二棕櫚酰羥基脯氨酸納米晶凝膠處方工藝的探索+最終稿

二棕櫚酰羥基脯氨酸納米晶凝膠處方工藝的探索【摘要】目的：制備二棕櫚酰羥基脯氨酸納米晶凝膠并對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。方法：采用高壓均質(zhì)法制備二棕櫚酰羥基脯氨酸納米晶，以其納米晶粒徑為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過(guò)單因素篩選和正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選二棕櫚酰羥基脯氨酸納米晶最優(yōu)處方，再將最優(yōu)處方制得的納米晶制備成凝膠劑，最后對(duì)其凝膠進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。結(jié)果：正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選出的最優(yōu)處方為：均質(zhì)壓力1800bar、均質(zhì)次數(shù)26次、HPMC使用量0.1%、泊洛沙姆188使用量0.3%。通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選后二棕櫚酰羥基脯氨酸的平均粒徑為270.8nm。DPHP納米晶凝膠為乳白色、質(zhì)地均勻細(xì)膩的半固體制劑，稠度適宜，涂展性好。結(jié)論：二棕櫚酰羥基脯氨酸納米晶凝膠的外觀形狀、pH值、穩(wěn)定性、粘度、刺激性等質(zhì)量指標(biāo)均符合要求?！娟P(guān)鍵詞】二棕櫚酰羥基脯氨酸；高壓均質(zhì)法；納米晶；凝膠。

Explorationofdipalmitoylhydroxyprolinenanocrystallinegelprescriptionprocess[Abstract]Objective:Toprepareandevaluatethequalityofdipalmitoylhydroxyprolinenanocrystallinegels.Methods:Dipalmitoylhydroxyprolinenanocrystalswerepreparedbyhigh-pressurehomogenizationmethod,andtheoptimalprescriptionofdipalmitoylhydroxyprolinenanocrystalswasselectedbysingle-factorscreeningandorthogonalexperimentalmethod,andthenthenanocrystalspreparedbytheoptimalprescriptionwerepreparedintogellingagent,andfinallythequalityofthegelwasevaluated.Results:Theoptimalprescriptionsselectedbyorthogonalexperimentalmethodwere:homogenizationpressureof1800bar,homogenizationtimesof26times,HPMCusageof0.1%,andpoloxamer188dosageof0.3%.Theaverageparticlesizeofdipalmitoylhydroxyprolineafteroptimizationbyorthogonalexperimentalmethodwas270.8nm.DPHPnanocrystallinegelisamilkywhitesemi-solidpreparationwithuniformandfinetexture,suitableconsistencyandgoodspreadability.Conclusion:Theappearanceshape,pHvalue,stability,viscosity,irritationandotherqualityindicatorsofdipalmitoylhydroxyprolinenanocrystallinegelmeettherequirements.[Keywords]DipalmitoylhydroxyprolineHighpressurehomogenizationmethodnanocrystalsGel.

