藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌

試驗(yàn)內(nèi)容和要求1.掌握藥敏試驗(yàn)原理、步驟、結(jié)果及意義2.掌握慣用消毒與滅菌技術(shù)3.熟悉紫外線殺菌試驗(yàn)原理4.了解細(xì)菌L型誘導(dǎo)和菌落類型藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第1頁(yè)2一、藥敏試驗(yàn)在感染性疾病防治中意義

近年來(lái)，因?yàn)楦鞣N抗菌藥品廣泛應(yīng)用，造成耐藥菌株快速增多。尤其是廣譜及超廣譜抗生素普遍使用，造成耐藥菌株大量出現(xiàn)，給臨床治療帶來(lái)極大困難。同時(shí)，因?yàn)椴缓侠硎褂每股?，治療失敗率及不良反?yīng)都有增加。所以，藥敏試驗(yàn)在感染性疾病防治方面含有日益主要實(shí)際意義。藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第2頁(yè)3二.培養(yǎng)+藥敏目標(biāo)

1、確定造成感染病原菌種類，對(duì)于不一樣病原菌（G-桿菌或G+球菌，條件致病菌或急性傳染病病原菌）需要采取不一樣治療辦法。

2、確定病原菌對(duì)各種抗生素敏感性，指導(dǎo)臨床依據(jù)病人情況合理用藥。因?yàn)榧?xì)菌耐藥性快速增加，單純依賴經(jīng)驗(yàn)選取藥品經(jīng)常無(wú)效，在更多時(shí)候需要參考藥敏試驗(yàn)結(jié)果。

