（二）三氯化鐵反應(yīng)對乙酰氨基酚（三）與重金屬離子反應(yīng)

1.鹽酸利多卡因的鑒別方法

（1）與銅離子的反應(yīng)（2）與鈷離子的反應(yīng)（3）與汞離子的反應(yīng)

2．鹽酸普魯卡因胺的鑒別方法——羥肟酸鐵鹽反應(yīng)

（四）水解產(chǎn)物反應(yīng)

1.鹽酸普魯卡因Ch.P（2005）【鑒別】

（1）取本品約0.1g，加水2ml溶解后，加10％氫氧化鈉溶液1ml，即生成白色沉淀；加熱，變?yōu)橛蜖钗铮焕^續(xù)加熱，產(chǎn)生的蒸氣，能使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變?yōu)樗{(lán)色；熱至油狀物消失后，放冷，加鹽酸酸化，即析出白色沉淀。

2.苯佐卡因Ch.P（2005）【鑒別】

（1）取本品約0.1g，加氫氧化鈉試液5m1，煮沸，即有乙醇生成；加碘試液，加熱，即生成黃色沉淀，并發(fā)生碘仿的臭氣。（五）氯化物的反應(yīng)藥典附錄“一般鑒別試驗”。

1.沉淀反應(yīng)

2.氧化還原反應(yīng)

（六）制備衍生物測定熔點1．三硝基苯酚衍生物

鹽酸利多卡因Ch.P（2005）【鑒別】

取本品0.2g，加水20ml溶解。（1）取溶液10ml，加三硝基苯酚試液10ml，即生成沉淀；濾過，沉淀用水洗滌后，干燥，依法測定（附錄ⅥC），熔點為228～232℃，熔融時同時分解。鹽酸布比卡因Ch.P（2005）2.硫氰酸鹽衍生物

鹽酸丁卡因Ch.P（2005）【鑒別】

（1）取本品約0.1g，加5%醋酸鈉溶液10ml溶解后，加25%硫氰酸銨溶液1ml，即析出白色結(jié)晶；濾過，結(jié)晶用水洗滌，在80℃干燥，依法測定（附錄ⅥC），熔點約為131℃。

鹽酸布比卡因Ch.P（2005）【鑒別】（2）取本品，精密稱定，按干燥品計算，加0.01mol/L鹽酸溶液制成每1ml中含0.40mg的溶液，照紫外-可見分光光度法（附錄ⅣA）測定，在263nm與271nm的波長處有最大吸收；其吸光度分別為0.53～0.58與0.43～0.48。（七）UV

（八）IR

鹽酸布比卡因Ch.P（2005）【鑒別】（3）本品的紅外光吸收圖譜與對照的圖譜（光譜集324圖）一致。三、特殊雜質(zhì)檢查（一）對乙酰氨基酚

1.有關(guān)物質(zhì)

雜質(zhì)來源中間體、副產(chǎn)物及分解產(chǎn)物

對氯苯乙酰胺雜質(zhì)對照品法

檢查方法

TLC

其他雜質(zhì)參比雜質(zhì)對照品法

取本品的細(xì)粉1.0g，置具塞離心管或試管中，加乙醚5ml，立即密塞，振搖30分鐘，離心或放置至澄清，取上清液作為供試品溶液；另取每1ml中含對氯苯乙酰胺1.0mg的乙醇溶液適量，用乙醚稀釋成每1ml中含50

g的溶液，作為對照溶液。吸取供試品溶液200

l與對照溶液40

l，分別點于同一硅膠GF254薄層板上。以三氯甲烷—丙酮—甲苯（13∶5∶2）為展開劑，展開，晾干，置紫外光（254nm）燈下檢視，供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點，與對照溶液的主斑點比較，不得更深。2.對氨基酚

