27.3 單克隆丙種球蛋白病的檢測方法講解

第二十七章

免疫增殖病及檢驗(yàn)教學(xué)目標(biāo)知識目標(biāo)掌握：免疫增殖病的概念，常見的單克隆丙種球蛋白病的臨床免疫學(xué)特征、單克隆丙種球蛋白病的檢測方法；熟悉：免疫增殖病的免疫損傷機(jī)制；了解：免疫增殖病的分類。能力目標(biāo)學(xué)會Ig定量檢測和分類鑒定方法；免疫電泳技術(shù)的原理和方法。思政素質(zhì)目標(biāo)責(zé)任心、耐心、質(zhì)控意識、生物安全意識、誠信觀念。免疫增殖病的概念和分類單克隆丙種球蛋白病的概念常見的單克隆丙種球蛋白病本周蛋白、M蛋白的概念單克隆丙種球蛋白病的檢測本章要點(diǎn)概述一單克隆丙種球蛋白病的臨床免疫學(xué)特征二單克隆丙種球蛋白病的檢測方法三目錄

血清蛋白區(qū)帶電泳免疫球蛋白定量檢測免疫球蛋白的分類鑒定本周蛋白檢測冷球蛋白檢測單克隆丙種球蛋白病的檢測方法三一、血清蛋白區(qū)帶電泳血清區(qū)帶電泳是測定M蛋白的一種定性實(shí)驗(yàn)，常采用醋酸纖維素膜和瓊脂糖電泳兩種方法。

M蛋白在電泳時(shí)出現(xiàn)于

～

區(qū)代中，不同類型的M蛋白的電泳后所處位置。常采用醋酸纖維素膜和瓊脂糖凝膠電泳兩種方法：多克隆增殖血清區(qū)帶電泳單克隆增殖血清區(qū)帶電泳正常血清區(qū)帶電泳腎病綜合征血清區(qū)帶電泳肝硬化血清區(qū)帶電泳二、免疫球蛋白定量檢測免疫球蛋白定量測定較常用的方法有單向擴(kuò)散法與免疫比濁法，前者較為簡便，后者更為準(zhǔn)確迅速。惡性單克隆丙種球蛋白病常呈現(xiàn)某一類丙種球蛋白的顯著增高。在良性丙種球蛋白病的血清標(biāo)本中，M蛋白的升高幅度一般不象惡性丙種球蛋白病那么高三、免疫球蛋白的分類鑒定

免疫電泳免疫選擇電泳免疫固定電泳免疫電泳：

免疫電泳是將瓊脂糖電泳和免疫雙向擴(kuò)散相結(jié)合的一項(xiàng)技術(shù)。血清標(biāo)本先行區(qū)帶電泳分成區(qū)帶，繼而用特定的抗血清進(jìn)行免疫擴(kuò)散，陽性樣本的M蛋白將在適當(dāng)?shù)牟课恍纬僧惓３恋砘?，根?jù)抗血清的種類、電泳位置及沉淀弧的形狀可以對M蛋白作出判定。正常及某些患者免疫電泳圖譜

上孔中為血清，下孔中為尿液，槽中為抗血清，箭頭所指為骨髓瘤蛋白a：抗正常人血清；b：抗IgG血清；c：抗IgA血清；d：抗IgM血清e(cuò)：抗κ血清；f：抗λ血清A：IgA/λ型骨髓瘤；B：IgG/κ型骨髓瘤；C：IgG重鏈病免疫選擇電泳：

制備含抗κ或λ血清的薄層瓊脂板，打孔并加入待測標(biāo)本進(jìn)行火箭電泳，待形成相應(yīng)的火箭樣沉淀峰后，于孔的兩側(cè)各挖一槽，加入抗某類免疫球蛋白血清或另一型抗輕鏈血清，溫育擴(kuò)散后，根據(jù)沉淀弧形成的情況，進(jìn)行分析鑒定。免疫選擇電泳圖譜示意圖

瓊脂中含抗κ及抗λ抗血清，示例孔中為血清標(biāo)本，槽中為抗IgA重鏈抗血清A：正常人；B：α重鏈??；C：IgA骨髓瘤免疫固定電泳：

免疫固定電泳是血清區(qū)帶電泳與免疫沉淀反應(yīng)相結(jié)合的定性實(shí)驗(yàn)。與免疫電泳比較免疫固定電泳具有更高的靈敏性，M蛋白在免疫固定電泳中顯示狹窄而界限明確的區(qū)帶，而多克隆增殖或正常血清

球蛋白區(qū)帶則比較彌散。IgG/λ型多發(fā)性骨髓瘤的免疫固定電泳圖譜IgG/

型和IgG/

型MM的免疫固定電泳圖譜IgA/

型和IgA/

型MM的免疫固定電泳圖譜根據(jù)免疫固定電泳不同泳道出現(xiàn)的異常條帶，可對多發(fā)性骨髓瘤進(jìn)一步鑒定和分型：四、本周蛋白檢測3.直接定量分析尿液透析濃縮50倍后進(jìn)行2.免疫固定電泳1.本周蛋白定性檢查(篩查)溶解(+)90℃沉淀標(biāo)本50℃~60℃五、冷球蛋白檢測冷球蛋白是血清中的一種特殊蛋白質(zhì)，在4℃時(shí)自發(fā)沉淀，加溫至37℃時(shí)又可溶解，故常利用這種可逆性冷沉淀的特性對其進(jìn)行測定。取患者外周血，分離出血清置4℃冰箱中，一般在24h～72h出現(xiàn)沉淀，若1周仍不出現(xiàn)沉淀者方可判斷為陰性。如形成沉淀，再置37℃溫育使其復(fù)溶，也可將冷沉淀物離心洗滌后做定性與定量分析異常免疫球蛋白檢測的應(yīng)用原則

凡檢出無法解釋的免疫球蛋白異常增高，都應(yīng)建議做進(jìn)一步的檢查。初篩實(shí)驗(yàn)：區(qū)帶電泳分析、免疫球蛋白定量檢測或尿本-周蛋白定性。確證實(shí)驗(yàn)：免疫電泳、免疫固定電泳、免疫球蛋白亞型定量和血清及尿中輕鏈等檢測。免疫增殖性疾病是指由于淋巴細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化所導(dǎo)致的一組疾病。免疫球蛋白的多克隆增殖多為良性；單克隆增殖多呈惡性發(fā)展趨勢。漿細(xì)胞異常增殖產(chǎn)生大量無正常功能及完整