動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與血清學(xué)試驗(yàn)

關(guān)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與血清學(xué)試驗(yàn)主要內(nèi)容實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓取方法12345實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處死方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物各種體液的采集方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液的采集方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉方法第2頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作前必須注意的事情1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為人類的替難者進(jìn)行各種生物醫(yī)學(xué)研究。試驗(yàn)中要從動(dòng)物福利和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理學(xué)考慮，減少一些不必要的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，如若不得不做的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，要盡可能將動(dòng)物的痛苦、壓迫和不適降到最低。2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的實(shí)踐性非常強(qiáng)，不能僅靠書本理論知識(shí)，需要通過反復(fù)實(shí)踐加以掌握，以保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行和減少動(dòng)物承受的痛苦第3頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天國(guó)際上對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理有如下五項(xiàng)要求:

⑴動(dòng)物居住空間應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn),注意日常的飼育管理,不使動(dòng)物饑餓、缺水和患病。⑵盡可能地采用代替法最少地使用和犧牲動(dòng)物。⑶使用犬、貓和猴時(shí)，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)進(jìn)行訓(xùn)練，盡可能地減少動(dòng)物的恐懼和不安。⑷實(shí)驗(yàn)結(jié)束和動(dòng)物不可能恢復(fù)時(shí)，應(yīng)采取安樂死。⑸要愛護(hù)試驗(yàn)動(dòng)物和對(duì)由于實(shí)驗(yàn)死亡的動(dòng)物應(yīng)持有憐憫和感謝之情。第4頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、動(dòng)物的抓取第5頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天動(dòng)物的抓取

小白鼠的捉持

捉拿時(shí)可先用右手抓住并提起鼠尾，置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)或鼠籠上，并稍向后拉；用左手的拇指和食指抓住小鼠兩耳后頸背部的皮膚，將鼠置于左手心中，拉直后肢，以無名指及小指按住鼠尾或小鼠的左后肢即可。小鼠抓取方法第6頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天

大白鼠的捉持

大白鼠的捉拿時(shí)，可戴上手套。實(shí)驗(yàn)者可用右手捉住鼠尾，放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)或鼠籠上，并稍向后拉；左手掌面向鼠背，食指和中指壓住鼠的頭頂，拇指和無名指分別從鼠的兩腋下插入，將鼠的兩前肢卡??；或拽緊鼠后頸及后背皮膚即可。大鼠抓取方法動(dòng)物的抓取第7頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天豚鼠的捉拿、固定

豚鼠膽小易驚，抓取時(shí)必須穩(wěn)、準(zhǔn)、迅速。先用手掌扣住鼠背，抓住其肩胛上方，將手張開，用手指環(huán)握頸部，另一只手托住其臀部，即可輕輕提起、固定。豚鼠抓取方法動(dòng)物的抓取第8頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天家兔的捉持

用一手抓住家兔頸背部皮膚，將兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿勢(shì)。犬抓取注意點(diǎn)

不要輕易使用長(zhǎng)柄鐵鉗，鉗傷造成的傷害會(huì)使它對(duì)你更加恐懼，影響以后實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。抓取后用繩子將嘴綁住。狗嘴的捆綁方法家兔的抓取

動(dòng)物的抓取第9頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉方法第10頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉方法對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行麻醉的目的是：消除實(shí)驗(yàn)過程中引起的痛苦和不適，確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的安全和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理的一個(gè)重要方面。應(yīng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?shí)驗(yàn)動(dòng)物種類、日齡及健康狀況等因素進(jìn)行綜合考慮，決定選用的麻醉劑和麻醉方法。麻醉方法有全身麻醉和局部麻醉兩種。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉中絕大多數(shù)采用全身麻醉。第11頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天吸入麻醉法：用揮發(fā)性麻醉藥。常用麻醉藥：乙醚氯仿全身麻醉注射麻醉法：用非揮發(fā)性麻醉藥。常用麻醉藥：戊巴比妥鈉硫噴妥鈉氯氨酮烏拉坦實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉方法第12頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天常用非揮發(fā)性麻醉藥的劑量

藥物及常用的溶液濃度劑量（mg/kg)麻醉持續(xù)時(shí)間與特點(diǎn)小鼠大鼠豚鼠家兔烏拉坦（20～25%）1000～1500（ip）1000～1500（ip）1000～1500（ip）1000～1200（iv）2～4小時(shí)。對(duì)呼吸和神經(jīng)影響小，但可降低血壓1000～1500（ip）戊巴比妥鈉（1～4％）45～50（ip）40～50（ip）40～50（ip）30～40（ip）2～4小時(shí)。注射后作用迅速，一般最常用，肌松不夠完全。20～25（iv）硫噴妥鈉（2～4％）30～40（iv）約半小時(shí)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉方法第13頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉應(yīng)注意的事項(xiàng)麻醉之前應(yīng)禁食，準(zhǔn)確稱量動(dòng)物體重，作為計(jì)算麻醉劑用量的依據(jù)。應(yīng)注意不同麻醉藥對(duì)動(dòng)物的作用是不同的，如戊巴比妥鈉、硫賁妥鈉等能抑制心肌收縮力，使肌肉松弛，而氯胺酮?jiǎng)t相反。大動(dòng)物犬、猴、羊等麻醉前半小時(shí)應(yīng)注射麻醉前給藥如阿托品和苯巴比妥鈉。靜脈注射麻醉藥是必須緩慢，邊注射邊觀察動(dòng)物。在麻醉過程中密切觀察動(dòng)物的反應(yīng)，動(dòng)物在麻醉期間體溫下降，應(yīng)注意保溫。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉方法第14頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液的采集方法第15頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液的采集方法1、大鼠、小鼠的采血方法

