維生素片含量測(cè)定的方法驗(yàn)證

關(guān)于維生素片含量測(cè)定的方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)原理維生素B1又稱鹽酸硫胺（thiaminehydrochloride），化學(xué)名稱為氯化4-甲基-3[(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)-甲基]-5-(2-羥基乙基噻唑鎓鹽酸鹽

第2頁,共20頁，2024年2月25日，星期天性質(zhì)溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶硫色素反應(yīng)：紫外吸收特性：Amax=246nm與生物堿沉淀試劑反應(yīng)氯化物特性：特征性鑒別含量測(cè)定氯化物檢查第3頁,共20頁，2024年2月25日，星期天原理特征性鑒別——硫色素反應(yīng)

維生素B1在堿液中可被鐵氰化鉀氧化生成硫色素，色素轉(zhuǎn)溶于正丁醇(或異丁醇、異戊醇)中，顯現(xiàn)于酸中消失的藍(lán)色熒光。（見劉文英主編《藥物分析》第六版，P258）含量測(cè)定

維生素B1有紫外吸收，Amax=246nm，第4頁,共20頁，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)方法鑒別反應(yīng)

取本品約5mg，加氫氧化鈉試液2.5ml使其溶解，加鐵氰化鉀試液0.5ml與正丁醇5ml，強(qiáng)力振搖2min，放置使成兩液層，上層醇液即顯強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光，加酸使成酸性熒光即消失，再加堿使成堿性，則熒光復(fù)現(xiàn)。第5頁,共20頁，2024年2月25日，星期天含量測(cè)定1.精密稱取片粉40.98mg(相當(dāng)于維生素B125mg，標(biāo)示量為每1g藥物中含有0.164g維生素B1)，置100ml量瓶中→加鹽酸溶液（9→1000）約70ml，搖勻15分鐘使維生素B1溶解，并定容至刻度，搖勻→干燥濾紙過濾→精密量取續(xù)濾液5.0ml，置100ml量瓶中，鹽酸溶液（9→1000）定容至刻度，搖勻→得到供示品溶液。第6頁,共20頁，2024年2月25日，星期天含量測(cè)定2.精密稱取維生素B1對(duì)照品25mg，置100ml量瓶中，鹽酸溶液（9→1000）定容至刻度，搖勻→得到對(duì)照品溶液。3.將2份溶液用紫外分光光度計(jì)在246nm處分別測(cè)定吸光度，計(jì)算即得。第7頁,共20頁，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與要求鑒別試驗(yàn)吸收波長(zhǎng)選擇精密度試驗(yàn)：用同一份樣品溶液測(cè)定6次，計(jì)算RSD%重復(fù)性試驗(yàn)：引用其他組同學(xué)數(shù)據(jù)（稱樣量，吸光度）計(jì)算標(biāo)示量%，計(jì)算RSD%穩(wěn)定性試驗(yàn)：考察樣品溶液30min內(nèi)的穩(wěn)定性，計(jì)算RSD%加樣回收率試驗(yàn)：根據(jù)重復(fù)性試驗(yàn)的結(jié)果，設(shè)計(jì)加樣回收率試驗(yàn)含量測(cè)定：根據(jù)測(cè)定結(jié)果計(jì)算含量，標(biāo)示量%。如何引用？第8頁,共20頁，2024年2月25日，星期天

線性關(guān)系和范圍分析方法的驗(yàn)證1精密度試驗(yàn)2重現(xiàn)性試驗(yàn)3加樣回收試驗(yàn)4穩(wěn)定性試驗(yàn)5第9頁,共20頁，2024年2月25日，星期天線性與范圍精密稱取片粉40.98mg(相當(dāng)于維生素B125mg)，置100ml量瓶中→加鹽酸溶液（9→1000）少量，使維生素B1溶解，并定容至刻度，搖勻→分別取上述溶液3.00ml、4.00ml、5.00ml、6.00ml、7.00ml置于100ml容量瓶中，加鹽酸溶液（9→1000）至刻度，搖勻→將其置于紫外分光光度計(jì)中在246nm處測(cè)量→并用C做A的回歸曲線。第10頁,共20頁，2024年2月25日，星期天線性關(guān)系序號(hào)12345濃度（mg/ml）測(cè)定值第11頁,共20頁，2024年2月25日，星期天穩(wěn)定性試驗(yàn)精密稱取片粉40.98mg(相當(dāng)于維生素B125mg)，置100ml量瓶中→加鹽酸溶液（9→1000）少量，使維生素B1溶解，并定容至刻度，搖勻→將其置于紫外分光光度計(jì)中在246nm處測(cè)量→在0、15、30、45、60min時(shí)間點(diǎn)分別測(cè)定樣品的A246→在0、1、2、4、8、12h分別測(cè)定樣品的峰面積.RSD<2.0%，則說明樣品溶液在多少時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定；RSD>2.0%，則需要重新選取時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行計(jì)算，直到RSD<2.0%，否則要盡快測(cè)定第12頁,共20頁，2024年2月25日，星期天精密度試驗(yàn)?zāi)康臋z測(cè)儀器、試劑、操作人員、實(shí)驗(yàn)條件等的可信程度要求用對(duì)照品按樣品溶液的制備方法制備對(duì)照品溶液，同濃度至少平行操作6份，濃度與信號(hào)值要在線性范圍內(nèi)RSD<2.0%……儀器分析第13頁,共20頁，2024年2月25日，星期天同批、同法序號(hào)時(shí)間(min)信號(hào)值平均信號(hào)值RSD（%）RSD（%）1234567穩(wěn)定性試驗(yàn)第14頁,共20頁，2024年2月25日，星期天重現(xiàn)性試驗(yàn)?zāi)康目疾鞓悠啡芤褐苽浞椒ǖ目煽砍潭纫笸鷺悠钒聪嗤椒ㄖ苽錁悠啡芤海辽?份,濃度與信號(hào)值均要在線性范圍內(nèi)RSD<2.0%

……儀器分析第15頁,共20頁，2024年2月25日，星期天重現(xiàn)性試驗(yàn)(示例)試驗(yàn)序號(hào)稱樣量（g）測(cè)定值（mg）含量（mg/g）平均含量（mg/g）RSD（%）10.166622.04132.29134.530.3%<2.0%20.166724.82148.8930.166921.90131.2240.174223.54135.1350.166720.86125.136………第16頁,共20頁，2024年2月25日，星期天精密度試驗(yàn)（示例）實(shí)驗(yàn)序號(hào)信號(hào)值平均值RSD10.5120.5100.2%(<2.0%)20.50830.51140.50950.51060.509第17頁,共20頁，2024年2月25日，星期天加樣回收率試驗(yàn)?zāi)康目疾鞙?zhǔn)確度，即用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度要求設(shè)計(jì)高、中、低三個(gè)濃度，每個(gè)濃度各分別制備三份供試品溶液進(jìn)行測(cè)試，計(jì)算回收率RSD<2.0%第18頁,共20頁，2024年2月25日，星期天加樣回收試驗(yàn)序號(hào)稱樣量（g）待測(cè)組分含量（mg）對(duì)照品加入量（mg）測(cè)得量（mg）回收率（%）平均加樣回收率（%）RSD（%）10.1665.2820.250015.027.2100.130.251240.250953.0450.250015.029.898.660.25