白血病基因篩查

關于白血病基因篩查WH0血液腫瘤分類方案（1999年）新分類方案的基本原則是：結合形態(tài)學、免疫表型、遺傳改變和臨床特征來鑒定疾病的“真實本質”。提供了疾病分類與治療選擇和預后判斷的較明確關聯(lián)性，開啟了血液腫瘤靶向性治療和個性化方案的新時代。形態(tài)學免疫學細胞遺傳學第2頁,共49頁，2024年2月25日，星期天WH0血液腫瘤分類方案（2008年）組織蛋白細胞基因第3頁,共49頁，2024年2月25日，星期天基因檢測

——融合基因基因突變第4頁,共49頁，2024年2月25日，星期天融合基因的形成第5頁,共49頁，2024年2月25日，星期天Bcr/Abl融合基因第6頁,共49頁，2024年2月25日，星期天第7頁,共49頁，2024年2月25日，星期天fish探針第8頁,共49頁，2024年2月25日，星期天第9頁,共49頁，2024年2月25日，星期天白血病分子診斷的意義精確診斷準確預后指導治療科研資料白血病初發(fā)MICM診斷系統(tǒng)診斷異常標記殘留監(jiān)測靶向治療第10頁,共49頁，2024年2月25日，星期天分子診斷在白血病診斷中的應用提供早期輔助診斷及預后判斷;對治療過程進行跟蹤;進行白血病治療后的微小殘留檢測.第11頁,共49頁，2024年2月25日，星期天白血病常見融合基因CBFB/MYH11AML1/ETOPML/RARaE2A/PBX1MLL/AF4BCR/ABLTEL/AML1SIL/TAL1EVI1HOX11MLL/AF10MLL-AF9MLL/ENLNPM1/ALKNPM/MLF1MLL/ELLMLL/AFXMLL/AF1qMLL/AF1pPLZF/RARaMLL/AF6MLL/MLL（dupMLL）TLS/ERGTEL/PDGFRTEL/ABLSET/CANDEK/CANMLL/AF17E2A/HLFNPM/RARaAML1/MDS1第12頁,共49頁，2024年2月25日，星期天CBFB/MYH11是Inv(16)(p13q22)形成；是急性髓系白血病(AML)特征性染色體異常，通常見于AML-M4Eo亞型，占總AML患者的10%，其中50％發(fā)生在AML-M4Eo中。帶有Inv(16)(p13q22)的病人通常有較好的預后。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。第13頁,共49頁，2024年2月25日，星期天AML1/ETOt(8,21)(q22;q22)形成，在1973年首次報道。AML1/ETO融合基因出現(xiàn)在所有的t(8,21)陽性的AML中，同時也出現(xiàn)在具有復雜移位的t(8,21)陰性的AML病例中。t(8,21)出現(xiàn)在大約7%的AML病例中，在年輕的患者中更為常見。其主要出現(xiàn)在AML-M2這一亞型中，大約有20-40%病例具有t(8,21)。在非常少見的AML-M1，AML-M4和t-AML中也有報道。t(8,21)異位是一個較好的標志，它的存在使這類病例對一些藥物有較好的反應。因此基于細胞遺傳學和分子遺傳學的檢測結果，可以為病人選擇風險低的較好的治療方案。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。