雜質(zhì)來源中間體、水解產(chǎn)物

反應(yīng)原理

檢查方法對照法

取本品1.0g，加甲醇溶液（1→2）20ml溶解后，加堿性亞硝基鐵氰化鈉試液1m1，搖勻，放置30min；如顯色，與對乙酰氨基酚對照品1.0g加對氨基酚50

g用同一方法制成的對照液比較，不得更深（0.005％）。

對乙酰氨基酚咀嚼片、泡騰片、顆粒及滴劑等均需檢查對氨基酚。方法為反相高效液相色譜法，以O(shè)DS為固定相；0.05mol／L醋酸銨溶液—甲醇（85∶15）為流動相。限度為0.1％。

（二）鹽酸普魯卡因注射液中對氨基苯甲酸的檢查

檢查方法

TLC雜質(zhì)對照品法

雜質(zhì)來源水解產(chǎn)生

精密量取本品，加乙醇稀釋使成為每1ml中含鹽酸普魯卡因2.5mg的溶液，作為供試品溶液。取對氨基苯甲酸對照品，加乙醇制成每1ml中含30

g的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅤB）試驗，吸取上述兩種溶液各10

l，分別點于含有羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14∶1∶1∶4）為展開劑，展開后，取出晾干，用對二甲氨基苯甲醛溶液（2％對二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加冰醋酸5ml制成）噴霧顯色。供試品溶液如顯與對照品溶液相應(yīng)的雜質(zhì)斑點，其顏色與對照品溶液的主斑點比較，不得更深。（三）鹽酸氯普魯卡因注射液中有關(guān)物質(zhì)和光解產(chǎn)物的檢查

USP（30）采用HPLC法（四）鹽酸羅哌卡因的對映體純度檢查

USP（30）采用CE法（一）亞硝酸鈉滴定法1.原理具芳伯氨基的藥物四、含量測定

具游離芳伯氨基的藥物可用本法直接測定。具潛在芳伯氨基的藥物，如具酰胺基藥物（對乙酰氨基酚等）經(jīng)水解，芳香族硝基化合物（如無味氯霉素）經(jīng)還原，也可用本法測定。

2.主要測定條件（1）加入適量KBr加速反應(yīng)

KBr為催化劑NaNO2+HCl→HNO2+NaClHNO2+HCl→NOCl+H2O

在鹽酸存在下，重氮化反應(yīng)的機(jī)理為：（1）K1（2）K2

∵K1≈300K2

加入KBr，可增大被測溶液中NO+的濃度，所以能加快重氮化反應(yīng)速度（2）加過量鹽酸加速反應(yīng)在不同酸中重氮化反應(yīng)的速度為：HBr＞HCl＞H2SO4＞HNO3鹽酸1:2.5～6；加入鹽酸：①重氮化反應(yīng)速度加快；②重氮鹽在酸性溶液中穩(wěn)定；③防止生成偶氮氨基化合物，而影響測定結(jié)果（3）反應(yīng)溫度室溫條件下滴定10～30℃（4）滴定速度滴定管尖端插入液面下2/3處，滴定液一次大部分放下，近終點時方改為慢速滴定3.指示終點的方法（1）永停滴定法

Ch.P（2005）、BP（2005）永停滴定法（附錄ⅦA）用作重氮化法的終點指示時，調(diào)節(jié)R1使加于電極上的電壓約為50mV。取供試品適量，精密稱定，置燒杯中，除另有規(guī)定外，可加水40ml與鹽酸溶液（1→2）15ml，而后置電磁攪拌器上，攪拌使溶解，再加溴化鉀2g，插入鉑—鉑電極后，將滴定管的尖端插入液面下約2/3處，用亞硝酸鈉滴定液（0.1mol/L或0.05mol/L）迅速滴定，隨滴隨攪拌，至近終點時，將滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，繼續(xù)緩緩滴定，至電流計指針突然偏轉(zhuǎn)，并不再回復(fù)，即為滴定終點。（2）電位法USP（30）（3）外指示劑法

KI—淀粉糊劑或試紙2NaNO2+2KI+4HCl→2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O

