2019年臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技師考試《微生物檢驗(yàn)》輔導(dǎo)講義 細(xì)菌對藥物的敏感試驗(yàn)

細(xì)菌對藥物的敏感試驗(yàn)

＞需氧菌和兼性厭氧菌的體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)

＞厭氧菌體外藥敏試驗(yàn)方法

＞結(jié)核分枝桿菌體外藥敏試驗(yàn)方法

＞真菌體外藥敏試驗(yàn)方法

＞耐藥菌株的監(jiān)測

抗菌藥物的種類及作用機(jī)制

L青霉素類

青霉素與青霉素結(jié)合蛋白（PBP）結(jié)合，抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成

（1）天然青霉素

種類：青霉素G、青霉素V

作用于不產(chǎn)青霉素酶G,球菌、C球菌、厭氧菌

（2）耐青霉素酶青霉素

種類：甲氧西林、蔡夫西林、苯哇西林、氯嚏西林、雙氯西林、氟氯西林

作用于產(chǎn)青霉素酶的葡萄球菌

（3）廣譜青霉素

1）氨基組青霉素：氨葦西林、阿莫西林

作用于青霉素敏感的細(xì)菌、大部分大腸埃希菌、奇異變形桿菌、流感嗜血桿菌等G桿菌

2）竣基組青霉素：竣茉西林、替卡西林

作用于產(chǎn)內(nèi)酰胺酶腸桿菌科細(xì)菌和假單胞菌

3）版基組青霉素：美洛西林、阿洛西林、哌拉西林

作用于產(chǎn)B-內(nèi)酰胺酶腸桿菌科細(xì)菌和假單胞菌

2.頭抱菌素類

頭抱菌素與青霉素結(jié)合蛋白結(jié)合，發(fā)揮抑菌和殺菌效果

G'球菌：一代〉二代〉三代

G桿菌：三代〉二代〉一代

第四代頭抱菌素作用幾乎相同，具有抗假單胞菌的作用

（1）第一代頭抱菌素：有頭銜睡唾、頭也嘎吩、頭抱氨節(jié)、頭抱噗林、頭抱拉定、頭狗毗硫、頭也羥

氨茉。

（2）第二代頭狗菌素：有頭狗孟多、頭狗映辛、頭抱尼西、頭抱雷特、頭抱克洛、頭抱丙烯、氯碳頭

抱。

（3）第三代頭抱菌素：有頭銜睡月虧、頭銜曲松、頭抱唾的、頭抱哌酮、頭抱克后、頭狗布烯、頭狗地

尼、頭抱泊后酯。

（4）第四代頭抱菌素：有頭抱匹羅、頭抱嚷利、頭抱毗的和頭抱毗普。

3.其他B-內(nèi)酰胺類

單環(huán)類

氨曲南和卡蘆莫南

對G作用強(qiáng)，如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌、銅綠假單胞菌

對G,和厭氧菌無作用

拉氧頭抱類

抗菌譜廣，殺菌作用強(qiáng)，對產(chǎn)。-內(nèi)酰胺的G有很強(qiáng)的抗菌作用，對產(chǎn)酶的金黃色葡萄球菌也具有一定

的抗菌活性。

頭抱西丁、頭抱替坦、頭抱美嚶。

對G，有較好的抗菌活性，對厭氧菌有高度抗菌活性，但對非發(fā)酵菌無效。

碳青霉素類

作用特點(diǎn)和機(jī)制

①具有良好穿透性

②與PBP1、PBP2結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞的溶解

③對質(zhì)粒和染色體介導(dǎo)的B-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定

碳青霉素類

目前抗菌譜最廣的抗菌藥物，具有快速殺菌作用。

除了嗜麥芽窄食單胞菌、耐甲氧西林葡萄球菌、尿腸球菌和某些脆弱類桿菌耐藥

亞胺培南、美羅培南、比阿培南、帕尼培南、多利培南

B-內(nèi)酰胺酶抑制劑的復(fù)合制劑

