糞大腸菌群測(cè)定

任務(wù)三

糞大腸菌群測(cè)定項(xiàng)目七水樣中生物指標(biāo)測(cè)定

多管發(fā)酵法

一、方法原理

多管發(fā)酵法是以最可能數(shù)(MPN)來(lái)表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果的，用概率來(lái)推算水體中大腸桿菌密度的最近似數(shù)值的一種方法。大腸菌群在乳糖蛋白胨培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖，會(huì)分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣,使得溴甲酚紫指示劑由紫色變?yōu)辄S色。44.5℃復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)基中的膽鹽三號(hào)可抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng),最后產(chǎn)氣的為糞大腸菌群。通過(guò)查MPN表,得出糞大腸菌群濃度。

項(xiàng)目七水樣中生物指標(biāo)測(cè)定

二、試劑及儀器

（一）試劑及藥品

（1）單倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)基。

將蛋白質(zhì)牛肉浸亮乳糖、氯化鈉加熱溶解于1000mL水中,調(diào)節(jié)pH至7.2~7.4加人1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL、充分混勻115℃高壓蒸汽滅菌20min，避光干燥保存。

成分質(zhì)量（g）成分體積（ml）蛋白質(zhì)牛肉浸膏乳糖氯化鈉103551.6％溴甲酚紫乙醇溶液項(xiàng)目七水樣中生物指標(biāo)測(cè)定（2）三倍乳糖蛋白陳培養(yǎng)液：按上述方法稱取3倍培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分的量，溶于1000mL水中,配成三倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)基。（一）試劑及藥品項(xiàng)目七水樣中生物指標(biāo)測(cè)定（3）EC培養(yǎng)基成分質(zhì)量（g）成分質(zhì)量（g）胰胨20磷酸氫二鉀4乳糖5磷酸二氫鉀1.5膽鹽三號(hào)1.5氯化鈉5將上述成分加熱溶解于1000mL水中，115℃高壓蒸汽滅菌20min，滅菌后pH應(yīng)在6.9左右。（4）無(wú)菌水：取適量實(shí)驗(yàn)用水，1℃高壓蒸汽滅菌20min，備用。（二）實(shí)驗(yàn)儀器

高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、試管、無(wú)菌刻度吸管或移液槍、采樣瓶。三、操作步驟

（一）樣品采集

采集江、河、湖、庫(kù)等地表水樣時(shí)，可握住瓶子下部直接將帶塞采樣瓶插入水中，距水面10～15cm處，瓶口朝水流方向，拔瓶塞，使水樣灌入瓶?jī)?nèi)然后蓋上瓶塞，將采樣瓶從水中取出。如果沒有水流，可握住瓶子水平前推。采好水樣后，迅速扎上無(wú)菌包裝紙。項(xiàng)目七水樣中生物指標(biāo)測(cè)定

（1）將水樣充分混勻后，根據(jù)水樣污染的程度確定樣品接種量，不同種類樣品的接種量見下表。（二）樣品測(cè)定

項(xiàng)目七水樣中生物指標(biāo)測(cè)定

接種體積為10mL時(shí)，則使用三倍濃度乳糖蛋白胨培養(yǎng)基；接種體積≦1mL時(shí)，則使用單倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)基。并同時(shí)準(zhǔn)備一組空白對(duì)照。

（2）將接種過(guò)的水樣和空白對(duì)照放入恒溫培養(yǎng)箱，在37℃培養(yǎng)24h，若試管內(nèi)培養(yǎng)基變黃、有氣泡產(chǎn)生，則為陽(yáng)性。

（3）取呈陽(yáng)性的水樣，用接種環(huán)轉(zhuǎn)接到EC培養(yǎng)基中，30min內(nèi)放入恒溫培養(yǎng)箱。在44.5℃培養(yǎng)24h，若有氣泡產(chǎn)生，則說(shuō)明糞大腸桿菌呈陽(yáng)性。