目錄1前言 前言1.1研究背景衰老是人類始終關(guān)心的一個(gè)熱點(diǎn)問(wèn)題，機(jī)體衰老是所有生物體均不可逆的一種自然生命現(xiàn)象，它是指在生物發(fā)育成熟之后，隨著機(jī)體年齡的增長(zhǎng)，機(jī)體的各種組織器官以及器官結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生長(zhǎng)期退行性結(jié)構(gòu)變化，而逐步形成的一種不可逆的過(guò)程。皮膚衰老是身體衰老一種最直觀的反映，它的特點(diǎn)是皮膚的彈性下降、水分的不斷流失以及各類皺紋和斑點(diǎn)的不斷生成[1-3]。目前的醫(yī)學(xué)理論研究表明，如果人體皮膚中的自由基遭到了嚴(yán)重的破壞，那么皮膚深層細(xì)胞的自體免疫能力也會(huì)隨之急劇下降，因此會(huì)對(duì)皮膚的機(jī)體功能造成嚴(yán)重的損害，導(dǎo)致皮膚老化[4]。皺紋、老年斑等皮膚衰老現(xiàn)象的出現(xiàn)，不但會(huì)給人們帶來(lái)生理上的影響，還會(huì)引發(fā)焦慮、自卑和抑郁等一系列復(fù)雜的心理問(wèn)題，抗衰老藥因此受到了人們的廣泛關(guān)注，抗衰老產(chǎn)品的開發(fā)以及抗衰老機(jī)制的研究也因此具有重要意義和廣闊的發(fā)展前景。1.2二棕櫚酰羥基脯氨酸的研究概述二棕櫚酰羥基脯氨酸(Dipalmitoylhydroxyproline，DPHP)，分子式為C37H69NO5，分子量為607.95，結(jié)構(gòu)式如圖1-1所示，室溫下其為白色粉末，溶于乙醇和甲醇等有機(jī)溶劑，難溶于水。圖1-1二棕櫚酰羥脯氨酸的結(jié)構(gòu)式Figure1-1StructuralformulaofDipalmitoylhydroxyprolineDPHP是天然產(chǎn)物棕櫚酰與天然氨基酸羥基脯氨酸合成的一種能夠有效抗皺和抗衰老的添加劑，它可以與其他具有抗皺、抗衰老功效的成分結(jié)合在一起發(fā)揮更好的抗衰老作用，從而在化妝品中得到了廣泛的應(yīng)用。DPHP中的羥基脯氨酸可經(jīng)生物化學(xué)轉(zhuǎn)化生成脂溶性氨基酸，對(duì)皮膚有良好的親和性，并能發(fā)揮良好的介體傳遞作用[5-6]。據(jù)研究，與維生素C相比，DPHP在促進(jìn)膠原纖維收縮和抑制彈力蛋白酶活性方面更有優(yōu)勢(shì)，因此可以更好地保持皮膚彈性[7]。此外，已有研究發(fā)現(xiàn)，DPHP對(duì)皮膚有三重抗衰老功效，它可以改善膠原蛋白纖維的收縮、抑制彈性蛋白酶活性和阻止彈性纖維的分裂，它還能降低自由基的含量，從而改善皮膚的水合度[8]。徐果等人[9]對(duì)含DPHP的抗皺緊膚霜的效用進(jìn)行了評(píng)估，結(jié)果表明，DPHP的抗皺緊膚霜有很好的保濕作用，能延緩肌膚老化，并能加速肌膚的修復(fù)，修復(fù)率在48%以上。湯文靜等人[10]采用高壓均質(zhì)法制備DPHP-NLC，利用單因素試驗(yàn)及Box-Behnken設(shè)計(jì)響應(yīng)面方法對(duì)處方進(jìn)行了優(yōu)化，獲得了最優(yōu)的處方，并對(duì)處方進(jìn)行了表征。1.3納米晶的研究概述納米晶(Nanocrystals，NCs)是指藥物以晶態(tài)或無(wú)定型態(tài)分散于含有穩(wěn)定劑介質(zhì)溶液中而獲得的一種納米或亞微米級(jí)膠體分散體系[11]，根據(jù)Noyes-Whitney方程，粒徑在納米級(jí)的藥物顆粒，其比表面積會(huì)大幅度提高，因此其飽和溶解度和溶解速率也會(huì)相應(yīng)提高。所以，相對(duì)于傳統(tǒng)劑型，納米晶在增加藥物的溶解速度、改善藥物的生物利用度與減少藥物的毒性和副作用等方面有著明顯的優(yōu)勢(shì)[12]。目前，國(guó)內(nèi)外主要有三種合成納米晶體的方法，分別是“Top-down”（自上而下）技術(shù)、“Bottom-up”（自下而上）技術(shù)以及組合技術(shù)。這三種方法分別利用了不同的方法來(lái)控制納米晶體的大小和形狀，使其在不同的應(yīng)用中表現(xiàn)出最佳效果。此外，這三種方法還可以有效地控制納米晶體的質(zhì)量和形狀，以滿足不同的應(yīng)用需求?！癟op-down”使用了一定的機(jī)械過(guò)程，將大粒徑的藥物粉末粉碎成粒徑在納米范圍內(nèi)的藥物晶體，從而達(dá)到控制顆粒尺寸的目的。