3、用于流行病學(xué)調(diào)查及院內(nèi)感染監(jiān)控，降低耐藥菌株流行。藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第3頁(yè)4三、什么情況下需要做培養(yǎng)+藥敏？感染原因無(wú)法確定。病原菌耐藥性無(wú)法確定，經(jīng)驗(yàn)用藥可能失?。ㄓ绕涫敲庖吡Φ拖禄颊?、長(zhǎng)久使用抗生素者、ICU病房、院內(nèi)感染患者、接收導(dǎo)管插入或其它創(chuàng)傷性治療患者。）病人對(duì)可用藥品過(guò)敏，需要檢測(cè)其它藥品耐藥性。病人個(gè)體情況要求對(duì)一些藥品準(zhǔn)確用藥，需要測(cè)定其最低抑菌濃度（MIC）。 藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第4頁(yè)四、慣用抗菌藥品敏感性試驗(yàn)與耐藥檢測(cè)方法介紹其原理：體外測(cè)定抗生素藥品抑菌或殺菌能力?？蓭椭R床對(duì)感染性疾病選擇最正確用藥，還可進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，了解一些致病菌耐藥性變異情況。紙片擴(kuò)散法（Kirby-Bauertest）稀釋法（dilutiontest）E試驗(yàn)法（Etest）聯(lián)合藥品敏感試驗(yàn)特殊耐藥菌及耐藥酶表型檢測(cè)耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)等藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第5頁(yè)五、紙片擴(kuò)散法（K-B法）原理：含有定量抗菌藥品紙片貼在已接種測(cè)試菌瓊脂平板上，紙片所含藥品吸收瓊脂中水分溶解后便不停向紙片周圍區(qū)域擴(kuò)散，形成遞減梯度濃度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)細(xì)菌生長(zhǎng)被抑制，形成透明抑菌圈。抑菌圈大小反應(yīng)測(cè)試菌對(duì)測(cè)定藥品敏感程度，并與該藥對(duì)測(cè)試菌最低抑制濃度（minimalinhibitoryconcentration，MIC）呈負(fù)相關(guān)，即抑菌圈愈大，MIC愈小。藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第6頁(yè)方法：菌液制備：挑取孵育16-24h血平板上數(shù)個(gè)菌落置于生理鹽水管中，校正濃度至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)；涂布接種：無(wú)菌棉拭蘸取菌液，在試管壁旋轉(zhuǎn)擠去多出菌液后在MH瓊脂表面均勻涂布接種3次，每次旋轉(zhuǎn)平板60o，最終沿平板內(nèi)緣涂抹1周；貼含藥紙片：平板在室溫下干燥3-5min，用無(wú)菌鑷子將含藥紙片緊貼于瓊脂表面，各紙片中心相距應(yīng)大于24mm，紙片距平板內(nèi)緣應(yīng)大于15mm；孵育：35oC16-18h，量取抑菌圈直徑。藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第7頁(yè)注意事項(xiàng)1紙片應(yīng)分布均勻，中心距離大于24mm。2含菌平板必須防止過(guò)濃或過(guò)稀。3紙片貼完后應(yīng)在15min內(nèi)將平板反過(guò)來(lái)，置于37度溫箱中。4紙片一旦接觸培養(yǎng)基就不應(yīng)再挪動(dòng)位置。5要注意無(wú)菌操作。藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第8頁(yè)影響藥敏結(jié)果原因培養(yǎng)基應(yīng)依據(jù)試驗(yàn)菌營(yíng)養(yǎng)需要進(jìn)行配制。傾注平板時(shí)，厚度適當(dāng)（約5-6mm），不可太薄，普通90mm直徑培養(yǎng)皿，傾注培養(yǎng)基18-20ml為宜。培養(yǎng)基內(nèi)應(yīng)盡可能防止有抗菌藥品拮抗物質(zhì)，如鈣、鎂離子能減低氨基糖苷類抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和對(duì)氨苯甲酸（PABA）能拮抗磺胺藥和TMP活性。細(xì)菌接種量細(xì)菌接種量應(yīng)恒定，如太多，抑菌圈變小，能產(chǎn)酶菌株更可破壞藥品抗菌活性。藥品濃度藥品濃度和總量直接影響抑菌試驗(yàn)結(jié)果，需準(zhǔn)確配制。商品藥應(yīng)嚴(yán)格按照其推薦治療量配制。培養(yǎng)時(shí)間普通培養(yǎng)溫度和時(shí)間為37℃，8-18小時(shí)，有些抗菌藥擴(kuò)散慢如多粘菌素，可將已放好抗菌藥平板培養(yǎng)基，先置4℃冰箱內(nèi)2~4小時(shí)，使抗菌藥預(yù)擴(kuò)散，然后再放37℃溫箱中培養(yǎng)，能夠推遲細(xì)菌生長(zhǎng)，而得到較大抑菌圈。藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第9頁(yè)結(jié)果判讀：用刻度尺量取抑菌圈直徑，依據(jù)CLSI（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute）標(biāo)準(zhǔn)判讀結(jié)果；匯報(bào)：細(xì)菌對(duì)該抗生素是敏感（susceptible，S）；耐藥（resistant，R）；還是中介（intermediate，I）。藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第10頁(yè)11六、怎樣了解MIC值及藥敏結(jié)果？

每種藥品均提供定性和定量?jī)煞N結(jié)果。定性：敏感（S）表示該藥品對(duì)該細(xì)菌有抑制或殺滅作用。使用常規(guī)劑量能夠到達(dá)有效治療效果。

中介（中度敏感，I）表示細(xì)菌對(duì)該藥品治療敏感性低于敏感菌株，必須加大劑量以到達(dá)更高血藥濃度才能在特定生理部位取得有效臨床效力；對(duì)于使用劑量有嚴(yán)格限制藥品則必須重復(fù)測(cè)試以確定敏感還是耐藥。

耐藥（R）表示藥品常規(guī)劑量所到達(dá)藥品濃度不能抑制或殺死細(xì)菌，即使加大劑量也不能到達(dá)治療效果或者超出了人體正常耐受水平。定量：MIC（最低抑菌濃度）表示在體外到達(dá)抑制細(xì)菌生長(zhǎng)所需要最低藥品濃度。臨床治療要求血藥濃度普通為MIC值（μg/ml）

4-8倍。對(duì)于不一樣部位不一樣藥品，其濃度可能更高或更低。應(yīng)詳細(xì)情況詳細(xì)分析，不可一概而論。

藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第11頁(yè)12長(zhǎng)久使用抗生素病人應(yīng)該怎樣做藥敏試驗(yàn)？