與B-內(nèi)酰胺類抗菌藥物聯(lián)用能增強(qiáng)后者的抗菌活性

1）克拉維酸：對產(chǎn)B-內(nèi)酰胺酶（2a、2b、2c、2d、2e型）的細(xì)菌有抑菌活性。

2）舒巴坦：常與氨羊西林或頭抱哌酮聯(lián)合應(yīng)用于腸道感染；對不動(dòng)桿菌屬的作用強(qiáng)。

3）他噗巴坦：抑酶作用范圍廣，幾乎包括所有內(nèi)酰胺酶。酶抑制作用優(yōu)于克拉維酸和舒巴坦。

4）復(fù)合制劑種類：

加酶抑制劑的復(fù)合制劑用于產(chǎn)B-內(nèi)酰胺酶的革蘭陰性和陽性細(xì)菌。

包括氨苦西林-舒巴坦、替卡西林-克拉維酸、阿莫西林-克拉維酸、哌拉西林-他唾巴坦及頭抱哌酮-舒

巴坦。

4.氨基糖昔類

作用機(jī)制：

①依靠離子的附作用，吸附在菌體表面，造成膜的損傷

②和細(xì)菌核糖體30s小亞基發(fā)生不可逆結(jié)合，抑制mRNA的轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)的合成，造成遺傳密碼的錯(cuò)讀,

產(chǎn)生無意義的蛋白質(zhì)。

種類：

①鏈霉菌屬：如鏈霉素、卡那霉素、妥布霉素、核糖霉素、巴龍霉素、新霉素；

②小單胞菌屬：如慶大霉素、福提霉素；

③半合成氨基音類：阿米卡星、奈替米星、地貝卡星等，氨基背類抗菌藥物對需氧G桿菌有較強(qiáng)的抗

菌活性，對G'球菌有一定的活性。

5.■諾酮類

作用機(jī)制：①通過外膜孔蛋白和磷脂滲透進(jìn)入細(xì)菌細(xì)胞

②作用于DNA旋轉(zhuǎn)殖，干擾細(xì)菌D\A復(fù)制、修復(fù)和重組

（1）第一代：為窄譜抗菌藥物，對G'球菌無作用；

主要作用于大腸埃希菌，且迅速出現(xiàn)耐藥，較少應(yīng)用于臨床

（2）第二代：對G和G'細(xì)菌均有作用；

比較這類藥的抗菌活性強(qiáng)度依次為環(huán)丙沙星、氧氟沙星、羅美沙星、氟羅沙星、培氟沙星、諾氟沙星。

（3）第三代：對G,菌作用高于第二代的4?8倍，對厭氧菌亦有作用；司帕沙星、妥舒沙星、左氧氟

沙星、加替沙星、格帕沙星、莫西沙星等。

6.大環(huán)內(nèi)酯類

作用特點(diǎn)和機(jī)制：

①可逆結(jié)合細(xì)菌核糖體50S大亞基的23s單位，抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成和肽鏈延伸；

②肺部濃度較血清濃度高；

③新一代大環(huán)內(nèi)酯類具有免疫調(diào)節(jié)功能，能增強(qiáng)單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能。

國內(nèi)常用有紅霉素、吉他霉素、麥迪霉素、乙酰螺旋霉素。

新一代大環(huán)內(nèi)酯類有克拉霉素、羅紅霉素、地紅霉素、氟紅霉素、阿奇霉素和乙酰麥迪霉素。

對流感嗜血桿菌、軍團(tuán)菌、支原體、衣原體等具有強(qiáng)大的抗菌作用。

【內(nèi)容講解】

第一節(jié)藥敏試驗(yàn)中抗菌藥物的選用

＞按臨床需要選用抗菌藥物的種類；

＞同類抗菌藥物僅選一個(gè)作為代表；

＞根據(jù)測定細(xì)菌的種屬和感染部位進(jìn)行選藥；

＞參考NCCLS公布的近期有關(guān)文件，如《抗菌藥物敏感性試驗(yàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)》，在標(biāo)準(zhǔn)中抗菌藥物分為四