第14頁,共49頁，2024年2月25日，星期天PML/RARat(15,17)易位形成；是APL的一個典型標志，其易位造成了15號染色體上的PML基因和17號染色體上的RARa基因的融合，產生了一個融合基因PML/RARa。由于PML基因上融合位點的不同，PML/RARa有三種融合型，即:bcr1(55%),bcr2(5%),bcr3(40%)。檢測PML/RARa融合基因的存在與否，對APL的診斷，判斷ATRA的療效和預后復發(fā)都非常重要。PML/RARa陽性強烈預示著復發(fā)的可能，而其持續(xù)性陰性則預示病人有更長的生存期。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。第15頁,共49頁，2024年2月25日，星期天E2A/PBX1t(1:19)導致了19號染色體上的E2A基因和1號染色體上的PBX1基因的融合，產生了融合基因E2A/RBX1；5-6%的兒童ALL和3%的成人ALL檢測到，幾乎全部出現(xiàn)在前B細胞ALL病例中。攜帶有該易位的病人，其臨床癥狀都比較兇險。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。第16頁,共49頁，2024年2月25日，星期天MLL/AF4在50-70%的嬰幼兒ALL和將近5%的小兒和成人ALL病例中有MLL/AF4融合基因。t(4,11)(q21;q23)與前B-ALL(CD79A+,CD19+,CD10-,CD24-)相關，同時與粒系分化抗原CD16和CD65以及NG2抗原共表達。MLL/AF4融合基因在所有t(4;11)移位的病例中存在，也存在于相當一部分細胞遺傳學沒有檢測到t(4;11)移位的病例中。在嬰幼兒ALL中MLL/AF4融合基因被認為是預后不良的標志。在成人ALL中也是一個不良的標志，但對于成人ALL，該融合基因的存在似乎能增強高劑量的Ara-C的療效。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。第17頁,共49頁，2024年2月25日，星期天BCR/ABL在超過95%的CML病人的白血病細胞中，30%（20-50%）的成人ALL和2-10%的兒童ALL中，以及小于2%的AML（淋巴瘤和骨髓瘤）的病例中有BCR/ABL融合基因。在CML中BCR/ABL融合基因都是p210型的，在CML病例中有55%的b3-a2型，40%的b2-a2型。在5%的病例中b3-a2和b2-a2型由于剪接的不同同時存在。另外，在非常少的ph+的CML病人中存在一種大的BCR/ABL融合基因e19-a2，即u-bcr,p230型BCR/ABL融合基因。在30-50%的成人ph+的ALL，20-30%兒童ph+的ALL病例中BCR/ABL融合基因是p210型的。還有60%的ph+的ALL患者的BCR/ABL融合基因是p190型的。在ALL中，Ph陽性和隨之出現(xiàn)的BCR/ABL融合基因是一個非常不好的標志，它影響著病人血相的完全緩解率和可能的生成率。該基因陽性的病人，可用格列衛(wèi)進行治療，并可進行療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。第18頁,共49頁，2024年2月25日，星期天CML病例中的應用BCR-ABL融合基因檢測：

