GB 5009.299-2024 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中乳鐵蛋白的測(cè)定

學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載中

華

人

民

共

和

國(guó)

國(guó)

家

標(biāo)

準(zhǔn)學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載2GB5009.99—20242食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中乳鐵蛋白的測(cè)定國(guó)

家

市

場(chǎng)

國(guó)

家

市

場(chǎng)

監(jiān)

督

管

理

總

局

發(fā)

布-

- -

-學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載2GB5009.99—2024學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載2食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中乳鐵蛋白的測(cè)定1

范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中乳鐵蛋白的高效液相色譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于巴氏殺菌乳、調(diào)制乳、含乳飲料、調(diào)制乳粉及乳基嬰幼兒配方食品中牛乳鐵蛋白含量的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)不適用于風(fēng)味發(fā)酵乳、豆基嬰幼兒配方食品中牛乳鐵蛋白的測(cè)定。2

原理試樣中的牛乳鐵蛋白經(jīng)磷酸鹽緩沖液提取,肝素親和柱富集凈化后,反相高效液相色譜柱分離,紫外檢測(cè)器于280nm

處檢測(cè),外標(biāo)法定量。3

試劑和材料除非另有說(shuō)明,本方法所用試劑均為分析純,水為

GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。13. 試劑1113.. 乙腈(CH3CN):色譜純11 C

31213143.. 三氟乙酸(F C

31213143..

氯化鈉(NaCl)。3.. 磷酸(H3PO4)。15 223.. 磷酸氫二鈉(Na15 223. 試劑配制 1 05

4213.. 磷酸鹽緩沖液Ⅰ:稱取7.g磷酸氫二鈉、8.g氯化鈉,加900mL水溶解,用 1 05

4212±0.,加水定容至1000mL,臨用現(xiàn)配。2 4 5 2223.. 磷酸鹽緩沖液Ⅱ:稱取28.g磷酸氫二鈉,加900mL水溶解,用磷酸調(diào)pH

4 5 222容至1000mL,臨用現(xiàn)配。 1 4233..

0.%三氟乙酸溶液:量取1mL三氟乙酸注入900mL水中,用水稀釋至1000 1 423濾膜。33. 標(biāo)準(zhǔn)品3C 1牛乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)品(AS號(hào):46897-68-9):純度≥95%,鐵含量≤35mg/100g,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證C 1予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)品。注:標(biāo)準(zhǔn)品可以使用滿足溯源要求的商品化標(biāo)準(zhǔn)溶液。43. 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制4 (0 1413.. 牛乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液

5.mg/mL):稱取50mg(精確至0.mg)牛乳鐵蛋 (0 1410解,轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶并定容至刻度,混勻,

℃~4℃條件下保存,可保存3個(gè)月。0 (50 0423.. 牛乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)中間溶液

0.

mg/mL):吸取1.

mL牛乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液,用 (50 0421學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載2GB5009.99—2024學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載2沖液Ⅰ定容至10mL,臨用現(xiàn)配。430 03.. 牛乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液:準(zhǔn)確移取上述牛乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)中間溶液,用磷酸鹽緩沖液430 0釋定容,配制成濃度分別為

1.

μg/mL、5.

μg/mL、10.

μg/mL、50.

μg/mL、100.

μg/mL

和200.μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液,臨用現(xiàn)配。53. 材料5 1513.. 肝素親和柱:

mL,柱容量≥2mg,或性能相當(dāng)者(驗(yàn)證方法見(jiàn)附 151注:使用不同廠商的肝素親和柱,在樣品提取、上樣、淋洗和洗脫的操作方面可能會(huì)略有不同,應(yīng)根據(jù)肝素親和柱特點(diǎn)進(jìn)行優(yōu)化。 ,0.523.. 濾膜, ,0.52 ,0.533.. 水相針頭濾器:聚醚砜 ,0.534

儀器和設(shè)備1 12 434564. 高效液相色譜儀:配有紫外檢測(cè)器或1 12 434564. 天平:感量分別為0.1g和0.4. 冷凍離心機(jī):

℃,轉(zhuǎn)速≥10000r/min。4.

pH計(jì):精度為0.1。4. 渦旋振蕩器。4. 恒溫水浴鍋。74. 固相萃取柱裝置。75

分析步驟1115. 樣品前處1115.. 試樣制備取有代表性的樣品至少200g,液態(tài)樣品搖勻后儲(chǔ)存于容器中作為試樣,于0℃~4℃保存,備用;固態(tài)樣品混勻后儲(chǔ)存于容器中作為試樣,常溫下干燥保存,備用。125.. 試樣提121215... 液態(tài)試樣(巴氏殺菌乳、調(diào)制乳、含乳飲121稱取5g(精確至0.1g)試樣于燒杯中,加入適量磷酸鹽緩沖液Ⅱ提取,分次將樣品轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶,用磷酸鹽緩沖液Ⅱ定容至刻度,充分混勻后轉(zhuǎn)入離心管,在4