組，根據(jù)相應(yīng)原則進(jìn)行選擇。

第二節(jié)細(xì)菌對藥物的敏感試驗(yàn)

概念：指在體外測定藥物殺死細(xì)菌能力的試驗(yàn)。

藥敏試驗(yàn)主要用于：

①幫助臨床醫(yī)師選擇效果最佳的藥物進(jìn)行感染性疾病的治療，以避免由于抗菌藥物使用不當(dāng)造成的許

多不良后果；

②進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查；

③藥敏試驗(yàn)結(jié)果還可以用來做某些細(xì)菌的鑒定：

④指導(dǎo)有關(guān)部門制定流行耐藥菌的防治措施。

一、擴(kuò)散法(K-B法)

＞目前常用的方法，是一種半定量的方法。

＞美國NCCLS紙片擴(kuò)散法敏感試驗(yàn)分委會(huì)所推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法是以Bauer-Kirby建立的K-B法，是“前

公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方法。

(-)原理:

抑菌圈的大小可以反映待檢菌對測定藥物的敏感程度，與該藥對待檢菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負(fù)相

關(guān)，即抑菌圈愈大，MIC愈小。

（二）材料

1.培養(yǎng)基：水解酪蛋白（M-H）瓊脂，pH7.2,瓊脂厚度為4mm。

2.抗菌藥物紙片：選擇直徑6.35mm,吸水量20口1的專用藥敏紙片。

3.接種菌液的準(zhǔn)備：形態(tài)相同的菌落4?5個(gè)，接種于3?5ml水解酪蛋白（MTI）肉湯中，35℃培養(yǎng)2?

8ho用生理鹽水或肉湯校正菌液濃度至0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)（1.5X10*/ml的含菌量），校正后的菌液應(yīng)在

15min內(nèi)接種。

（三）實(shí)驗(yàn)步驟

＞以無菌棉拭蘸取已制備好的菌液均勻涂布接種于M-H瓊脂表面

＞置室溫干燥3?5min后用無菌鑲子或貼紙片機(jī)將含藥紙片貼于含菌瓊脂表面。

各紙片中心距離不小于24mm,紙片距平板內(nèi)緣應(yīng)大于15mm。

＞平板經(jīng)室溫放置15min再倒放于35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16-18小時(shí)后閱讀結(jié)果。

（四）結(jié)果判讀

＞抑圈菌的邊緣以肉眼見不到細(xì)菌明顯生長為限。

＞每批試驗(yàn)都應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)菌株對照，只有對照菌株的敏感度符合標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才是可靠的。

試驗(yàn)結(jié)果解釋分為三級：

＞敏感（S）：表示常規(guī)劑量的測定藥物在體內(nèi)所達(dá)到的濃度能抑制或殺滅待測菌。

＞中介度（I）：不是敏感性的度量，作為“緩沖域”，其臨床意義是不確定的，故不應(yīng)作臨床報(bào)告。

耐藥（R）：表示常規(guī)劑量的測定藥物在體內(nèi)達(dá)到有效濃度時(shí)不能抑制檢測菌生長。

（五）影響結(jié)果的因素

L培養(yǎng)基培養(yǎng)基的成分、酸堿度、瓊脂含量等。

2.抗菌藥物紙片紙片含藥量是影響抑菌圈大小的主要因素，保存條件以低溫干燥為佳。

3.菌量加大菌量可使抑菌圈減小，相反可使抑菌圈擴(kuò)大。

4.操作質(zhì)量

（1）培養(yǎng)基的厚度。

（2）接種細(xì)菌后應(yīng)在室溫放置片刻。

（3）培養(yǎng)溫度為35℃為宜。堆放試驗(yàn)平板不超過兩個(gè)，使其受熱均勻。

（4）測量抑菌量應(yīng)仔細(xì)、精確，從生長刺激帶測量。

（六）質(zhì)量控制

1.質(zhì)控菌株采用標(biāo)準(zhǔn)菌株是進(jìn)行質(zhì)控的主要措施.