尾部采血眼眶后靜脈叢采血頸(股)靜脈或頸(股)動(dòng)脈采血摘眼球采血斷頭采血心臟采血尾部采血心臟采血第16頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天大小鼠不同采血方法的比較采血方法采血量（ml）應(yīng)用小鼠大鼠斷頭采血法0.2-1.01.5-5.0大批動(dòng)物集中處死采血，速度快摘眼球采血法0.2-1.51.0-8.0大批動(dòng)物集中采血，若一次少量采,可反復(fù)幾次尾靜脈切割采血法0.01-0.050.1-0.5用于用血量少的檢驗(yàn)，如血常規(guī)，能長(zhǎng)時(shí)期反復(fù)多次采血眼眶后靜脈采血法0.02-0.10.2-1.0能反復(fù)多次采血腋窩動(dòng)靜脈采血法0.5-1.51.0-5.0需處死動(dòng)物，麻醉后采血心臟采血法-0.2-1.0腹主動(dòng)脈采血法-5.0-10.0需處死動(dòng)物，麻醉后采血第17頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、豚鼠采血方法耳緣切口采血背中足靜脈采血心臟采血

3、兔的采血方法耳緣靜脈采血耳中央動(dòng)脈采血頸靜脈采血頸動(dòng)脈采血心臟采血實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液的采集方法第18頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天4、犬的采血方法

后肢外側(cè)小隱靜脈采血前肢背側(cè)皮下頭靜脈采血頸靜脈采血股動(dòng)脈采血前肢靜脈采血后肢小隱靜脈采血實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液的采集方法第19頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天

各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物活體安全采血量和致死采血量動(dòng)物種類最大安全采血量（ml）最小致死采血量（ml）小鼠0.30.5大鼠25豚鼠510兔1040犬50300猴1560實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液的采集方法第20頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、動(dòng)物各種體液的采集方法第21頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天動(dòng)物各種體液的采集方法1、尿液的采集方法

常用的采集方法較多，一般在實(shí)驗(yàn)前需給動(dòng)物灌服一定量的水。代謝籠法（適用于大、小鼠）導(dǎo)尿法（常用于雄性兔、狗）壓迫膀胱法（適用于兔、狗等較大動(dòng)物）

輸尿管插管法膀胱插管法膀胱穿刺法剖腹采尿法反射排尿法第22頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、消化液的采集

唾液（直接抽取法；制造腮腺瘺法）

胃液（直接收集胃液法；制備胃瘺法）

胰液和膽汁（通過對(duì)胰總管和膽總管的插管而獲得）3、腦脊液的采集

狗、兔腦脊液的采集通常采取脊髓穿刺法大鼠腦脊液的采集可采用枕大孔直接穿刺法4、其他體液的采集胸水的采集腹水的采集骨髓的采集精液的采集陰道內(nèi)液體的采集

動(dòng)物各種體液的采集方法第23頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天五、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處死方法第24頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處死方法安死術(shù)的概念

“安死術(shù)”是指以人道的方法處死動(dòng)物的過程。在處死動(dòng)物過程中減少動(dòng)物的驚恐或焦慮，安靜地、無痛苦地死亡。第25頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天1、大鼠小鼠處死方法頸椎脫臼法急性失血法麻醉致死法斷頭法擊打法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處死方法第26頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、犬、兔、豚鼠處死方法空氣栓塞法優(yōu)點(diǎn)：方法簡(jiǎn)單、迅速，缺點(diǎn)：動(dòng)物死于急性循環(huán)衰竭，各臟器凝血十分明顯。急性失血法先行麻醉，再分離頸動(dòng)脈或股動(dòng)脈，將一根較粗的塑料管插入動(dòng)脈內(nèi)放血。動(dòng)物在3～5min內(nèi)即可死亡。優(yōu)點(diǎn)：動(dòng)物十分安靜，對(duì)臟器無損傷，對(duì)活殺采集病理切片標(biāo)本是一種比較好的方法?；瘜W(xué)藥物致死法通過注射一定量的化學(xué)藥物而使動(dòng)物迅速致死。例如：

10％氯化鉀溶液：靜脈注射，用量為犬20～30ml/只，兔5～10ml／只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處死方法第27頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天血清學(xué)試驗(yàn)第28頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天本質(zhì)：抗原抗體在體外出現(xiàn)肉眼可見的特異性反應(yīng)優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、敏感性高、簡(jiǎn)便、快速血清學(xué)試驗(yàn)包括：血清學(xué)鑒定和血清學(xué)診斷第29頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期天血清學(xué)鑒定用含已知特異性抗體的免疫血清（診斷血清）與分離培養(yǎng)出的未知純種細(xì)菌或標(biāo)本中的抗原，進(jìn)行血清學(xué)反應(yīng)，以確定病原菌的種或型。第30頁(yè),共34頁(yè)，2024年2月25日，星期