長(zhǎng)久使用抗生素病人尤其是住院病人應(yīng)該經(jīng)常做藥敏試驗(yàn)。所謂長(zhǎng)久，并不是一個(gè)很長(zhǎng)時(shí)間概念，住院病人每隔3-4天就需要做一次細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)。對(duì)于ICU病房病人，可能天天都要做細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)。因?yàn)檫@些病人多數(shù)免疫力較差，輕易受條件致病菌侵犯，而且重復(fù)發(fā)作。另外病原菌常呈多重耐藥性，產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶G-桿菌（ESBL）以及耐甲氧西林葡萄球菌（MRSA和MRSCN）、產(chǎn)AmpC酶陰溝腸桿菌、銅綠假單胞菌在ICU病房最為常見(jiàn)。對(duì)于長(zhǎng)久使用抗生素病人，其感染有以下幾個(gè)特點(diǎn)；

1.長(zhǎng)久使用抗生素病人，不一樣時(shí)期（即使在很短時(shí)間內(nèi)）感染病原菌種類可能不一樣，耐藥性所以也不相同。

2、同一株細(xì)菌，在長(zhǎng)時(shí)間用藥時(shí)，僅需要3-4天就能夠從對(duì)某種藥品敏感發(fā)展為耐藥。

3.長(zhǎng)久使用抗生素輕易誘發(fā)細(xì)菌產(chǎn)生L型變異。常規(guī)培養(yǎng)陰性時(shí)，進(jìn)行L型細(xì)菌培養(yǎng)能夠提升檢出率。藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第12頁(yè)形成條件：生物學(xué)特征：與醫(yī)學(xué)關(guān)系：細(xì)胞壁中肽聚糖結(jié)構(gòu)受理化或生物原因直接破壞或合成抑制而形成。形態(tài)多形性；染色革蘭陰性；培養(yǎng)高滲培養(yǎng)基；菌落油煎蛋樣

仍有一定致病性細(xì)菌L型－細(xì)胞壁缺點(diǎn)細(xì)菌臨床分離葡萄球菌L型葡萄球菌L型回復(fù)后藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第13頁(yè)14滅菌－殺滅或除去全部微生物繁殖體和芽胞。消毒－殺滅或除去病原微生物。防腐－抑制微生物生長(zhǎng)與繁殖。抑菌劑或防腐劑。除菌:用沖洗、過(guò)濾等機(jī)械伎倆除去微生物方法化療：用對(duì)病原菌有毒力但對(duì)機(jī)體無(wú)害化學(xué)物質(zhì)殺滅或抑制機(jī)體內(nèi)病原微生物方法消毒與滅菌技術(shù)

基本概念藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第14頁(yè)擦拭法高壓蒸汽滅菌法慣用消毒滅菌方法物理法

化學(xué)法浸泡法熏蒸法噴霧法熱力消毒法生物凈化法輻射消毒法燃燒法烤箱法煮沸法干熱法濕熱法日光曝曬法紫外線燈照射法電子滅菌燈法電離輻射法藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第15頁(yè)煮沸消毒法操作規(guī)程將物品刷洗潔凈，全部浸沒(méi)在水中，或在水中加入碳酸氫鈉配成1％一2％濃度，可將沸點(diǎn)提升到105℃．還可去污防銹。加熱煮沸。水沸后開(kāi)始計(jì)時(shí)5—10min，如中途加入物品，則在第二次水沸后重新計(jì)時(shí)。關(guān)閉熱源，用無(wú)菌持物鉗取出消毒物品。藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第16頁(yè)

焚燒----最徹底滅菌方法燒灼----直接用火焰滅菌方法如接種環(huán)、試管口、三角瓶口干烤----加熱160-170℃2h

玻璃器皿、陶瓷1、干熱滅菌法紅外線----熱效應(yīng)，與干烤類似滅菌效果：可殺死營(yíng)養(yǎng)體和芽胞藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第17頁(yè)2.濕熱滅菌法高壓蒸汽滅菌法（熱壓滅菌法）最有效濕熱滅菌法121℃15-20mim（殺芽胞)煮沸消毒法水煮100℃5mim(殺繁殖體)-2h(殺芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法間歇蒸汽滅菌法水蒸汽100℃15-30mim(殺繁殖體)重復(fù)屢次流動(dòng)蒸汽間歇加熱滅菌(殺芽胞）較低溫度61℃30mim/71℃30s（殺致病菌）效果比干熱好藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第18頁(yè)壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測(cè)