℃條件下10000r/min離心8min,取樣液待凈化。1225... 固態(tài)試樣(調(diào)制乳粉、乳基嬰幼兒配方食122稱取1g~5g(精確至0.1g)試樣于燒杯中,加入溫?zé)?溫度不超過(guò)50℃)的磷酸鹽緩沖液Ⅱ,攪拌使樣品溶解,冷卻至室溫,分次將樣品轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶并用磷酸鹽緩沖液Ⅱ定容至刻度,充分混勻后轉(zhuǎn)入離心管中,取40.mL溶液在4℃條件下10000r/min離心8min,取樣液待凈化。135.. 試樣凈130肝素親和柱使用前先加入5.mL磷酸鹽緩沖液Ⅱ活化。準(zhǔn)確移取10.

mL上述樣液過(guò)柱,控制0流速在1mL/min~3mL/min,待樣液滴完后,用10.

mL磷酸鹽緩沖液Ⅱ淋洗,棄去流出液;再用2時(shí)間/min乙腈/%0.1%三氟乙酸溶液/%01585208515221585251585ｏｍ標(biāo)準(zhǔn)兔ｗｗｗ．ｂｚｆ兔ｘｗ．ｃ學(xué)下載2GB5009.99—2024ｏｍ標(biāo)準(zhǔn)兔ｗｗｗ．ｂｚｆ兔ｘｗ．ｃ學(xué)下載20 0 45.mL磷酸鹽緩沖液Ⅰ洗脫,收集洗脫液并用磷酸鹽緩沖液Ⅰ定容至5.0mL,過(guò)0.5μm

水0 0 4器,供上機(jī)檢測(cè)分析用。注:在樣品過(guò)柱前,可根據(jù)實(shí)際樣品中乳鐵蛋白含量調(diào)整具體上樣液體積。25. 儀器參考條件2 4

5 3 2 621 222 3235.. 色譜柱:C

4

5 3 2 621 222 3235.. 檢測(cè)波長(zhǎng):80nm。5.. 柱溫:0℃。 52425 :05. 52425 :05..

流速

1.mL/min。 :1%265.. 流動(dòng)相

0. 三氟乙酸溶液和乙腈,梯度洗脫 :1%26表1

流動(dòng)相梯度洗脫參考程序表m ×V2×1000

表1

流動(dòng)相梯度洗脫參考程序表m ×V2×1000

……(1)31將牛乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液分別注入高效液相色譜儀中,測(cè)定相應(yīng)的峰面積,以標(biāo)準(zhǔn)工作液中1牛乳鐵蛋白的濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。牛乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖見(jiàn)附錄A中圖

A.。45. 試樣溶液的測(cè)定4將試樣溶液注入高效液相色譜儀中,得到峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣中牛乳鐵蛋白的濃度。6

分析結(jié)果的表述1試樣中牛乳鐵蛋白含量按式()計(jì)算:1X=ρ×V1×V3×100式中:X ———試樣中牛乳鐵蛋白的含量,單位為毫克每百克(mg/100g);μρ ———根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算得到的試樣溶液中牛乳鐵蛋白的濃度,單位為微克每毫升(g/μmL);V1 ———試樣提取液定容體積,單位為毫升(mL);V3 ———洗脫液定容體積,單位為毫升(mL);100 ———換算系數(shù);gm ———試樣的質(zhì)量,單位為克();gV2 ———樣液過(guò)柱體積,單位為毫升(mL);3學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載2GB5009.99—2024學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載21000

———換算系數(shù)。計(jì)算結(jié)果保留3位有效數(shù)字。7

精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。8

其他0 30當(dāng)液態(tài)試樣的取樣量為5.0g,定容體積為25mL時(shí),本方法中液態(tài)試樣檢出限為0.0 30定量限為1mg/100g;當(dāng)固態(tài)試樣的取樣量為5.0g,定容體積為50mL時(shí),檢出限為2mg/100g,定量限為6mg/100g。4學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載2GB5009.99—2024學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載2附 錄

A牛乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液液相色譜圖5 1牛乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.μg/mL)液相色譜圖見(jiàn)圖

5 11 /5

0圖

A. 牛乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.μgmL)1 /5

05學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載2GB500