血型檢查方法學(xué)評(píng)價(jià)及其質(zhì)量控制

關(guān)于血型檢查方法學(xué)評(píng)價(jià)及其質(zhì)量控制血型概述

血型是人類(lèi)血液以血型抗原為表現(xiàn)型的遺傳性狀，ABO血型系統(tǒng)和Rh血型系統(tǒng)是紅細(xì)胞的兩大血型抗原抗體系統(tǒng)，在臨床輸血和血液遺傳學(xué)研究上有重要意義。

血型鑒定(bloodtyping)是臨床輸血的首要問(wèn)題，正確的血型鑒定是保證輸血安全的前提條件。第2頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天主要內(nèi)容ABO血型系統(tǒng)ABO血型系統(tǒng)抗原ABO血型系統(tǒng)抗體ABO血型系統(tǒng)亞型ABO血型鑒定檢測(cè)原理鑒定方法方法學(xué)評(píng)價(jià)質(zhì)量控制RH血型系統(tǒng)RH血型系統(tǒng)抗原RH血型系統(tǒng)抗體RH血型鑒定檢測(cè)原理鑒定方法方法學(xué)評(píng)價(jià)質(zhì)量控制第3頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天ABO血型系統(tǒng)抗體分為天然抗體和免疫性抗體天然抗體主要為IgM型免疫球蛋白免疫性抗體則來(lái)自母嬰血型不合的妊娠或血型不合的輸血，通常是來(lái)自母體的IgG型免疫球蛋白。第4頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天ABO血型系統(tǒng)抗體兩種抗體的比較特性IgM型IgG型分子量（kD）1000160耐熱性（70℃）破壞穩(wěn)定與紅細(xì)胞結(jié)合最適溫度（℃）4-2537與紅細(xì)胞反應(yīng)介質(zhì)生理鹽水酶處理或清蛋白溶液被血型物質(zhì)中和能不能通過(guò)胎盤(pán)不能能第5頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天ABO血型系統(tǒng)亞型A抗原的主要亞型有A1和A2，均能與抗A血清發(fā)生直接凝集反應(yīng)。AB血型中也存在相應(yīng)的A1B和A2B亞型。B亞型較少見(jiàn)，且抗原性弱，故臨床意義不大。第6頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天ABO血型檢測(cè)原理血型抗原與相應(yīng)抗體在反應(yīng)介質(zhì)中形成紅細(xì)胞和相應(yīng)血型抗體結(jié)合的免疫復(fù)合物，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象。正向定型（directtyping）反向定型（indirecttyping）第7頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天鑒定方法血凝試驗(yàn)玻片法試管法全自動(dòng)微板法流式細(xì)胞技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)微柱凝膠試驗(yàn)第8頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天鑒定方法鹽水凝集法（saltmediumtest）第9頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天鑒定方法正定型，玻片法第10頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天鑒定方法玻片法評(píng)價(jià)它是目前臨床常用的血型鑒定的初篩試驗(yàn)方法。具有操作簡(jiǎn)便，節(jié)省材料的優(yōu)點(diǎn)。但弱凝集反應(yīng)需要借助顯微鏡觀察確定。第11頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天鑒定方法反定型，試管法第12頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天鑒定方法試管法評(píng)價(jià)——優(yōu)點(diǎn)試管法是交叉配血試驗(yàn)中最基礎(chǔ)的試驗(yàn)方法之一。與玻片法原理相同，但是借助試管更大的反應(yīng)空間，并對(duì)待測(cè)紅細(xì)胞予以一定的濃度的稀釋或者加入更多的待測(cè)紅細(xì)胞，通過(guò)低速離心后可根據(jù)有無(wú)肉眼可見(jiàn)凝集反應(yīng)來(lái)判斷結(jié)果。由于待測(cè)紅細(xì)胞經(jīng)過(guò)稀釋?zhuān)谝欢ǔ潭壬蠝p少了血液中非特異性抗體的濃度，從而提高了試驗(yàn)的敏感性。比玻片法更具有準(zhǔn)確可靠的優(yōu)點(diǎn)。第13頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天鑒定方法試管法評(píng)價(jià)——缺點(diǎn)只能檢測(cè)出完全抗體（抗A、抗B）引起的血型不合，對(duì)免疫性抗體引起的血型不合不能檢出，有輸血史或不明輸血史及妊娠史不能用該法。本實(shí)驗(yàn)中的生理鹽水對(duì)血清（漿）中的抗體有稀釋作用，易導(dǎo)致配血結(jié)果假陰性。易受冷凝集素的干擾。第14頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天方法學(xué)評(píng)價(jià)鹽水凝集法操作簡(jiǎn)便，無(wú)需特殊儀器。玻片法：無(wú)需離心，適用于血型普查。但反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，靈敏度差，凝集較弱時(shí)易導(dǎo)致定型錯(cuò)誤。不適于反向定型。試管法：用離心法加速反應(yīng)，所需時(shí)間短，適于急診定型。因離心增強(qiáng)紅細(xì)胞凝集，可發(fā)現(xiàn)較弱的凝集現(xiàn)象，有助于檢出亞型，故為常用血型鑒定方法。