t(9;22)(q34;q11)BCR-ABLp210t(9;22)(q34;q11)BCR-ABLp230BCR-ABL融合基因ABL激酶突變檢測第19頁,共49頁，2024年2月25日，星期天BCR-ABL融合基因

超過95%的CML病例中存在BCR-ABL融合基因

P210型M-bcr（絕大多數(shù)）

b3-a2（55%）

b2-a2（40%）

b3-a2和b2-a2（5%）

b3-a3（罕見）

b2-a3（罕見）p230型u-bcre19-a2（罕見）第20頁,共49頁，2024年2月25日，星期天BCR-ABL融合基因ABL激酶突變檢測

ABL激酶突變會引起伊馬替尼治療耐藥

T315I

耐藥機制:T315突變后不能與伊馬替尼形成關鍵性的氫鍵，可完全阻斷伊馬替尼與ABL激酶區(qū)的結合,從而耐藥。

P環(huán)的突變(244-255)

耐藥機制：如Y253F／H、E255K／V、Q252H、G250E等通過改變ABL激酶的空間構象，亦可阻礙伊馬替尼與之結合。第21頁,共49頁，2024年2月25日，星期天

A環(huán)突變(381-402)

一般提高用藥量可以降低耐藥程度。

其它突變對于耐藥程度較弱的突變，如M244V、G250E、F317L、E355G、F359V及V379I等，通過提高藥物劑量，可以克服耐藥。第22頁,共49頁，2024年2月25日，星期天TEL/AML1t(12;21)(p13;q22)易位最早在1995年被報道。隨后的報道發(fā)現(xiàn)這種普通遺傳學無法檢測的易位，是兒童ALL中最為常見的易位。幾乎25%的小兒ALL有該易位。其主要的陽性病人出現(xiàn)在1-12歲之間，其中最多的在2-5歲的這個年齡段。所有的病例其免疫分型都是前B細胞ALL。另外，這類病人的另一個特征是其白細胞比較低。t(12;21)陽性的病人都有較好的預后，其復發(fā)的時間也會較晚。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。 第23頁,共49頁，2024年2月25日，星期天SIL/TAL1位于染色體1p32上的TAL1基因可以通過多種遺傳變異導致在T細胞中異常表達。其中最常見的重組方式是TAL1基因上游約90kb的DNA缺失，導致SIL與TAL1融合，這種染色體內微缺失全部出現(xiàn)在T-ALL病例中。SIL/TAL1融合基因與T-ALL的免疫表型密切相關。SIL/TAL1融合基因可以在26%的兒童T-ALL病例和16%的成人（主要是年輕成人）T-ALL病例檢測到。SIL/TAL1融合基因與T-ALL預后的關系還不是很清楚。該融合基因可以用于T-ALL的輔助診斷，該融合基因還可以用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。第24頁,共49頁，2024年2月25日，星期天EVI1定位于染色體3q26。在小鼠逆轉錄病毒誘發(fā)的急性髓系白血病模型中，EVI1是病毒常見的插入位點。EVI1編碼一個能結合DNA的鋅指蛋白，其過度表達在髓系惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。與其表達相關的還有MDS和CML?，F(xiàn)階段的研究表明EVI1高表達的患者的預后不良，但其機制尚未清晰。第25頁,共49頁，2024年2月25日，星期天HOX11據(jù)細胞基因學研究，4-7%的T-ALL中涉及染色體10q24的易位。HOX11正是定位在10q24上，并被t(10;14)(q24;q11)易位以及t(7;10)(q35;q24)易位激活。B-ALL中無HOX11的發(fā)現(xiàn)。在現(xiàn)階段的文獻報道中，HOX11高表達的兒童T-ALL的預后較陰性者有優(yōu)勢1。成人中也有相似的論斷2。低表達的HOX11與陰性者無統(tǒng)計學差異3。1、

ExpressionofHOX11inchildhoodT-lineageacutelymphoblasticleukaemiacanoccurintheabsenceofcytogeneticaberrationat10q24:astudyfromtheChildren’sCancerGroup(CCG).URKees,NAHeeremaet,20032、Prognosticimportanceof

TLX1(HOX11)

oncogeneexpressioninadultswithT-cellacutelymphoblasticleukaemia.AdolfoA

FerrandoMDet,20043、PrognosticandoncogenicrelevanceofTLX1/HOX11

expressionlevelinT-ALLs.

JulieBergeronet,2007第26頁,共49頁，2024年2月25日，星期天MLL/AF10:MLL/AF10與AML相關，染色體上表現(xiàn)為t(10;11)(p12;q23)的易位，主要見于AML-M5型患者，兒童多見，80%的患者小于3歲。MLL/AF10陽性的患者的預后差1。1

、AMLwith11q23/MLL

abnormalitiesasdefinedbytheWHOclassification:incidence,partnerchromosomes,FABsubtype,agedistribution,andprognosticimpactinanunselectedseriesof1897cytogeneticallyanalyzedAMLcases.

