SNT 1699.2-2006豬流行性腹瀉病毒直接免疫熒光試驗(yàn)操作規(guī)程

中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)豬流行性腹瀉病毒直接免疫熒光試驗(yàn)操作規(guī)程2006-01-26發(fā)布國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局ISN/T1699分為三部分：—豬流行性腹瀉微量血清中和試驗(yàn)操作規(guī)程；—-豬流行性腹瀉病毒直接免疫熒光試驗(yàn)操作規(guī)程；——豬流行性腹瀉間接斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)操作規(guī)程。本部分為SN/T1699的第2部分。本部分的附錄A為規(guī)范性附錄。本部分由國(guó)家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會(huì)提出并歸口。本部分起草單位：中華人民共和國(guó)廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局。本部分系首次發(fā)布的出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。豬流行性腹瀉病毒直接免疫熒光試驗(yàn)操作規(guī)程SN/T1699的本部分規(guī)定了豬流行性腹瀉病毒直接免疫熒光試驗(yàn)的操作方法。本部分適用于豬流行性腹瀉的診斷。下列文件中的條款通過(guò)SN/T1699的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本部分，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本部分達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本下列縮略語(yǔ)適用于SN/T1699的本部分。4儀器設(shè)備5試驗(yàn)材料5.10.01mol/LpH7.2磷酸鹽緩沖液(PBS)配制方法見(jiàn)A.1.1,或按診斷試劑說(shuō)明書(shū)配制。5.2甘油緩沖鹽水5.30.2%伊文思藍(lán)溶液配制方法見(jiàn)A.1.3,或按診斷試劑說(shuō)明書(shū)配制。5.4熒光抗體本部分使用水符合GB/T6822中二級(jí)水的規(guī)格。5.6被檢樣品5.7陽(yáng)性樣本指定單位提供。5.8陰性樣本指定單位提供。26.1標(biāo)本的制作將取得的病死豬的空腸樣本，放于潔凈培養(yǎng)皿中，加入少量PBS液，用眼科剪子剖開(kāi)腸管在PBS液6.1.1腸上皮細(xì)胞洗脫物涂片6.1.2腸組織冰凍切片切片標(biāo)本。6.2染色按熒光抗體說(shuō)明書(shū)標(biāo)定的工作效價(jià)，用0.2%伊文思藍(lán)稀釋熒光抗體。將稀釋后的熒光抗體直接滴加到固定的腸上皮細(xì)胞洗脫物涂片標(biāo)本及腸管切片標(biāo)本土，以覆蓋滿(mǎn)為宜。放濕盒中于37℃溫箱感作30min,6.4封固7結(jié)果判定鏡檢判定時(shí)，應(yīng)注意熒光物質(zhì)的部位及顏色，觀察標(biāo)本細(xì)胞漿，細(xì)胞漿外或胞核內(nèi)的熒光不能判為陽(yáng)性。用異硫氰酸熒光黃標(biāo)記的熒光抗體，在熒光顯微鏡下發(fā)出耗綠色熒光，凡呈暗綠色或黃色的熒細(xì)胞漿內(nèi)見(jiàn)有彌漫性或顆粒性亮綠色的熒光時(shí)，判定為陽(yáng)性細(xì)胞漿內(nèi)未見(jiàn)有彌漫性或顆粒性亮綠色的熒光時(shí)，判為陰性。(規(guī)范性附錄)試劑配制與器材處理A.1試劑配制磷酸氫二鈉(Na?HPO?·12H,O)8.70g磷酸二氫鈉(NaH?PO?·2H,O)0.89g氯化鈉(NaCl)22.80g以上試劑應(yīng)選用分析純，將上述成分溶解于適量蒸餾水中，最后定容至3000mL,103kPa20minA.1.30.2%伊文思藍(lán)溶液稱(chēng)取0.2g