這種技術(shù)不僅能夠有效地減少藥物顆粒尺寸，還能提高其生物利用度和穩(wěn)定性，使其在更多的疾病治療中發(fā)揮作用。在配制時(shí)，通常要加入某些穩(wěn)定劑，以維持藥物的穩(wěn)定。例如：羥丙甲纖維素、泊洛沙姆、十二烷基硫酸鈉和卵磷脂等[13]，常用方法有介質(zhì)研磨法和高壓均質(zhì)法，目前大部分已上市的納米晶體藥物均是采用這兩種方法制備?！癇ottom-up”技術(shù)是通過(guò)控制藥物的結(jié)晶和成核過(guò)程，即藥物在一種溶液中被析出，從而形成均勻細(xì)小的沉淀或結(jié)晶，常用方法包括乳化法和沉淀法等。組合技術(shù)通過(guò)將預(yù)處理步驟和粒徑減小步驟相結(jié)合來(lái)制備藥物晶體，多個(gè)技術(shù)的協(xié)同應(yīng)用，在一定程度上可以提高藥物的粒徑減小效果，并降低能耗[14]。1.4凝膠劑的研究概述凝膠劑是指藥物與適宜的輔料制成的均一、透明或半透明的半固體或粘稠液體制劑，是一種常用的外用制劑，質(zhì)地均勻細(xì)膩，具有透皮吸收快、易于涂布、無(wú)油膩感等特點(diǎn)[15]。凝膠劑根據(jù)凝膠基質(zhì)可分為水性凝膠劑和油性凝膠劑，其中水性凝膠劑具有優(yōu)良的理化性質(zhì)和生物學(xué)特性。相比于傳統(tǒng)的軟膏劑、貼劑等外用制劑，水性凝膠劑易于清洗且不易污染衣物。除此之外，水溶性凝膠還可以對(duì)藥物進(jìn)行緩控釋放，同時(shí)它還具備了良好的生物相容性、生物粘附性以及可降解性等特點(diǎn)[16]。水性凝膠劑目前常用的凝膠基質(zhì)有卡波姆、羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇(PVA)等。陳乃炳等人[17]以CMC-Na為基質(zhì)，研制了諾氟沙星凝膠，該凝膠對(duì)綠膿桿菌所致的皮膚創(chuàng)傷和其他皮膚感染均有效，且無(wú)刺激性，克服了其他油性膏劑的不足。。谷杰等人[18]將鹽酸洛美沙星用卡波姆940和PVP為基質(zhì)制備成凝膠，用于治療皮膚科感染，取得了良好的效果，并能使藥物在皮膚中停留的時(shí)間更長(zhǎng)。陳騰等人[19]以水溶脹性卡波姆940為基質(zhì)制備出了司氟沙星凝膠，其不僅具有粘稠度適中、不含油脂、使用方便、適用于皮膚粘膜、起效快、作用時(shí)間長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)，還可以降低口服藥物引起的胃腸道反應(yīng)，提高局部用藥的藥物濃度，在臨床上應(yīng)用于婦科感染，取得了較好的療效。卡波姆為一類丙烯酸與丙烯基蔗糖交聯(lián)的高分子聚合物，在國(guó)際上被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、化妝品等領(lǐng)域，卡波姆除有很好的粘合性外，還具有良好的乳化性、助懸性和成膜性，被認(rèn)為是一種極具發(fā)展?jié)摿Φ亩喙δ芨叻肿硬牧?。故本課題選用卡波姆為凝膠基質(zhì)。1.5研究目的與意義DPHP由于分子量大、難以穿透表皮、水溶性和成藥性差等缺點(diǎn)，其在皮膚外用制劑上的應(yīng)用受到限制。納米晶技術(shù)可以有效地改善難溶性藥物的生物利用度[20]，通過(guò)將藥物的顆粒尺寸縮小至納米尺度，使其透皮給藥的生物利用度得到明顯的提高。納米晶體技術(shù)可增大難溶性藥物的比表面積，改變其藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)，改善其生物利用度[21]。凝膠劑是一種含有溶解狀態(tài)藥物的澄明的半固體制劑，它具有溶脹性、脫水收縮性、透過(guò)性和粘合性的特征[22]。此外，凝膠劑不僅具有交聯(lián)結(jié)構(gòu)，還具有部分的固體特性，其能夠在較長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)與用藥部位緊密地粘合在一起，且可以使半固體制劑在靜止時(shí)保持一定的形狀，而在外力的作用下又可以流動(dòng)變形[23]。將DPHP納米粒制成凝膠劑，可增加其在體表的滯留時(shí)間，增加其在體表的穩(wěn)定性，從而達(dá)到延緩衰老的效果。