ClaudiaSchoch,SusanneSchnittgeret,2003第27頁,共49頁，2024年2月25日，星期天MLL-AF9:t(9;11)(p22;q23)易位主要發(fā)生在AML中,是AML中t(11q23)最常見的易位形式。MLL-AF9的病人的預后較差1,2。1、MicroenvironmentDeterminesLineageFateinaHumanModelof

MLL-AF9

Leukemia.JunpingWei,MarkWunderlichet,20082、TheprognosticvalueofMLL-AF9detectioninpatientswitht(9;11)(p22;q23)-positiveacutemyeloidleukemia.ClaudiaSchollet,2005第28頁,共49頁，2024年2月25日，星期天MLL/ENL:t(11;19)(q23;p13.3)易位可見于ALL，AML-M4,M5,M1,M2。以小于1歲的嬰兒多見，中位生存期為17.6月。易位導致MLL-ENL融合基因形成。預后尚無確切說明，與年齡，免疫表型相關1。1、ChildhoodacutelymphoblasticleukemiawiththeMLL-ENLfusionandt(11;19)(q23;p13.3)translocation.

RubnitzJEet,1999第29頁,共49頁，2024年2月25日，星期天MLL/ELL:t(11;19)(q23;p13.1)占11q23異常的3.8%，為AML特征性異常，年齡以成人為主。白細胞20×109/L，F(xiàn)AB分型M4或M5，免疫表型為CD13CD33，CD14CD15，CD11，HLA-DR表達陽性。易位導致MLL-ELL融合基因形成。預后不良，2年無病生存率50%。第30頁,共49頁，2024年2月25日，星期天MLL/AFX:t(X;11)(q13;q23)易位僅有體外分子的一些研究研究表明MLL-AFX可以增強造血干細胞的自我更新并阻止它們成熟1。無預后相關資料。1、MLL-AFXRequirestheTranscriptionalEffectorDomainsofAFXToTransformMyeloidProgenitorsandTransdominantlyInterferewithForkheadProteinFunction.ChiWaiSo

and

MichaelL.Cleary,2002第31頁,共49頁，2024年2月25日，星期天MLL/AF1q:t(1;11)(q21;q23)易位，多發(fā)于AML。關于MLL/AF1q的預后說法存在爭論2：在一項研究中，高表達的AF1q是一個獨立的不良預后因子1；另一項研究表明MLL-AF1q陽性的患者預后良好，是否因為MLL-AF1q的形成改變了AF1q的表達還不得而知2。1、ElevatedexpressionoftheAF1qgene,anMLLfusionpartner,isanindependentadverseprognosticfactorinpediatricacutemyeloidleukemia.WilliamTseet,20042、Novelprognosticsubgroupsinchildhood11q23/MLL-rearrangedacutemyeloidleukemia:resultsofaninternationalretrospectivestudy.BrianVet,2009第32頁,共49頁，2024年2月25日，星期天MLL/AF1p:t(1;11)(p32;q23)易位，ALL,AML,MDS中均有發(fā)現(xiàn)。中位生存期為15個月。預后與性別及分型相關，女性的中位生存期可達28個月，而男性為11個月。缺乏關于預后的相關文獻。第33頁,共49頁，2024年2月25日，星期天PLZF/RARa：t(11;17)(q23;q21)易位，特定的在急性早幼粒白血病或急性非淋巴細胞白血病M3型中發(fā)現(xiàn)。功能尚不明確。預后明顯差與有t(15;17)易位的ANLLM3型，其對ATRA的化療無反應。第34頁,共49頁，2024年2月25日，星期天MLL/AF6：t(6;11)(q27;q23)是11q23中常見的易位，長發(fā)與AML，特別是M4，M5中，在T-ALL中也有發(fā)現(xiàn)。預后非常差1，幾乎無緩解，生存期短。1、MonitoringofminimalresidualdiseaseinpatientswithMLL-AF6-positiveacutemyeloidleukaemiabyreversetranscriptasepolymerasechainreaction.GerlindeMitterbaueret,2000第35頁,共49頁，2024年2月25日，星期天MLL/MLL:11q23的部分串聯(lián)重復（MLL-PTD），已經在10%的正常核型的AML中檢測出MLL-PTD，可以作為穩(wěn)定的MRD的監(jiān)測標記。預后差，臨床緩解率低1,2,3。1、ClinicalandbiologicalimplicationsofpartialtandemduplicationoftheMLLgeneinacutemyeloidleukemiawithoutchromosomalabnormalitiesat11q23.H-SShiahet,20022、PrognosticSignificanceofPartialTandemDuplicationsoftheMLLGeneinAdultPatients16to60YearsOldWithAcuteMyeloidLeukemiaandNormalCytogenetics:AStudyoftheAcuteMyeloidLeukemiaStudyGroupUlm.KonstanzeDo¨hneret,20023、RiskassessmentbymonitoringexpressionlevelsofpartialtandemduplicationsintheMLLgeneinacutemyeloidleukemiaduringtherapy.MartinWeisseret,2005第36頁,共49頁，2024年2月25日，星期天TLS/ERG:t(16;21)(p11;q22)易位多見于年輕患者，F(xiàn)AB各亞型均見。預后不良1，可能不能達到完全緩解，一年內的復發(fā)率高，中位生存期為22個月。1、RelapseofAcuteMyeloidLeukemiawitht(16;21)(p11;q22)MimickingAutoimmunePancreatitisafterSecondAllogeneicBoneMarrowTransplantation.YuheiKamadaet，2011第37頁,共49頁，2024年2月25日，星期天TEL/PDGFR:t(5;12)(q33;p13)易位形成的融合基因，與Ras/ERK和STAT5信號傳導通路相關，誘導干細胞的分化1.預后尚不明確，中位生存期<20個月（n=11）1、Tel/PDGFRβinducesstemcelldifferentiationviatheRas/ERKandSTAT5signalingpathways.Edwina