＞金黃色葡萄球菌ATCC25923,大腸埃希菌ATCC25922,銅綠假單胞菌ATCC27853,糞腸球菌ATCC29212

或ATCC33186。

2.抑菌圈質(zhì)控范圍每種抗菌藥物對四個(gè)質(zhì)控菌株的抑菌圈，允許范圍，為95%的可信限，即實(shí)驗(yàn)室日

間質(zhì)控得到的抑菌圈直徑在連續(xù)20個(gè)數(shù)值中，僅允許有一個(gè)超出這個(gè)范圍。

二、稀釋法

＞體外定量測定抗菌藥物抑制待測菌生長活性的方法

＞根據(jù)稀釋培養(yǎng)基的不同，分為肉湯稀釋法和瓊脂稀釋法。

＞瓊脂稀釋法是細(xì)菌藥敏試驗(yàn)的金標(biāo)準(zhǔn)。

＞稀釋法所測得的某抗菌藥物抑制待測菌生長的最低濃度為最低（或最?。┮志鷿舛龋∕IC）,稀釋法

也可測定最小殺菌濃度（MBC）。

（一）肉湯稀釋法

1.原理

以水解酪蛋白（MT1）液體培養(yǎng)基將抗菌藥作不同濃度的稀釋，然后接種待測菌，定量測定抗菌藥物抑

制該菌的最低濃度（MIC）或殺死該菌的最低（或最?。⒕鷿舛龋∕BC）。

2.材料

＞（1）抗菌藥物原液的配制：溶劑一般為蒸儲(chǔ)水、磷酸鹽緩沖液或乙醇等，稀釋劑多為蒸儲(chǔ)水。

＞原液以過濾法除菌，小量分裝使用。大部分抗菌藥物原液在-20C以下可保存三個(gè)月，而在4℃以下

只能保存一周。

＞（2）培養(yǎng)基：一般細(xì)菌采用M-H液體培養(yǎng)基。

＞（3）接種菌液的制備：

在已分純的待測菌平板上挑取4~5個(gè)形態(tài)相同的菌落接種于3?5mlM-H液體培養(yǎng)基內(nèi)，35℃培養(yǎng)4~

6h；校正菌液濃度，使其相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)，再用M-H液體培養(yǎng)基按1：200稀釋后備用。稀釋后的

菌液應(yīng)在15min內(nèi)接種。

3.試驗(yàn)步驟

（1）試管10?15支。

（2）各管倍比稀釋抗菌藥物，含量依次為512、256-0.03ug/mlo另設(shè)培養(yǎng)液對照，檢測菌生長對

照和質(zhì)控菌生長對照管各一支，每管1ml。

（3）將已校正濃度的待測菌懸液依次加入含藥管內(nèi)，每管0.05ml,混勻。各試管置35℃培養(yǎng)16?18

小時(shí)后觀察結(jié)果。

結(jié)果判讀：

＞凡無肉眼可見細(xì)菌生長的藥物最低濃度即為該待測菌最低抑菌濃度（MIC）。

＞再以0.01ml容量接種環(huán)取肉眼觀察認(rèn)為無菌生長的試管移種一環(huán)于血瓊脂平板作次代培養(yǎng)，經(jīng)35℃

培養(yǎng)過夜后觀察最低藥物濃度能殺死99.9%原始種入的細(xì)菌即為該菌的最低殺菌濃度（MBC）。

影響結(jié)果的因素

（1）培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的pH、滲透壓及電解質(zhì)。

（2）抗菌藥物：抗菌藥物必須采用標(biāo)準(zhǔn)粉劑。配好的藥物原液應(yīng)在有效期內(nèi)使用。

（3）結(jié)果觀察時(shí)間：應(yīng)在12?18h之間觀察。

質(zhì)量控制：

＞金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC25922、糞腸球菌ATCC29212、銅綠假單胞菌ATCC27853。