2儀器和試劑2.1儀器 實(shí)驗(yàn)所用儀器見表2-1。表2-1實(shí)驗(yàn)儀器Table2-1Experimentalinstruments儀器廠家WTC10002電子天平杭州萬(wàn)特衡器有限公司BSA224S-CW萬(wàn)分之一電子天平BSA423S-CW千分之一電子天平賽多利斯科學(xué)儀器(上海)有限公司賽多利斯科學(xué)儀器(上海)有限公司CP225D十萬(wàn)分之一電子天平賽多利斯科學(xué)儀器(上海)有限公司FE-28pH計(jì)梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司L0701151超高壓連續(xù)流微量均質(zhì)機(jī)廣州聚能納米生物科技股份有限公司CX41RF偏光顯微鏡奧林巴斯(北京)科技有限公司納米粒度ZETA點(diǎn)位分析儀貝克曼庫(kù)爾特商貿(mào)(中國(guó))有限公司TGL-20B高速離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器廠DV2TLV粘度儀美國(guó)博勒飛公司DJJ-50豆?jié){機(jī)中山市海馬電器有限公司2.2試劑 實(shí)驗(yàn)所用試劑見表2-2。表2-2實(shí)驗(yàn)試劑Table2-2Experimentalreagents試劑廠家DPHP廣州朋遠(yuǎn)化工有限公司HPMC泊洛沙姆188陶氏化學(xué)中國(guó)有限公司北京鳳禮精求醫(yī)藥股份有限公司卡波姆940上海麥克林生化科技有限公司甘油廣州辰星生物科技發(fā)展有限公司舒美PE9010浙江聯(lián)碩生物科技有限公司EDTA-2Na天津市大茂化學(xué)試劑廠三乙醇胺天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司蒸餾水屈臣氏集團(tuán)(香港)有限公司

3實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果3.1DPHP納米晶的制備 3.1.1DPHP納米晶處方組成：DPHP納米晶的處方組成為：DPHP、HPMC、泊洛沙姆188、蒸餾水。3.1.2DPHP納米晶的制備工藝 將HPMC加入到80℃的熱水中分散均勻，不斷攪拌至室溫，加入泊洛沙姆188，混勻后加入DPHP原料藥，混勻后研細(xì)，過(guò)100目篩，在一定壓力下均質(zhì)，制得DPHP納米晶。3.2DPHP納米晶單因素的考察3.2.1均質(zhì)壓力的考察 按DPHP納米晶的處方和制備工藝，考察不同的均質(zhì)壓力(1200，1600，2000bar)對(duì)DPHP納米晶粒徑的影響。結(jié)果如表3-1所示，均質(zhì)壓力在1600bar時(shí)DPHP納米晶的粒徑最小。（n為測(cè)量次數(shù)）表3-1不同均質(zhì)壓力對(duì)DPHP納米晶粒徑的影響（n=3）Table3-1EffectofdifferenthomogenizationpressuresonDPHPnanograinsize（n=3）粒徑(nm)PDI1200bar500.30.2171600bar352.70.1662000bar381.20.1733.2.2均質(zhì)次數(shù)的考察 按DPHP納米晶的處方和制備工藝，均質(zhì)壓力保持不變（1600bar），考察不同的均質(zhì)次數(shù)(25，30，35次)對(duì)DPHP納米晶粒徑的影響，結(jié)果如表3-2所示，均質(zhì)次數(shù)在35次時(shí)DPHP納米晶的粒徑最小，結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，最終確定均值次數(shù)為30次。表3-2不同均質(zhì)次數(shù)對(duì)DPHP納米晶粒徑的影響（n=3）Table3-2EffectofdifferenthomogenizationtimesonDPHPnanocrystallinesize（n=3）粒徑(nm)PDI25次309.80.25230次352.70.16635次287.10.2323.2.3HPMC使用量的考察 按DPHP納米晶的制備工藝，均質(zhì)壓力（1600bar）和均質(zhì)次數(shù)（30次）保持不變，考察不同使用量HPMC(0.2%、0.4%和0.6%)對(duì)DPHP納米晶粒徑的影響，結(jié)果如表3-3所示，HPMC使用量在0.2%時(shí)DPHP納米晶的粒徑最小。