血清藥理學方法

關(guān)于血清藥理學方法一、中藥血清藥理學的概況

中藥血清藥理學是指將中藥或中藥復(fù)方經(jīng)口給動物灌服一定時間后采集動物血液、分離血清，用此含有動物成分的血清進行體外實驗的一種實驗技術(shù)。經(jīng)過十幾年研究取得一定進展，但其理論體系還有待完善，具體實驗操作也亟需規(guī)范。第2頁,共19頁，2024年2月25日，星期天中藥血清藥理學主要針對中藥及其復(fù)方復(fù)雜多樣的化學成分特點，用含藥血清代替煎劑或粗提物進行體外實驗。該法克服了將中藥復(fù)方制劑直接用于體外實驗的缺點，通過含藥血清在體外的藥理效應(yīng)來反映藥物在機體內(nèi)的作用，提高了實驗結(jié)果的可信性。結(jié)合現(xiàn)代化學、微生物學、分子生物學、藥理、臨床等學科。中藥血清藥理學得到了進一步的開展，并引起了國內(nèi)外從事中藥研究人員的極大關(guān)注。血清藥理研究方法正不斷地被應(yīng)用于一些中藥復(fù)方及西藥的藥效評價及藥理學研究，并取得了新的進展。第3頁,共19頁，2024年2月25日，星期天二、中藥血清藥理學的產(chǎn)生

中藥藥理的離體實驗多是運用粗提物直接進行體外實驗，在方法學上存在一些問題和缺陷，比如說中藥成分復(fù)雜，粗提物理化性質(zhì)（如雜質(zhì)、酸堿度、鞣質(zhì)等）不十分穩(wěn)定，體外實驗結(jié)果可能影響藥效的判斷和評價?；诖耍毡緡┒坚t(yī)院內(nèi)分泌疾病中心的田代真一在第一屆和漢醫(yī)藥學會會議(1984年)上提出了含藥血清實驗方法的設(shè)想，并進行了一系列富有成效的研究工作?！昂幯濉睂嶒灧椒粗附o動物或人服用一定量的藥物后，經(jīng)過一定的時間采血獲得血清，然后進行體外實驗的一種研究方法，田代真一將這種方法命名為血清藥理學。這一設(shè)想受到了醫(yī)學界的廣泛關(guān)注。第4頁,共19頁，2024年2月25日，星期天三、血清藥理學在我國的研究現(xiàn)狀

1、血清藥理學的時效關(guān)系研究利用含藥血清來評價藥效，何時能夠采集到含藥量較高的血清，找出給藥后的最佳采血時間以避免由于藥效物質(zhì)代謝消耗或尚未吸收造成的假陰性結(jié)果，是非常重要的問題。由于血清中確切的藥效成分并不清楚，因此往往以藥效指標來評判給藥時間和采血時間的優(yōu)劣，即“時效關(guān)系”的研究。研究者們對不同給藥時間和采血時間的藥效進行了研究。第5頁,共19頁，2024年2月25日，星期天給藥時間上，目前常用的方法有：１次給藥，或間隔２～４ｈ給藥，或每天１～３次，連續(xù)３～１０ｄ。研究認為，根據(jù)藥動學理論，固定給藥時間的間隔，相同劑量多次重復(fù)給藥后，血漿藥物濃度達到穩(wěn)態(tài)濃度，并將在此濃度下不同采血時間取得的含藥血清進行實驗，均表現(xiàn)較高且相似的藥理作用強度。采血時間上，較理想的采血時間應(yīng)在血藥濃度的高峰期。

