19.1放射性核素和放射性標記物的制備講解

第十九章放射免疫技術知識目標1.掌握放免技術的基本概念及類型2.掌握RIA和IRMA的測定原理及關鍵技術（重難點）。3.熟悉放射標記物的鑒定與純化。4.熟悉RIA和IRMA的臨床應用與評價能力目標運用放射免疫技術分析和解決臨床檢驗實際問題。思政-素質(zhì)目標責任心、細心、生物安全意識、質(zhì)控意識教學目標目錄一放射性核素和放射性標記物的制備二放射免疫分析三免疫放射分析應用放射性核素標記抗原或抗體，通過免疫反應進行定量測定。前言將放射性核素高敏感的示蹤特點和抗原抗體反應的高特異性特點相結(jié)合的一種體外測定超微量物質(zhì)的新技術。放射免疫技術基本模式放射免疫分析免疫放射分析IRMA

方法學評價分類RIA靈敏度高特異性強重復性好樣品及試劑用量少操作簡便易于標準化第一節(jié)放射性核素和放射性標記物的制備放射性核素作為放射性免疫技術的標記物，選擇何種放射性核素以及如何制備放射標記物（將放射性核素與抗原或抗體連接），是建立放射免疫技術的基礎。一、放射性核素的基本知識基本概念指在自然條件下可發(fā)生自發(fā)性的轉(zhuǎn)化，由一種放射性核素轉(zhuǎn)變成另一種放射性核素，并同時釋放射線（α、β、γ），又稱為放射性衰變?；绢愋鸵罁?jù)其衰變方式α衰變、β衰變、γ衰變最常用的放射性核素是125I

125I的優(yōu)點化學性質(zhì)比較活潑，標記方法簡單，且容易獲得高比活性的標記物；在衰變過程中產(chǎn)生γ射線，便于測量且效率高；半衰期適中（60天左右），且廢棄物較容易處理。125I的缺點用125I取代H，可能使原物質(zhì)免疫活性受到影響；易因發(fā)生輻射損傷而使標記抗原變性；作為商品化試劑的產(chǎn)品貨架期較短。放射性核素放射活性的檢測利用射線照射閃爍體（NaI晶體），導致晶體分子激發(fā)，在退激發(fā)時，閃爍體發(fā)出一定波長的熒光；再由光電倍增管將極微弱的熒光轉(zhuǎn)換成光電子并放大107倍；從光電倍增管輸出的電信號經(jīng)過放大器放大，經(jīng)單道分析器甄別處理，并在定標器上顯示。二、放射性核素標記抗原抗體方法主要包括間接標記法直接標記法（氯胺T法）125I-125I或125I+125I-標記物（混合物）Ch-T、LPO氧化取代反應（一）直接標記法——氯胺T法（Ch-T）

氯胺T將125I的I－氧化為I+，I+取代蛋白質(zhì)酪氨酸苯環(huán)的氫，形成穩(wěn)定的放射標記物（二碘酪氨酸），最后加入偏重亞硫酸鈉（還原劑）終止反應。使用無還原劑的高比放射性碘源被標記物用量要少Ch-T用量要低控制總反應體積<200μl反應時間1分鐘~2分鐘弱堿性反應條件（二）間接標記法預先將125I用Ch-T法標記琥珀酰胺酯，制成的125I化脂功能基團可與蛋白分子上的氨基酸殘基反應，從而使待標記物被碘化。三、放射標記物的純化與鑒定（一）放射標記物的純化因游離的125I與125I標記抗原（抗體）分子的大小相差懸殊，故采用凝膠層析即可進行分離純化聚合、損傷物標記蛋白游離125I比放射活性高比放射性高純度完整免疫活性放射化學純度單位標記物中結(jié)合于被標記物上的放射性占總放射性的百分率應大于95%

免疫活性標記物與抗體結(jié)合的能力標記物與過量抗體反應百分比該值越大,標記物免疫活性好（二）放射標記物的鑒定計算法自身置換法

比放射活性單位化學量標記物中所含的放射性強度單位：Ci/gmCi/mgCi/mmol比放射性過高，將影響標記物免疫活性比放射性－計算法

結(jié)果欠準，計算簡便依據(jù)標記反應中放射性核素的利用率（標記率）來計算標記物的比放射性.比放射性－自身置換法比較標記抗原與標準抗原的免疫活性來測定標記物的比放射性。作一條常規(guī)的RIA標準曲線，反應體系包括定量標記抗原、不同濃度的非標記標準品抗原、限量抗體；同時另作一條不加非標記標準品、只加抗體和不同劑量的標記抗原的自身置換曲線。自身置換曲線

標準曲線

反應平衡后，測定B/T%。若從兩條曲線上取一點相同的B/T%，則（標記物+標準品）標準曲線=（標記物）自身置換曲線。由此便可直接計算標記抗原的含量，并進一步求得比放射活性。自身置換法測定標記化合物的比放射活性，只適用于RIA的標記抗原。使用時應注意：