物理監(jiān)測(cè)法用150℃或200℃留點(diǎn)溫度計(jì)。使用前將溫度計(jì)汞柱甩至50℃以下，放入包裹內(nèi)，滅菌后檢驗(yàn)其讀數(shù)是否到達(dá)滅菌溫度化學(xué)監(jiān)測(cè)法主要是經(jīng)過(guò)化學(xué)指示劑化學(xué)反應(yīng)，滅菌后展現(xiàn)顏色改變來(lái)區(qū)分是否到達(dá)滅菌要求。臨床慣用化學(xué)指示卡與化學(xué)指示膠帶，化學(xué)指示卡放在包中央，化學(xué)指示膠帶粘貼在包外面。生物監(jiān)測(cè)法是最可靠監(jiān)測(cè)法，利用對(duì)熱耐受力較強(qiáng)非致病性嗜熱脂肪桿菌芽孢作為指示劑，制成每片含106個(gè)嗜熱脂肪桿菌芽孢菌紙片,使用時(shí)將10片菌紙片分別放于滅菌器四角及中央，待滅菌完成，用無(wú)菌鑷取出后．再放人培養(yǎng)基內(nèi)，在56℃溫箱中培養(yǎng)48h至1周，若全部菌紙片無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)則表示滅菌合格。藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第19頁(yè)消毒與滅菌技術(shù)

輻射滅菌法?非電離輻射：紫外線最正確殺菌波長(zhǎng)為250～270nm殺菌機(jī)理：干擾DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄

特點(diǎn)：紫外線穿透力較弱適應(yīng)范圍：紫外線消毒適合用于空氣消毒與物品表面消毒。藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第20頁(yè)消毒與滅菌技術(shù)

濾過(guò)除菌法殺菌機(jī)理：含有微細(xì)小孔<0.22μm,只允許液體或氣體及孔徑<0.22μm顆粒經(jīng)過(guò)，細(xì)菌不能濾過(guò)。不能除病毒、支原體適用范圍：血清、毒素、輸液、生物制品、抗生素以及空氣等除菌。藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第21頁(yè)促進(jìn)菌體蛋白質(zhì)變性凝固（酚、醇、醛、酸堿類等）干擾細(xì)菌酶系統(tǒng)和代謝（氧化劑、重金屬鹽類等）損傷細(xì)菌細(xì)胞膜，增加其通透性（表面活性劑、脂溶劑等）菌體成份氧化、水解或結(jié)構(gòu)改變（氧化劑、鹵素、醛、酚等）消毒與滅菌技術(shù)

化學(xué)消毒劑作用機(jī)制藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第22頁(yè)消毒劑類別名稱濃度(%)用途重金屬鹽紅汞2皮膚、粘膜、小創(chuàng)面消毒硫柳汞0.01生物制品防腐氧化劑高錳酸鉀0.1皮膚、尿道、水果、蔬菜消毒過(guò)氧化氫3皮膚、粘膜、創(chuàng)傷消毒過(guò)氧乙酸0.2～0.5塑料、玻璃、人造纖維消毒鹵素類碘液2.5皮膚消毒醇類乙醇70～75皮膚、體溫計(jì)消毒酚類石炭酸3～5地面、器皿表面和排泄物消毒來(lái)蘇3～5同上、也慣用于手及皮膚消毒表面活性劑新潔爾滅0.1手術(shù)器械消毒酸堿類生石灰1:4～1:8排泄物、地面消毒染料龍膽紫2～4表淺創(chuàng)傷消毒藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌第23頁(yè)化學(xué)消毒劑使用方法浸泡法侵泡法是將物品洗凈、擦干后，浸沒(méi)在消毒液中進(jìn)行消毒滅菌方法。擦拭法擦拭法是用消毒劑直接擦拭人體或物品表面，如皮膚、桌