只能檢測(cè)完全抗體易受冷凝集素干擾第15頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天鑒定方法凝膠微柱法第16頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天鑒定方法凝膠微柱法的結(jié)果第17頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天方法學(xué)評(píng)價(jià)凝膠微柱法重復(fù)性好，特異性和靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確。試劑成本較高，需用離心設(shè)備。根據(jù)不同需要可選用中性凝膠、特異凝膠或抗球蛋白凝膠作為反應(yīng)介質(zhì)。結(jié)果既可肉眼觀察，也可用血型分析儀分析。第18頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天鑒定方法全自動(dòng)微板法標(biāo)準(zhǔn)化加樣、孵育、離心、懸浮、靜止反應(yīng)前后吸光度值增加數(shù)值的計(jì)算對(duì)血型進(jìn)行正定型與反定型第19頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天方法學(xué)評(píng)價(jià)全自動(dòng)微板法此法正反定型試驗(yàn)，準(zhǔn)確率高，且能提高檢測(cè)靈敏度，使弱凝集樣本更加易顯現(xiàn)?？焖?、準(zhǔn)確、自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)，適合批量操作。血型微量化檢測(cè)具有節(jié)約大量昂貴抗血清、縮短檢測(cè)時(shí)間、操作程序簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，目前在各大采供血機(jī)構(gòu)已得到廣泛應(yīng)用。第20頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天鑒定方法流式細(xì)胞技術(shù)稀釋?zhuān)簩⒋郎y(cè)血樣的紅細(xì)胞用生理鹽水稀釋成百分之五的紅細(xì)胞懸液。標(biāo)記：分裝各管分別等比加入熒光素標(biāo)記抗體，避光放置15min待受檢紅細(xì)胞上的血型抗原與相應(yīng)熒光標(biāo)記抗體結(jié)合后，用生理鹽水洗滌離心除去未結(jié)合抗體。檢測(cè)：重懸后立即用流式細(xì)胞儀檢測(cè)與熒光標(biāo)記抗體結(jié)合的紅細(xì)胞，通過(guò)軟件分析，從而得到待測(cè)樣本的紅細(xì)胞血型。第21頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天方法學(xué)評(píng)價(jià)流式細(xì)胞術(shù)在細(xì)胞分型方面具有速度快、靈敏度高、特異性好，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好。特別適合應(yīng)用于ABO血型亞型的快速鑒定。目前有研究指出流式細(xì)胞技術(shù)亦可通過(guò)分離孕婦血液中的胎兒紅細(xì)胞用于產(chǎn)前非侵入性胎兒血型檢測(cè)。第22頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天質(zhì)量控制1.標(biāo)準(zhǔn)血清要求：新鮮，在有效期內(nèi)，效價(jià)高，凝集力強(qiáng)，嚴(yán)防污染常用的抗血清有：人血清ABO血型抗體：穩(wěn)定性高，已滅活補(bǔ)體人ABO血型單克隆抗體：穩(wěn)定性較人血清抗體的穩(wěn)定性差第23頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天質(zhì)量控制2.被檢紅細(xì)胞標(biāo)本新鮮，嚴(yán)防污染。某些疾病出現(xiàn)假凝集，可加做自身血清和紅細(xì)胞，自身紅細(xì)胞和生理鹽水對(duì)照試驗(yàn)及結(jié)合反定型結(jié)果進(jìn)行鑒定。當(dāng)疑有血漿成分干擾血型鑒定時(shí)可用生理鹽水反復(fù)洗滌紅細(xì)胞以除干擾。第24頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天質(zhì)量控制3.試驗(yàn)器材器材清潔、干燥、標(biāo)記清楚。用試管法定型時(shí)，應(yīng)同時(shí)進(jìn)行正向和反向定型。須設(shè)置對(duì)照。紅細(xì)胞濃度按要求配置，紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體的比例適當(dāng)。反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間、離心時(shí)間。弱A亞型和弱B亞型，肉眼判斷必同時(shí)須用顯微鏡復(fù)查。第25頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天Rh血型系統(tǒng)抗原及抗體Rh血型系統(tǒng)抗原目前已發(fā)現(xiàn)的Rh抗原有45種，其中與人類(lèi)關(guān)系最為密切的是D、E、C、c、e五種。D抗原的抗原性最強(qiáng)。Rh血型系統(tǒng)抗體絕大多數(shù)Rh抗體由輸血或妊娠刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的IgG型免疫性抗體。主要Rh血型系統(tǒng)抗體有抗D、抗E、抗C、抗c、抗e五種，其中抗D最為常見(jiàn)。第26頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天Rh血型檢測(cè)方法酶介質(zhì)法聚凝胺試驗(yàn)（polybrenetest）第27頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天Rh血型檢測(cè)方法抗球蛋白試驗(yàn)（antiglobulintest）第28頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天Rh血型檢測(cè)方法人源鹽水介質(zhì)抗D試驗(yàn)低離子強(qiáng)度溶液試驗(yàn)第29頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天CompanyLogo方法學(xué)評(píng)價(jià)