Dobbinet,2008第38頁,共49頁，2024年2月25日，星期天TEL/ABL:t(9;12)(q34;p13)易位罕見，至2010年只有19例被報道于CML,AML,ALL中。數(shù)量少，從報道的病例上看，預后不良1。1、Acuteleukemiaswith

ETV6/ABL1

(TEL/ABL)fusion:Poorprognosisandprenatalorigin.JanZunaet,2010第39頁,共49頁，2024年2月25日，星期天SET/CAN:t(9;9)(q34;q34)易位，罕見，作用不明；有文獻報道稱SET-CAN可以抑制增生，促分化1.1、EffectsofSETandSET-CANonthedifferentiationofthehumanpromonocyticcelllineU937.A

Kandilciet,2004第40頁,共49頁，2024年2月25日，星期天DEK/CAN:t(6;9)(p23;q34)易位，由位于9q34的CAN基因與6q23的DEK基因融合，CAN基因是產物核孔復合物的一部分，能夠運送RNA及蛋白質穿過核膜。在AML中占2%，主要為M2型，其次為M4。最初描述是以骨髓中正常嗜堿粒細胞增多為特征20%患者有既往MDS病史。年輕患者(20～30歲)。預后差1,2。1、DEK-CAN

molecularmonitoringofmyeloidmalignanciescouldaidtherapeuticstratification.L

Gar?onet,20052、DevelopmentofaD-FISHmethodtodetect

DEK/CANfusionresultingfromt(6;9)(p23;q34)inpatientswithacutemyelogenousleukemia.L

Gar?onet,2005第41頁,共49頁，2024年2月25日，星期天MLL/AF17:t(11;17)(q23;q12-21)易位，發(fā)現(xiàn)于AML中。數(shù)據(jù)不足，無預后相關文獻。第42頁,共49頁，2024年2月25日，星期天E2A/HLF:t(17;19)(q22;p13)易位產生E2A/HLF融合基因，發(fā)生在其少數(shù)的ALL病例中。預后差，對密集化療無反應，生存期短1,2。1、AdultPrecursor-BAcuteLymphoblasticLeukemiawithTr