表3-3不同HPMC使用量對(duì)DPHP納米晶粒徑的影響（n=3）Table3-3EffectofdifferentHPMCusageonDPHPnanograinsize（n=3）粒徑(nm)PDI0.6%329.60.2180.4%498.10.2200.2%320.30.2483.2.4泊洛沙姆188使用量的考察 按DPHP納米晶的制備工藝，均質(zhì)壓力（1600bar）、均質(zhì)次數(shù)（30次）和HPMC使用量（0.2%）保持不變，考察不同使用量泊洛沙姆188(0.1%、0.3%和0.5%)對(duì)DPHP納米晶粒徑的影響，結(jié)果如表3-4所示，泊洛沙姆188使用量分別0.1%，0.3%和0.5%時(shí)DPHP納米晶的粒徑差異不明顯，結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，最終確定泊洛沙姆188的使用量為0.3%。表3-4不同泊洛沙姆188使用量對(duì)DPHP納米晶粒徑的影響（n=3）Table3-4Effectofdifferentamountsofpoloxamer188onDPHPnanocrystalsize（n=3）粒徑(nm)PDI0.1%284.40.2470.3%287.50.2760.5%290.60.2283.3正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選DPHP納米晶3.3.1考察因素和水平 選擇影響工藝條件的高壓均質(zhì)壓力(A)、高壓均質(zhì)次數(shù)(B)、HPMC使用量(C)為三個(gè)因素，每個(gè)因素選取三個(gè)水平，以粒徑為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)，按L9(33)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表進(jìn)行工藝篩選實(shí)驗(yàn)。正交設(shè)計(jì)因素水平表見表3-5。表3-5L9(33)正交試驗(yàn)因素水平表Table3-5L9(33)Orthogonaltestfactorleveltable水平因素高壓均質(zhì)壓力(bar)A高壓均質(zhì)次數(shù)(次)BHPMC使用量(%)C11400260.321600300.231800340.13.3.2正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果及優(yōu)化方案將“3.3.1”項(xiàng)下中9組材料按“3.1.2”項(xiàng)下方法制得DPHP混懸液后，各取適量DPHP混懸液，用蒸餾水稀釋到10mL后，用粒徑分析儀測(cè)定DPHP納米晶的粒徑，正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3-6所示，極差反映各因素對(duì)指標(biāo)的影響程度，其值越大，表明因素對(duì)指標(biāo)的影響越大。K1、K2、K3表示各因素水平對(duì)應(yīng)的均數(shù)。對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行直觀分析可知，三個(gè)因素的影響水平為:C>A>B，以粒徑為衡量指標(biāo)得出的最佳處方為A3B1C3，即高壓均質(zhì)的壓力為1800bar，高壓均質(zhì)的次數(shù)為26次，HPMC的使用量為0.1%。對(duì)上述結(jié)果進(jìn)行方差分析和F檢驗(yàn)，結(jié)果如表3-7所示，因素A和因素C的P<0.01，有顯著性差異；因素B的P>0.05，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，綜合各因素，處方的組成為A3B1表3-6L9(33)正交試驗(yàn)及結(jié)果（n=9）Table3-6L9(33)Orthogonaltestandresults（n=9）序號(hào)ABC粒徑(nm)1111300.42122321.33133280.44212271.95223269.76231320.37313271.88321282.59332268.8K1902.1844.1903.2K2861.9873.5862.0K3823.1869.5821.9K300.7281.4301.1K287.3291.2287.3K274.4289.8274.0極差26.39.827.1表3-7方差分析和F檢驗(yàn)的結(jié)果Table3-7ANOVAandF-testresults因素偏差平方和自由度F值PA3312.80227.3430.004B552.37621.2240.315C3117.39626.9100.005誤差4511.273203.3.3驗(yàn)證性試驗(yàn) 選用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)中篩選出的最優(yōu)處方制備3批樣品，考查其粒徑大小。