高效液相色譜分析操作條件選擇課件

高效液相色譜儀操作條件選擇組員：魏鵬翔、崔建哲、張龍、韓守印、李淼、孫磊。指導教師：姜洪文高效液相色譜分析操作條件選擇目錄實驗目的實驗原理儀器與試劑實驗步驟儀器清洗（結束工作）高效液相色譜分析操作條件選擇一、實驗目的掌握色譜分析的原理掌握高效液相色譜儀的基本結構和工作原理掌握SY-8100高效液相色譜儀的基本操作步驟掌握HPLC條件試驗的方法以及分離條件的確定高效液相色譜分析操作條件選擇二、實驗原理本次實驗采用ODS-C18色譜柱，以甲醇+水混合液為流動相，根據混合物中萘、聯苯和菲在固定相與流動相間分配性質的不同，進行分離。不同比例的甲醇+水混合液為流動相，流動相的極性發(fā)生改變，因此混合液的分離條件也發(fā)生了改變，選擇能將混合液中各組分能充分分離并且相對分析時間短的條件，綜合確定HPLC法分析萘、聯苯、菲的分析條件，完成對混合液的分析。檢測器采用紫外分光（UV）檢測器，檢測波長為254nm。高效液相色譜分析操作條件選擇三、儀器與試劑儀器：

SY-8100高效液相色譜儀 1臺

KQ-50B超聲波清洗器 1臺

AP-01P真空泵 1臺過濾裝置 1套微量注射器 50μL 1支容量瓶 50mL 7只藥品：萘（G.R.）、聯苯（G.R.）、菲（G.R.）、甲醇（G.R.）、二次蒸餾水高效液相色譜分析操作條件選擇四、實驗步驟流動相的準備1、流動相的過濾安裝抽濾裝置，選用有機相過濾膜，過濾試劑甲醇；選用無機相過濾膜，過濾二次蒸餾水。高效液相色譜分析操作條件選擇2、流動相的脫氣

將盛有過濾好甲醇、二次蒸餾水的試劑瓶分別放于超聲波清洗器中，進行脫氣處理。高效液相色譜分析操作條件選擇儀器的準備1、更換流動相將A泵的輸液管放入處理好的甲醇試劑瓶中；B泵的輸液管放入處理好的二次蒸餾水試劑瓶中。2、分別排除A、B兩個泵輸液管中的氣泡高效液相色譜分析操作條件選擇3、開啟高壓泵A、高壓泵B、UV檢測器、混合器的電源，打開工作站

高效液相色譜分析操作條件選擇分析步驟1、分別設置兩個高壓泵的流量，使總流量為F＝1.00mL/min，分別啟動兩泵高效液相色譜分析操作條件選擇2、待基線穩(wěn)定后，完成標樣的分析，記錄分析所獲得的各組分的保留時間、理論塔板數、分離度。數據填表3、選擇最佳流動相配比，調整A、B兩泵的流量。待基線穩(wěn)定后吸取標樣，完成分析后建立組分表，再完成試樣的分析，測得試樣中萘、聯苯和菲的含量，完成實驗高效液相色譜分析操作條件選擇實驗數據

保留時間分離度理論塔板次數萘聯苯菲萘聯苯菲萘聯苯菲高效液相色譜分析操作條件選擇五、儀器的清理（結束工作）更換流動相將流動相重新更換為處理過的甲醇，以利于色譜柱的保護。清洗“進樣閥”用適量的甲醇清洗進樣器、進樣閥，以避免樣品組分的殘留。高效液相色譜分析操作條件選擇THEENDTHANKSPPT模板下載：

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