細菌的染色技術(shù)及大小的測定

關(guān)于細菌的染色技術(shù)及大小的測定第一部分

細菌的染色技術(shù)目的要求染色劑和染色的原理實驗材料實驗程序第2頁,共15頁，2024年2月25日，星期天目的要求掌握微生物的染色原理掌握染色的基本操作技術(shù)掌握微生物的一般染色法和革蘭氏染色法第3頁,共15頁，2024年2月25日，星期天染色劑和染色原理Ⅰ微生物染色的基本原理：細菌機體無色透明，與背景反差小，可將細菌染色，增加其反差；細菌在通常培養(yǎng)狀態(tài)下總帶負(fù)電荷，故可用帶正電荷的堿性染料染色。染色劑染料按其電離后所帶電荷的性質(zhì)可分為以下類型：1.酸性染料：如酸性復(fù)紅、剛果紅、伊紅、藻紅、苯胺黑等。2.堿性染料：一般有堿性復(fù)紅、中性紅、孔雀綠、番紅、結(jié)晶紫、美蘭、甲基紫等，細菌易被堿性染料染色。3.中性（復(fù)合）染料：如伊紅、美蘭等，Wright染料和Gimsa染料等（常用于細胞核染色）。4.單純?nèi)玖希哼@類染料的化學(xué)親和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶劑中，如蘇丹類的染料。第4頁,共15頁，2024年2月25日，星期天染色劑和染色原理Ⅱ微生物染色常用染料如下表：第5頁,共15頁，2024年2月25日，星期天實驗材料顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、接種環(huán)、載玻片、酒精燈。石炭酸復(fù)紅染液、草酸銨結(jié)晶紫染液、革氏碘液、95％乙醇、蕃紅染液菌種：枯草桿菌、大腸桿菌第6頁,共15頁，2024年2月25日，星期天實驗程序Ⅰ

（細菌染色的方法和步驟）細菌染色的方法:

1.簡單染色法：用一種染色液染菌體后，就可以觀察微生物的大小、形狀和細胞排列狀況，但不能鑒別微生物以及它的特殊構(gòu)造等。2.復(fù)染色法：用兩種或兩種以上染色液進行染色，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常用的有：革蘭氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法、細胞染色法等。染色技術(shù)的一般過程

涂片干燥固定染色媒染脫色復(fù)染水洗干燥鏡檢第7頁,共15頁，2024年2月25日，星期天實驗程序Ⅱ

（簡單染色的方法和步驟）簡單染色法(一般染色法)1.涂片2.干燥：自然晾干或酒精燈高處微微加熱。3.固定4.染色：在整個涂面上滴加染色液，染色１min。

5.水洗：傾去染液，用自來水細流沖洗至流下的水中無染料顏色為止。6.吸干7.鏡檢第8頁,共15頁，2024年2月25日，星期天實驗程序Ⅲ

（革蘭氏染色的方法和步驟）革蘭氏（Gram）染色法1.涂片、干燥、固定2.初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液染1min，傾去染液，流水沖洗至無紫色。3.媒染：加革氏碘液媒染1min，水洗。

4.脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進行脫色約30s～45s，接著立即用流水沖洗。5.復(fù)染：滴加番紅染色液染1min，水洗后用吸水紙吸干。6.鏡檢：觀察染色結(jié)果并繪圖。第9頁,共15頁，2024年2月25日，星期天第二部分

細菌大小的測定目的要求學(xué)習(xí)使用目測微尺和物測微尺在顯微鏡下測定微生物大小的方法。第10頁,共15頁，2024年2月25日，星期天測定的工具：目測微尺和物測微尺目測微尺是一圓形玻片，其中央刻有5mm長、等分為50格的標(biāo)尺，每格的長度隨使用目鏡和物鏡的放大倍數(shù)及鏡筒長度而定。使用前用物鏡測微尺標(biāo)定，用時放在目鏡內(nèi)。物測微尺是一厚玻片，中央有一圓形蓋玻片，中央刻有1mm長的標(biāo)尺，等分為100格，每格為10μm用以標(biāo)定目測微尺在不同放大倍數(shù)下每格的實際長度。第11頁,共15頁，2024年2月25日，星期天目測微尺的標(biāo)定：將目測微尺裝入目鏡的隔板上，刻度朝下；把物測微尺放在載物臺上，刻度朝上。用低倍鏡找到物測微尺的刻度，移動物測微尺和目測微尺使兩者的第一條刻度線重合，順著刻度找出第二條完全重合的刻度線。計算兩刻度間目測微尺的格數(shù)和物測微尺的格數(shù)。由于物測微尺的刻度每格長10μm，得第12頁,共15頁，2024年2月25日，星期天菌體大小的測定取下物測微尺，將細菌染色標(biāo)本置于載物臺上，然后在油鏡下用目鏡測微尺測量菌體的長和寬。注意：

校正目測微尺必須針對特定的顯微鏡和附件（特定的物鏡、目鏡、鏡筒長度等）進行，而且只能在這特定的情況下才可重復(fù)使用。第13頁,共15