結(jié)果如表3-8所示，三批DPHP納米晶的粒徑均在260nm至290nm之間，三批樣品粒徑的平均值為270.8nm，處于正常范圍。表3-8最優(yōu)處方下制備的DPHP納米晶粒徑大小（n=3）Table3-8SizeofDPHPnanocrystalspreparedunderoptimalprescription（n=3）粒徑(nm)PDI第一批284.10.293第二批267.90.263第三批260.40.231平均值270.80.2623.4DPHP納米晶凝膠的制備3.4.1DPHP納米晶凝膠處方組成DPHP納米晶凝膠的處方組成為：DPHP納米晶混懸液、卡波姆940、甘油、舒美PE9010、EDTA-2Na、三乙醇胺和蒸餾水。3.4.2DPHP納米晶凝膠處方組成工藝 提前一晚將處方量的卡波姆940加入到蒸餾水中并不斷攪拌，待其充分分散后停止攪拌，放置過(guò)夜使其充分溶脹，配置成濃度為1.2%的卡波姆水凝膠液。取處方量的DPHP納米晶混懸液，常溫?cái)嚢柘戮徛尤胩幏搅扛视?，攪拌均勻后加入處方量的舒美PE9010，攪拌均勻，后加入處方量的EDTA-2Na，不斷攪拌使其充分溶解，最后加入處方量的卡波姆940，攪拌均勻后滴加適量的三乙醇胺調(diào)節(jié)pH至6~7使其形成凝膠狀，即得DPHP納米晶凝膠。3.5DPHP納米晶凝膠的質(zhì)量評(píng)價(jià)3.5.1外觀性狀取DPHP納米晶凝膠，在黑色背景下觀察，結(jié)果如圖3-1和3-2所示，DPHP納米晶凝膠為乳白色、質(zhì)地均勻細(xì)膩的半固體制劑，稠度適宜，涂展性好。圖3-1DPHP納米晶凝膠俯視圖Figure3-1TopviewofDPHPnanocrystallinegel圖3-2DPHP納米晶凝膠正視圖Figure3-2FrontviewofDPHPnanocrystallinegel3.5.2pH值取DPHP納米晶凝膠1.0g于10mL燒杯中，加入蒸餾水至10.0g，用玻璃棒充分?jǐn)嚢柚镣耆芙夂笥胮H計(jì)測(cè)定其pH值，測(cè)得DPHP納米晶凝膠的pH值為6.600.02，pH適中，在皮膚適宜的pH范圍內(nèi)。3.5.3穩(wěn)定性考察分別取適量相等的DPHP納米晶凝膠于2支10mL離心管中，在3000rpm下離心30min后，2批樣品均無(wú)分層現(xiàn)象，表明DPHP納米晶凝膠穩(wěn)定性良好。3.5.4粘度取適量DPHP納米晶凝膠，用粘度儀在64轉(zhuǎn)子、10rpm下測(cè)定其粘度，結(jié)果見表9。表9DPHP納米晶凝膠的粘度測(cè)定結(jié)果Table9ViscositydeterminationresultsofDPHPnanocrystallinegels粘度(mPa·s)扭矩(%)第一次4944082.4第二次4854080.9第三次4890081.53.5.5刺激性實(shí)驗(yàn)取適量DPHP納米晶凝膠涂于4只大白鼠的皮膚表面一側(cè)，分別在給藥1，12，24，36和72h后觀察大白鼠皮膚，與不涂抹該藥處的皮膚另一側(cè)比較，涂抹藥處1，12，24，36和72h后均無(wú)紅斑等異?，F(xiàn)象，結(jié)果表明該凝膠涂于大鼠皮膚表面時(shí)不會(huì)產(chǎn)生刺激性。取少量DPHP納米晶凝膠涂于4個(gè)人的皮膚表面，在給藥1，12，24，36和72h后觀察人體皮膚，與不涂抹該藥處的皮膚比較，涂抹藥處1，12，24，36和72h后無(wú)紅斑等異?，F(xiàn)象。且人體皮膚涂抹DPHP納米晶凝膠處1小時(shí)內(nèi)會(huì)產(chǎn)生冰涼的感覺，結(jié)果表明該凝膠涂于人體皮膚表面時(shí)不會(huì)產(chǎn)生刺激性。3.5.6耐熱實(shí)驗(yàn)取本品適量，裝于密閉小瓶中，放于40℃恒溫箱中恒溫24h后，觀察凝膠，凝膠由原先的乳白色變成灰白色，如圖3-3和3-4所示，表明DPHP納米晶凝膠不適宜放置在較高的溫度。