高中生物選修一粗提取與鑒定

關(guān)于高中生物選修一粗提取與鑒定一、基礎(chǔ)知識：提取DNA的方法（1）

DNA和蛋白質(zhì)等成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同；（0.14mol/L的NaCl溶液,DNA溶解度最低，析出）

選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使DNA充分溶解，而雜質(zhì)沉淀，或者相反；1、DNA的溶解性（2）

DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則溶于酒精，利用這一原理，可以將DNA與蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離。第2頁,共10頁，2024年2月25日，星期天一、基礎(chǔ)知識：提取DNA的方法（1）蛋白酶：水解蛋白質(zhì)，不能水解DNA。（2）高溫：大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60－80℃的高溫，而DNA在80℃以上才會變性。（3）洗滌劑：瓦解細(xì)胞膜（主要破壞膜中的蛋白質(zhì)分子），但對DNA沒影響。2、DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性第3頁,共10頁，2024年2月25日，星期天（1）二苯胺：

沸水浴條件下，DNA遇二苯胺沸水浴5min會染成藍(lán)色（2）甲基綠：將

DNA染成綠色3、DNA鑒定原理第4頁,共10頁，2024年2月25日，星期天二、實驗設(shè)計原則上只要含DNA的生物材料都可以，但是選取DNA含量相對較高的生物組織，成功率更大。（一）實驗材料的選取

本實驗材料：新鮮雞血細(xì)胞液和雞全血相比，雞血細(xì)胞液中DNA相對含量高，保證實驗?zāi)芴崛〉阶銐蛄康腄NA。第5頁,共10頁，2024年2月25日，星期天二、實驗設(shè)計（二）破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液1.動物細(xì)胞：加蒸餾水

使細(xì)胞吸水脹破，玻璃棒攪

拌可加速細(xì)胞膜和核膜破裂，

過濾后收集濾液2.植物細(xì)胞：切碎后加洗滌劑和食鹽，然后充分?jǐn)嚢?、研磨，過濾后收集濾液；（P55問題）第6頁,共10頁，2024年2月25日，星期天二、實驗設(shè)計（三）去除濾液中的雜質(zhì)

方案3：控制溫度在60~75℃

方案2：濾液中加嫩肉粉（木瓜蛋白酶）

方案1：控制NaCl溶液的濃度，反復(fù)地

溶解與析出DNA，去除雜質(zhì)第7頁,共10頁，2024年2月25日，星期天

前面處理后的溶液過濾，加與濾液體積相等的、冷卻的酒精溶液(體積分?jǐn)?shù)95％)，靜置2－3min，溶液中會出現(xiàn)白色絲狀物

——粗提取DNA用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水1、DNA的析出（進(jìn)一步提純DNA）（四）DNA的析出與鑒定第8頁,共10頁，2024年2月25日，星期天2.DNA的鑒定⑴向兩支試管中分別加入2mol/LNaCl

溶液5ml⑵其中一支試管中加DNA絲狀物⑶各加入二苯胺試劑4ml⑷混勻后，沸水浴中加熱5min⑸待冷卻后，比較兩只試管中溶液的顏色變化觀察現(xiàn)象：溶解絲狀物的溶液變?yōu)樗{(lán)色（四）DNA的析出與鑒定第9