方法

評(píng)價(jià)酶介質(zhì)法（直接法）

簡(jiǎn)單、快速、經(jīng)濟(jì)，但靈敏度低。酶介質(zhì)法（間接法）

簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、靈敏?？设b定抗原和檢測(cè)抗體。

但較費(fèi)時(shí)，準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性較差低離子強(qiáng)度溶液試驗(yàn)反應(yīng)時(shí)間短，靈敏度高聚凝胺試驗(yàn)快速、靈敏、準(zhǔn)確性高，應(yīng)用較多抗球蛋白試驗(yàn)

檢查不完全抗體最可靠方法，但操作復(fù)雜，

費(fèi)時(shí)，試劑較貴。多用于新生兒溶血病的診

斷及因血型不合輸血產(chǎn)生的血型抗體的檢測(cè)人源鹽水介質(zhì)抗D試驗(yàn)

操作簡(jiǎn)單，特異性和靈敏度均高，應(yīng)用廣泛，

但試劑昂貴第30頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天質(zhì)量保證檢測(cè)前標(biāo)本處理：標(biāo)本新鮮，嚴(yán)防污染。為避免假陰性，被檢紅細(xì)胞要用生理鹽水充分洗滌。試劑和器材：使用有效期內(nèi)的合格試劑?？寡逡咨票４?，防治污染。使用的儀器、器材清潔干燥。第31頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天質(zhì)量保證檢測(cè)中抗原抗體比例、介質(zhì)濃度反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、離心條件陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照及試劑對(duì)照紅細(xì)胞上的Rh抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)形成的凝集較弱，觀察結(jié)果不可用力振搖當(dāng)結(jié)果可疑時(shí)，須用顯微鏡觀察確認(rèn)第32頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天質(zhì)量保證檢測(cè)后復(fù)查實(shí)驗(yàn)全過(guò)程，填寫(xiě)試驗(yàn)報(bào)告，查對(duì)無(wú)誤后方可發(fā)出報(bào)告。標(biāo)本置4℃保存1周以上，以備復(fù)查。第33頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天臨床上血型檢查的質(zhì)量控制1、醫(yī)務(wù)人員的問(wèn)題臨床醫(yī)生臨床護(hù)士抽取血標(biāo)本時(shí)，未校對(duì)患者的姓名、床號(hào)檢驗(yàn)科人員沒(méi)有對(duì)報(bào)告核對(duì)正確，造成血型鑒定錯(cuò)誤第34頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天臨床上血型檢查的質(zhì)量控制2、被檢紅細(xì)胞血型測(cè)定的錯(cuò)誤血型：檢測(cè)時(shí)只用肉眼觀察結(jié)果，微弱、細(xì)小的凝集未看到冷凝集素：在支原體肺炎、肝硬化等疾病患者血清中，冷凝集素很高，嚴(yán)重干擾血型鑒定。ABO亞型：抗原結(jié)構(gòu)和位點(diǎn)數(shù)改變導(dǎo)致的弱表現(xiàn)。ABO血型抗體減弱：當(dāng)獻(xiàn)血者血清中抗A和抗B效價(jià)減弱，其反定型格局總表現(xiàn)為AB型。第35頁(yè),共38頁(yè)，2024年2月25日，星期天臨床上血型檢查的質(zhì)量控制3、其它因素輸血或妊娠：產(chǎn)生不規(guī)則抗體類(lèi)B抗原：某些受腸道革蘭氏陰性桿菌感染的病人，紅細(xì)胞獲得了類(lèi)B抗原，A型病人可誤定為AB型，O型誤定為B型磺胺類(lèi)藥物：注射青霉素后，有些人的血清中含有青霉素抗體，而青霉素已吸附在紅細(xì)胞表面，當(dāng)此紅細(xì)胞與血清相遇時(shí)便發(fā)生凝集。