第6頁,共19頁，2024年2月25日，星期天2、血清藥理學的量效關(guān)系研究

給藥劑量目前尚無定論，其量的大小主要取決于：一是動物的給藥量，在一定程度上，給藥量愈大則血清中的含藥量愈高；二是培養(yǎng)體系或反應(yīng)體系中的含藥血清濃度，血清濃度愈高則藥量愈大。但因含藥血清加入體外反應(yīng)體系后，濃度被稀釋，使反應(yīng)體系藥物濃度達不到在體條件下的藥物濃度。第7頁,共19頁，2024年2月25日，星期天四、血清藥理學實驗方法在我國科學研究中的應(yīng)用1、血清藥理學實驗方法在中藥新藥研制中的應(yīng)用目前，中藥的開發(fā)和研制主要是尋找藥物的有效成分或有效部位、制備精煉的中藥制劑、提高臨床療效和降低毒副作用。血清藥理學實驗方法的建立，使這一目的的實現(xiàn)變得更為切實可行。主要表現(xiàn)在以下幾個方面：①在體外藥理學實驗中，進一步驗證和評價藥物的療效，運用含藥血清對有效藥物或藥物的有效成分進行初步篩選；②血清藥理學與血清藥化學、中藥分析化學、中藥藥動學，尤其是中藥胃腸藥動學、中藥血清藥動學、中藥證治藥動學等相結(jié)合，將有利于藥物有效成分或部位的尋找和鑒定；③對藥物的制劑工藝進行比較和篩選；④對藥物的作用機理做更深入的研究。

第8頁,共19頁，2024年2月25日，星期天2、血清藥理學在方劑藥動學（ＰＫ）的應(yīng)用

黃席等將證治方劑藥動學中的復(fù)方方劑藥動學修正為復(fù)方效應(yīng)成分動力學假說。其方劑血清靶成分也是探索復(fù)方的藥效成分物質(zhì)基礎(chǔ)的。不僅如此，還研究靶成分在機體內(nèi)的藥時曲線、數(shù)學模型，其ＰＫ參數(shù)可直接指導(dǎo)臨床用藥，進行治療藥物監(jiān)測（ＴＤＭ），從而有力地提高療效，因此是單純方劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)探索的深入和發(fā)展。而血清藥理學研究過程是服用方劑后進行含藥血清的體外藥效學實驗，通過探討與方劑療效相關(guān)的成分間接地闡明藥效物質(zhì)。

第9頁,共19頁，2024年2月25日，星期天3、血清藥理學方法在腫瘤研究中的應(yīng)用

離體實驗是研究中藥抗腫瘤機理的重要方法之一。對于抗腫瘤復(fù)方中藥來說，在其配伍的多種中藥的血清中的有效成分的定量分析檢測尚未見突破性的進展情況下，血清藥理學方法是抗腫瘤復(fù)方研究的一條行之有效的途徑。

目前，此法被廣泛用于中藥抗腫瘤機理研究。研究層面包括腫瘤細胞增殖與細胞周期的調(diào)節(jié)、腫瘤細胞凋亡及分化的誘導(dǎo)、腫瘤細胞基因表達及端粒酶活性調(diào)控等方面。

第10頁,共19頁，2024年2月25日，星期天4、血清藥理學方法在神經(jīng)藥理學研究中的應(yīng)用

神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物研究涉及到許多的體外模型，運用這些模型有助于快速、高效地篩選出治療疾病的藥物。合理使用血清藥理學方法，結(jié)合疾病的體外模型，可以幫助我們對中藥復(fù)方進行分析，可較好地反映中藥藥效。

第11頁,共19頁，2024年2月25日，星期天五、對血清藥理學實驗方法的評價中藥血清藥理學作為一種新興的實驗技術(shù)和研究方法，引起了廣泛的關(guān)注，其理論體系也在不斷的完善，目前主要研究集中于以下幾個方面：①中藥復(fù)方體外實驗的方法學研究；②含藥血清藥力作用強度與體內(nèi)給藥的量效關(guān)系研究；③給藥方案研究；④反映體系中含藥物血清加入量的確定、采血時間的確定及時效關(guān)系研究；⑤含藥血清低溫保存和血清滅活對效應(yīng)的影響等。10余年來，這一方法在中藥研究中發(fā)揮了一定的作用，表明它是一個可行的研究方法，但也存在一些問題和局限性。第12頁,共19頁，2024年2月25日，星期天中藥血清藥理學的優(yōu)點1)可以排除中藥復(fù)方粗制劑本身理化性質(zhì)的干擾。中藥粗制劑中含有的各種電解質(zhì)、鞣質(zhì)、不同的pH值、滲透壓等都會在一定程度上給中藥復(fù)方研究帶來干擾。