（4）內(nèi)指示劑法中性紅不可逆指示劑4.測定方法

鹽酸普魯卡因Ch.P（2005）取本品約0.6g，精密稱定，照永停滴定法（附錄ⅦA），在15～25℃，用亞硝酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml亞硝酸鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于27.28mg的C13H20N2O2·HCl（二）非水溶液滴定法

脂烴胺側(cè)鏈，具弱堿性

鹽酸利多卡因的含量測定Ch.P（2005）取供試品約0.2g，精密稱定，加冰醋酸10ml溶解后，加醋酸汞試液5ml與結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液顯綠色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于27.08mg的鹽酸利多卡因（C14H22N2O·HCl）。（三）紫外-可見分光光度法

對乙酰氨基酚在0.4％氫氧化鈉溶液中，于257nm波長處有最大吸收，其紫外吸收光譜特征，可用于其原料及其制劑的含量測定。

對乙酰氨基酚原料、片劑、咀嚼片、注射液、栓劑、膠囊劑。對乙酰氨基酚Ch.P（2005）取本品約40mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加0.4％氫氧化鈉溶液50ml溶解后，加水至刻度，搖勻，精密量取5m1，置100ml量瓶中，加0.4％氫氧化鈉溶液10m1，加水至刻度，搖勻，在257nm的波長處測定吸收度，按C8H9NO2的吸收系數(shù)為715計算，即得。例精密稱取對乙酰氨基酚42mg，置250ml量瓶中，加0.4％氫氧化鈉溶液50ml溶解后，加水至刻度，搖勻，精密量取5m1，置100ml量瓶中，加0.4％氫氧化鈉溶液10m1，加水至刻度，搖勻，在257nm的波長處測定吸收度為0.594，按C8H9NO2的吸收系數(shù)為715計算百分含量。W=42mg→V=250ml5ml→100mlD=100/5例取標(biāo)示量為0.3g/片的對乙酰氨基酚片10片，總重為3.3660g，稱出44.9mg，置250ml量瓶中，加0.4％氫氧化鈉溶液50ml及水50ml，振搖15min，加水至刻度，搖勻，用干燥濾紙濾過。棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液5m1，置100ml量瓶中，加0.4％氫氧化鈉溶液10m1，加水至刻度，搖勻，在257nm的波長處測的吸收度為0.583，按C8H9NO2的吸收系數(shù)為715計算本片劑的標(biāo)示量%。片劑，吸收系數(shù)法（四）熒光法——熒光探針技術(shù)

使熒光衍生化試劑與本身無熒光或熒光效率低的化合物反應(yīng)，其產(chǎn)物具有強熒光，從而使檢測靈敏度大大提高。激發(fā)波長：λex400nm發(fā)射波長：λem485nm

測定熒光強度，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。（五）HPLC

對乙酰氨基酚泡騰片、滴劑及凝膠劑采用高效液相色譜法測定含量。

離子抑制色譜法，外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法定量98：133．鹽酸普魯卡因胺常用的鑒別反應(yīng)有（AB）A.重氮化—偶合反應(yīng)B.羥肟酸鐵鹽反應(yīng)C.氧化反應(yīng)D.磺化反應(yīng)E.碘化反應(yīng)

97：137．采用亞硝酸鈉法測定含量的藥物有（CD）A.苯巴比妥B.鹽酸丁卡因C．苯佐卡因D.醋氨苯砜E.鹽酸去氧腎上腺素

95：85．下列藥物中不能用亞硝酸鈉滴定法測定含量者（A）A.乙酰水楊酸B.對氨基水楊酸鈉C.對乙酰氨基酚D.普魯卡因E.苯佐卡因

96：81（99：72）.亞硝酸鈉滴定法中，加KBr的作用是（B）A.添加Br

B.生成NO+·Br

C．生成HBrD.生成Br2E.抑制反應(yīng)進(jìn)行

95：75．中國藥典（1990年版）所收載的亞硝酸鈉滴定法中指示終點的方法為（B）A.電位法B.永停法C.外指示劑法D.內(nèi)指示劑法E.自身指示劑法

96：127．亞硝酸鈉滴定法中，可用于指示終點的方法有（BCDE）A.自身指示劑法B.內(nèi)指示劑法C.永停法D.外指示劑法E.電位法

例1.Ch.P（2005）亞硝酸鈉滴定法測定對氨基水楊酸鈉的含量時，指示滴定終點的方法為（C）A.自身指示終點法B.電位法指示終點C.永停滴定法D.氧化還原指示劑法E.酸堿指示劑法

