《DNA重組技術(shù)的基本工具》-課件

《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件1.DNA的基本組成單位:脫氧核苷酸鳥嘌呤脫氧核苷酸腺嘌呤脫氧核苷酸胞嘧啶脫氧核苷酸

胸腺嘧啶脫氧核苷酸脫氧核糖含氮堿基磷酸AGCT2.脫氧核苷酸的種類：知識(shí)重溫：DNA分子的結(jié)構(gòu)1.DNA的基本組成單位:脫氧核苷酸鳥嘌呤脫氧核苷酸腺嘌呤氫鍵平面結(jié)構(gòu)立體結(jié)構(gòu)ATGCTACG磷酸二酯鍵3.DNA分子的結(jié)構(gòu)氫鍵平面結(jié)構(gòu)立體結(jié)構(gòu)ATGCTACG磷酸二酯鍵3.DNA分子《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件11限制酶的識(shí)別序列有何特點(diǎn)？11限制酶的識(shí)別序列有何特點(diǎn)？限制酶識(shí)別序列的特點(diǎn)中軸線兩側(cè)的DNA上堿基呈反向?qū)ΨQ，重復(fù)排列如：GAA

TTC

CCC

GGGCTT

AAG

GGG

CCC中軸線限制酶識(shí)別序列的特點(diǎn)中軸線兩側(cè)的DNA上堿基呈反向?qū)ΨQ，重復(fù)1、EcoRⅠ（大腸桿菌的一種限制酶）能識(shí)別GAATTC序列，并切割G和A之間的磷酸二酯鍵。2、SmaⅠ能識(shí)別CCCGGG序列，并切割C和G之間的磷酸二酯鍵。常用的兩種限制酶1、EcoRⅠ（大腸桿菌的一種限制酶）能識(shí)別GEcoRⅠ黏性末端黏性末端EcoRⅠ黏性末端黏性末端什么叫黏性末端？當(dāng)限制酶從識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)切開時(shí)，被限制酶切開的DNA的末端帶有幾個(gè)伸出的核苷酸，他們之間正好互補(bǔ)配對(duì)，這樣的末端叫黏性末端。什么叫黏性末端？當(dāng)限制酶從識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)切開SmaⅠ平末端平末端SmaⅠ平末端平末端什么叫平末端？

當(dāng)限制酶從識(shí)別序列的中心軸線處切開時(shí)，切開的DNA的末端是平整的，這樣的末端叫平末端。平末端平末端什么叫平末端？當(dāng)限制酶從識(shí)別序列的中心軸線處切開時(shí)《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來(lái)。E·coliDNA連接酶或T4DNA連接酶可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來(lái)。E·coliDNA連接T4DNA連接酶還可把平末端之間的縫隙“縫合”起來(lái)，但效率較低T4DNA連接酶還可把平末端之間的縫隙“氫鍵TGCGATAC磷酸二酯鍵TACGTGCADNA聚合酶的作用：把單個(gè)脫氧核苷酸連接到DNA片段末端。磷酸二酯鍵DNA連接酶的作用：將兩個(gè)雙鏈DNA片段連接起來(lái)。氫鍵TGCGATAC磷酸二酯鍵TACGTGCADNA《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件1.載體需要的條件：⑴有1~多個(gè)限制酶切點(diǎn)（便于外源基因的插入）⑵對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害⑶導(dǎo)入基因能在受體細(xì)胞中復(fù)制、表達(dá)⑷有某些標(biāo)記基因，便于篩選⑴作為分子運(yùn)輸車——載體，如果沒有切割位點(diǎn)將會(huì)怎樣？⑵霍亂菌的質(zhì)粒多個(gè)限制酶切點(diǎn)，你會(huì)用它來(lái)做分子運(yùn)輸車嗎？⑶假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制或不能轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)基因生物能有預(yù)想的效果嗎？

⑷目的基因有沒有進(jìn)入受體細(xì)胞，如何去發(fā)現(xiàn)？三、“分子運(yùn)輸車”

——基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體1.載體需要的條件：⑴作為分子運(yùn)輸車——載體，如果沒有切割能復(fù)制并帶著插入的目的基因一起復(fù)制有切割位點(diǎn)標(biāo)記基因?qū)?lái)可用含青霉素的培養(yǎng)基鑒別。2、基因工程中常用的載體——質(zhì)粒質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單獨(dú)立于細(xì)菌擬核之外、具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。能復(fù)制并帶著插入的目的基因一起復(fù)制有切割位點(diǎn)標(biāo)記基因?qū)?lái)可用在進(jìn)行基因工程操作中,真正被用作載體的質(zhì)粒都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過人工改造的。

⑴質(zhì)粒⑵γ噬菌體的衍生物、某些動(dòng)植物病毒等2、基因工程中常用的載體在進(jìn)行基因工程操作中,真正被用作載體的質(zhì)粒都《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件一、基因工程的概念：二、DNA重組技術(shù)的基本工具：1.限制性核酸內(nèi)切酶——“分子手術(shù)刀”

2.DNA連接酶——“分子縫合針”3.基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車”課堂小結(jié)一、基因工程的概念：課堂小結(jié)《DNA重組技術(shù)的基本工具》--ppt課件《D