＞超過或低于預(yù)期值范圍一個(gè)稀釋度以上，不應(yīng)向臨床發(fā)出報(bào)告，應(yīng)檢查出現(xiàn)差錯(cuò)的原因以及標(biāo)準(zhǔn)菌

株被污染和變異的可能性。

（二）瓊脂稀釋法

將待測菌接種于含不同濃度藥物的瓊脂平板上，經(jīng)培養(yǎng)后觀察菌落的生長情況，以能抑制細(xì)菌生長的

最低藥物濃度為該菌的最低抑菌濃度。

（三）E-test

＞稀釋法與擴(kuò)散法相結(jié)合的一種方法，直接定量試驗(yàn)。

＞把含有干燥的穩(wěn)定的藥物塑料條貼在瓊脂平板的表面，經(jīng)培養(yǎng)在一定范圍抑制細(xì)菌生成，形成抑菌

環(huán)。

三、殺菌試驗(yàn)

1.最低殺菌濃度

最低殺菌濃度是某抗菌藥物能殺滅99.9%以上的測試菌量的最低藥物濃度。測定方法就是稀釋法MIC測

定的基礎(chǔ)上通過再轉(zhuǎn)種、再孵育，最終測得某種抗菌藥物對被測菌的MBC。

2.時(shí)間-殺菌曲線

＞主要用于評價(jià)一種抗菌藥物對測試菌的殺菌速率，以及兩種或兩種以上抗菌藥物對測試菌的聯(lián)合殺

菌活性。

＞操作時(shí)培養(yǎng)基和測試菌的準(zhǔn)備等與測定MIC的肉湯稀釋法相同，設(shè)定不同培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)。

最后將各時(shí)間點(diǎn)測得的平均菌落計(jì)數(shù)在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪制殺菌曲線。

四、體外聯(lián)合藥物敏感試驗(yàn)

（-）聯(lián)合抑菌試驗(yàn)

1.試管棋盤（方陣）稀釋法

＞根據(jù)A藥和B藥的MIC確定藥物聯(lián)合測定的稀釋度。一般選擇6~8個(gè)稀釋度左右，每種藥的最高濃

度為其MIC的2倍。

＞根據(jù)測定結(jié)果按下列公式計(jì)算部分抑菌濃度指數(shù)（FIC）：

FIC=A藥聯(lián)合時(shí)的MIC/A藥單測的M1C+B藥聯(lián)合時(shí)的MIC/B藥單測的MIC

判斷標(biāo)準(zhǔn)：

FIC指數(shù)＜0.5協(xié)同作用；FIC指數(shù)0.5?1相加作用

FIC指數(shù)1?2無關(guān)作用；FIC指數(shù)＞2拮抗作用

2.微量棋盤（方陣）稀釋法

基本方法與MIC測定的肉湯稀釋法相同，按“棋盤”稀釋法原則組合。

3.瓊脂棋盤（方陣）稀釋法

基本方法與MIC測定的瓊脂稀釋法相同，以含有不同組合濃度的MH瓊脂平板代替以上含有不同組合濃

度藥物的Mil肉湯試管。按“棋盤”稀釋法原則組合.

(-)聯(lián)合殺菌試驗(yàn)

＞聯(lián)合殺菌試驗(yàn)所用的方法同前述的時(shí)間-殺菌曲線法。

＞分別測定并繪出兩種藥物對被測菌的單獨(dú)殺菌曲線和聯(lián)合后的殺菌曲線，根據(jù)殺菌曲線判斷聯(lián)合用

藥的結(jié)果。

五、厭氧菌、結(jié)核分枝桿菌及酵母樣真菌的體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)

(一)厭氧菌的體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)

除培養(yǎng)基、操作環(huán)境和培養(yǎng)條件等根據(jù)厭氧菌的特定需要變動(dòng)外，基本原理和方法與需氧菌稀釋法藥

敏試驗(yàn)相同。

(二)結(jié)核分枝桿菌的體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)