例2.以下那種藥物中應(yīng)檢查對氨基苯甲酸（E）A.鹽酸普魯卡因B.鹽酸普魯卡因胺C.注射用鹽酸普魯卡因D.鹽酸普魯卡因胺片E.鹽酸普魯卡因注射液

例3.鹽酸普魯卡因采用亞硝酸鈉滴定法測定含量時的反應(yīng)條件是（ABCDE）A.強酸B.加入適量溴化鉀C.室溫（10～30℃）下滴定D.滴定管尖端深入液面E.永停法指示終點

第二節(jié)苯乙胺類藥物的分析

苯乙胺類藥物的基本結(jié)構(gòu)*常見的苯乙胺類藥物鹽酸苯乙雙胍鹽酸克侖特羅鹽酸麻黃堿硫酸沙丁胺醇一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

1.脂烴胺基側(cè)鏈，顯弱堿性

2.酚羥基，易氧化變色，可發(fā)生三氯化鐵反應(yīng)

3.具手性碳原子，具旋光性

4.溶解性游離堿難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑，其鹽可溶于水

5.UV6.IR7.取代基：具芳伯氨基的藥物，可用重氮化—偶合反應(yīng)鑒別、亞硝酸鈉滴定法測定含量。二、鑒別試驗1.三氯化鐵反應(yīng)2.氧化反應(yīng)3.與甲醛—硫酸反應(yīng)4.UV與IR5.與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)（Rimini反應(yīng)）脂肪族伯胺的專屬反應(yīng)6.雙縮脲反應(yīng)側(cè)鏈具有氨基醇結(jié)構(gòu)的鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、鹽酸去氧腎上腺素可用此反應(yīng)鑒別

三、特殊雜質(zhì)檢查

雜質(zhì)來源原料殘存

檢查方法

UV

（一）酮體的檢查檢查原理利用酮體在310nm波長處有最大吸收，而藥物本身在此波長處幾乎沒有吸收，規(guī)定一定濃度溶液在310nm波長處的吸收度限制酮體的量。例中國藥典（2005年版）規(guī)定腎上腺素中檢查酮體的方法為：取本品，加鹽酸溶液（9→2000）制成每1ml中含2.0mg的溶液，于310nm波長處測定，吸光度不得過0.05，已知酮體在310nm波長處的百分吸收系數(shù)為453，腎上腺素在該波長處無吸收。計算腎上腺素中酮體的限量。（二）有關(guān)物質(zhì)檢查

1.鹽酸氨溴索HPLC2.鹽酸苯乙雙胍中有關(guān)雙胍的檢查檢查方法：紙色譜法（PC）分離后，甲醇萃取，紫外-可見分光光度法于232nm波長處測定吸光度，控制吸光度以控制有關(guān)雙胍的量

3.硫酸特布他林

TLC中高低濃度對比法四、含量測定

（一）非水溶液滴定法原料藥

脂烴胺基側(cè)鏈，顯弱堿性

（二）溴量法鹽酸去氧腎上腺素及其注射液、重酒石酸間羥胺反應(yīng)摩爾比為1∶3（三）紫外分光光度法與比色法鹽酸克侖特羅栓具芳伯氨基，可發(fā)生重氮化—偶合反應(yīng)對照法定量

偶合劑N-（1-萘基）-乙二胺遇亞硝酸也能顯色，干擾比色測定，所以在重氮化后，應(yīng)加氨基磺酸銨將剩余