圖3-340℃放置前的DPHP納米晶凝膠Figure3-3DPHPnanocrystallinegelbeforeplacementat40°C圖3-440℃下放置24h后的DPHP納米晶凝膠Figure3-4DPHPnanocrystallinegelafter24hplacementat40°C3.5.7耐寒實(shí)驗(yàn)取本品適量，裝于密閉小瓶中，如圖3-5所示，于-10℃冰箱中放置24h后，觀察凝膠，凝膠處于結(jié)冰狀態(tài)，如圖3-6所示，放置室溫后恢復(fù)凝膠狀，顏色為乳白色，如圖3-7所示，無(wú)異?，F(xiàn)象。圖3-5-10℃放置前的DPHP納米晶凝膠Figure3-5-10°CDPHPnanocrystallinegelbeforeplacement圖3-6-10℃放置24h后的DPHP納米晶凝膠Figure3-6-10°CafterplacingtheDPHPnanocrystallinegelfor24h圖3-7-10℃放置24h后恢復(fù)至室溫的DPHP納米晶凝膠Figure3-7-10°Cfor24hafterreturningtoroomtemperatureDPHPnanocrystallinegel

4討論本實(shí)驗(yàn)選用HPMC和泊洛沙姆188作為穩(wěn)定劑，HPMC作為穩(wěn)定劑具有如下特點(diǎn):(1)可在不溶于水的顆粒周圍形成一層保護(hù)膜，防止顆粒凝結(jié)成塊，并可減緩顆粒沉淀，沉淀后的顆粒可通過(guò)振動(dòng)快速重新均勻地分散開來(lái)。(2)可以提高液相分散劑的粘度，減小固-液界面的張力，減小顆粒的表面自由能，從而使混懸液趨于穩(wěn)態(tài)。(3)可使該外用混懸液容易涂抹于受感染的肌膚上，而且不容易擦洗或損失，以確保該藥劑的效果。(4)能夠有效地將疏水性藥物完全浸潤(rùn)在水中，以克服因吸收空氣而引起的微粒浮起的問(wèn)題。(5)可將固體顆粒均勻地分散，便于傾倒出，并可精確地進(jìn)行劑量分配[24]。選擇泊洛沙姆188為穩(wěn)定劑，是由于泊洛沙姆188可以吸附于納米顆粒的表面，使其分子鏈具有舒展性，能阻止納米粒子在空間上彼此靠近。不同配比的穩(wěn)定劑對(duì)增溶效果有不同的影響，配比過(guò)小，顆粒容易團(tuán)聚。但在達(dá)到臨界膠束濃度后，再提高其用量，其對(duì)潤(rùn)濕性的影響不明顯，說(shuō)明了過(guò)量添加對(duì)其潤(rùn)濕性的影響不大[25]。本課題進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，先將DPHP混懸液在1800bar下分別均質(zhì)5，10，15，20，25，30，35次，初步判定高壓均質(zhì)次數(shù)對(duì)DPHP混懸液粒徑的影響。正式實(shí)驗(yàn)進(jìn)行單因素篩選時(shí)，保持預(yù)實(shí)驗(yàn)中粒徑最小的均質(zhì)次數(shù)和其它制備工藝不變，先探究均質(zhì)壓力對(duì)粒徑的影響，接著再逐步探究均質(zhì)次數(shù)、HPMC使用量和泊洛沙姆188使用量對(duì)粒徑的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)泊洛沙姆188的使用量為0.1%、0.3%和0.5%時(shí)DPHP納米晶的粒徑差異不明顯，故選擇均質(zhì)壓力、均質(zhì)次數(shù)和HPMC使用量三個(gè)因素進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。

5結(jié)論本課題利用高壓均質(zhì)法制備了DPHP納米晶，并且基于單因素法和正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選出的最優(yōu)處方為：均質(zhì)壓力1800bar、均質(zhì)次數(shù)26次、HPMC使用量0.1%、泊洛沙姆188使用量0.3%。本實(shí)驗(yàn)制備DPHP納米晶凝膠的工藝簡(jiǎn)便、可行，其質(zhì)量評(píng)價(jià)符合要求，可為其它藥物納米晶體制備和優(yōu)化提供借鑒和技術(shù)參考。

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