2)避免了直接體外實驗可能得出的錯誤結(jié)論。含藥血清含有中藥制劑真正有效成分，克服了中藥制劑的體內(nèi)代謝物或機體反應(yīng)物等有效成分引起的假陰性及機體非吸收物質(zhì)的體外作用造成的假陽性，真實體現(xiàn)了復(fù)方藥物的體內(nèi)生化轉(zhuǎn)化效應(yīng)。

3)可以真實的反映體內(nèi)血藥濃度及其變化，是研究中藥藥動學的有力工具。

第13頁,共19頁，2024年2月25日，星期天中藥血清藥理學的優(yōu)點4)實驗結(jié)果與在體實驗有較好的一致性，能夠通過有效成分在血中的動態(tài)變化更好地反映中藥復(fù)方的配伍原則和藥物的量效關(guān)系；而且還能反映有可能由藥物誘導(dǎo)機體內(nèi)源性成分所產(chǎn)生的作用及中藥和其可能的代謝產(chǎn)物的藥理作用，為復(fù)方制劑的藥理研究奠定了基礎(chǔ)。

5)采用含藥血清培養(yǎng)細胞，便于應(yīng)用細胞學和分子生物學手段，從基因、基因產(chǎn)物、藥物受體和酶活性等諸方面闡述藥理機制。

6)操作相對簡單，費用較低。

7)使現(xiàn)代科學技術(shù)與傳統(tǒng)醫(yī)學有了一個切實可行的結(jié)合點，推動中醫(yī)中藥的科技進步。第14頁,共19頁，2024年2月25日，星期天中藥血清藥理學的缺點1)血清本身內(nèi)源性成分復(fù)雜，給中藥血清藥理學研究帶來了極大困難。2)中藥復(fù)方制劑經(jīng)口服后，血清藥物濃度較低，特別是中藥復(fù)方制劑中微量成分及蛋白結(jié)合率較高的成分，給藥物檢測和藥理實驗提出了難題。3)不同種屬、不同年齡的動物對藥物吸收有一定差異，從而影響到血清中含藥成分及其含量，因此，開展中藥血清藥理學研究有待于規(guī)范動物的種屬和年齡。4)因給藥劑量、采血時間不同，血清中含藥成分及其含量也不盡相同，故必須充分把握好給藥劑量及采血時間。第15頁,共19頁，2024年2月25日，星期天中藥血清藥理學的缺點5)在體外培養(yǎng)體系，不可能添加100%濃度的血清，含藥血清在培養(yǎng)液中的濃度一般不能超過20%，這使得體外培養(yǎng)難以達到體內(nèi)的真實血藥濃度；而且不是所有的中藥都通過血液起作用，有的藥物是對消化道的直接作用，難以在血液中體現(xiàn)，這也是血清藥理學不能解決的問題。6)含藥血清取自不同生理病理的個體，會出現(xiàn)含藥血清差異;經(jīng)過體內(nèi)反應(yīng)，藥物含量進一步被稀釋，成分更加復(fù)雜，增加了質(zhì)控難度。7)血清中部分物質(zhì)已是藥物作用機體細胞的反應(yīng)產(chǎn)物，如果細胞存在反饋機制，血清二次重復(fù)作用于細胞，將可能掩蓋藥物血清的實際作用。第16頁,共19頁，2024年2月25日，星期天中藥血清藥理學的缺點8)含藥血清對離體系統(tǒng)同樣也有干擾，如血清本身對體外酶活性的影響等。9)辨證論治是中醫(yī)診治疾病的方法和特點，盡管實驗醫(yī)學已經(jīng)有人將實驗和證型相結(jié)合，但在實驗醫(yī)學中往往忽視中醫(yī)的內(nèi)涵、多采取辨病論治的方法，由于辨證可以客觀反映疾病的內(nèi)在規(guī)律，疾病又是辨證論治的依據(jù)，如何將二者結(jié)合起來是中藥血清藥理學需要探討的問題。因此，中藥血清藥理學存在著一定的局限性需要在以后的工作中加以改進和克服。第17頁,共19頁，2024年2月25日，星期天六、展望目前中藥血清藥理學已經(jīng)應(yīng)用到越來越多的研究領(lǐng)域中，雖然中藥血清藥理學方法的工作起步較晚，在許多方面還需要經(jīng)驗和數(shù)據(jù)的積累，但