＞主要有比例法、絕對濃度法和耐藥率法。

＞直接法是直接采用涂片陽性的標(biāo)本直接藥敏試驗(yàn)，優(yōu)點(diǎn)是可提前2?3周獲得結(jié)果，缺點(diǎn)是易污染雜

菌并且接種菌量亦不好控制。

＞間接法是采用純培養(yǎng)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。目前最常使用的方法是間接比例法。

用制備好菌懸液同時(shí)接種含有抗菌藥物的培養(yǎng)基和不含抗菌藥物的生長對照培養(yǎng)基，如果含有抗菌藥

物培養(yǎng)基上的細(xì)菌生長量超出生長對照培養(yǎng)基上生長量的1%時(shí)即判斷為耐藥。

(三)酵母樣真菌的體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)

1.常量肉湯稀釋法

(1)藥物稀釋：將待測的抗菌藥物用1640培養(yǎng)基進(jìn)行一系列稀釋，分別加入試管內(nèi)，每管0.1ml。

(2)接種菌懸液準(zhǔn)備：挑取5個(gè)直徑21mm的菌落混懸于5ml生理鹽水中，校正至0.5麥?zhǔn)蠞岫取＝?/p>

種前用生理鹽水再稀釋1：100,最后用1640培養(yǎng)基再稀釋10倍。最終接種菌量為lX10J5X10：'CFU/ml。

(3)接種、孵育：將0.9nd的菌懸液接種至各試管中，同時(shí)設(shè)生長對照和陰性對照管，混勻后置35c

孵育48小時(shí)。

(4)結(jié)果判斷：肉眼觀察各管的生長情況。

＞二性霉素B的MIC為抑制測試菌肉眼可見生長的最低藥物濃度

＞5-氟胞口密噬和毗咯類常采用80%MlC判斷標(biāo)準(zhǔn)，即抑制80%檢測菌生長的最低藥物濃度為其MIC。

(5)質(zhì)量控制：標(biāo)準(zhǔn)菌株在與測試菌相同條件下進(jìn)行藥敏試驗(yàn)

六、體內(nèi)抗菌藥物的濃度與活性測定

(一)體內(nèi)抗菌藥物的濃度測定

1.微生物測定法一一瓊脂擴(kuò)散法

分為比濁法、試管稀釋法和瓊脂擴(kuò)散法等一類方法。瓊脂擴(kuò)散法又分多種，其中紙片法簡單易行。

＞針對某一種抗生素應(yīng)選擇對其敏感而盡量對其他藥物耐藥的指示菌；

＞利用直徑6.3mm,吸水量為20ml的濾紙片和該抗菌藥的標(biāo)準(zhǔn)液制成標(biāo)準(zhǔn)藥敏紙片。

＞方法同藥敏試驗(yàn)，每種抗生素至少同時(shí)測定4種濃度，每種濃度至少平行進(jìn)行2組，35℃孵育16~

20小時(shí)，測量抑菌圈直徑

＞以直徑的平均值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)液濃度為縱坐標(biāo)，在半對數(shù)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。被測標(biāo)本按同樣程

序操作，得到抑菌圈直徑后，可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出相應(yīng)的抗菌藥物含量。

2.非微生物測定法

(1)熒光偏振免疫測定法。

(2)高壓液相色譜法。

(3)均相免疫測定法。

(4)放射免疫測定法。

(二)體內(nèi)抗菌藥物的活性測定

>臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室測定體液內(nèi)抗菌藥物活性的方法，有血清抑菌力和殺菌力測定，其原理與肉湯

稀釋法測MIC以及MBC的原理類同。

>一般認(rèn)為血清抑菌力/殺菌力高于1:8或1:16時(shí)，認(rèn)為治療方案有效，如為嚴(yán)重感染，血清抑菌力

/殺菌力應(yīng)高于1:64。

第三節(jié)細(xì)菌的耐藥性和產(chǎn)生機(jī)制

常見抗生素及作用機(jī)制:

作用機(jī)制抗生素

青霉素類、頭狗菌素、單環(huán)內(nèi)酰胺類、碳青酶烯類、

阻斷細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖的合成

糖肽類

結(jié)合細(xì)菌核糖體50s大亞基，抑制蛋白

大環(huán)內(nèi)酯類、林可酰胺類、氯霉素類

合成

結(jié)合細(xì)菌核糖體30s小亞基，抑制蛋白

氨基糖貳類、四環(huán)素類

合成

作用于DNA螺旋酶，抑制DNA合成嗟諾酮類

干擾細(xì)菌氧化還原系統(tǒng)，阻斷代謝硝基吠喃類

競爭結(jié)合二氫葉酸合成酶磺胺類

一、細(xì)菌耐藥的機(jī)制

1.產(chǎn)B-內(nèi)酰胺酶是細(xì)菌對內(nèi)酰胺類藥物耐藥的主要機(jī)制。

2.產(chǎn)生鈍化酶如氨基糖甘類鈍化酶、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶等。

3.青霉素結(jié)合蛋白的改變?nèi)鏜RSA的耐藥機(jī)制。

4.藥敏作用靶位的改變

5.抗菌藥物滲透障礙

(1)外膜蛋白減少

(2)藥物外排作用

二、細(xì)菌耐藥性表型的檢測

1.超廣譜內(nèi)酰胺酶(ESBLs)

(1)超廣譜6-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)常見于肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、大腸埃希菌和奇異變形桿菌。

ESBLs可以水解青霉素一、二、三代頭抱菌素和氨曲南，但頭霉菌素和碳青酶烯類不受影響。

(2)K-B法篩查可選用頭抱叱肪W(wǎng)17mm、頭抱他咤W22mm、頭抱噬月虧W27mll1、氨曲南W27mm、頭抱曲

松W25mm。

確認(rèn)試驗(yàn)：K-B法貼兩組紙片一頭抱他咤、頭抱他咤/棒酸；頭抱嚷的、頭他曝月虧/棒酸，若兩組中任

何一組加棒酸的抑菌環(huán)直徑與相應(yīng)不加棒酸的抑菌環(huán)直徑相差25mm,則判斷此菌為產(chǎn)ESBLs菌株。稀釋法

若兩組中任何一組加棒酸的MIC值比相應(yīng)不加棒酸的MIC值降低3個(gè)以上稀釋倍數(shù)，則判斷此菌為產(chǎn)ESBLs

菌株。

(3)產(chǎn)ESBLs的克雷伯菌屬及大腸埃希菌分離株，臨床上可能對青霉素類、頭胞菌素類及氨曲南治療

無效，即便體外有時(shí)敏感。對所有產(chǎn)ESBLs的菌株應(yīng)當(dāng)報(bào)告為耐所有青霉素類、頭狗菌素類及氨曲南。

2.葡萄球菌屬

(1)MRS對耐甲氧西林的耐藥是由于本身存在的MecA基因編碼的異常PBPs所致。MRS除對甲氧西林

耐藥外，還常常對其他類抗生素耐藥，呈現(xiàn)多重耐藥性。

(2)用頭抱西丁紙片法或稀釋法檢測MRS,頭狗西丁MIC2yg/ml應(yīng)報(bào)告苯噗西林耐藥。

(3)MRS對頭抱菌素和復(fù)合性B內(nèi)酰胺類如阿莫西林/克拉維酸、氨茉西林/舒巴坦、替卡西林/克

拉維酸、哌拉西林/三哩巴坦和亞胺培南可在體外顯示活性但臨床無效，因此不應(yīng)報(bào)告敏感。

3.腸球菌屬

(1)對氨基糖昔類呈耐藥性的腸球菌(HLAR)的測定用高濃度慶大霉素或鏈霉素進(jìn)行高水平耐藥篩選,

可預(yù)測氨芳西林、青霉素或萬古霉素和一種氨基糖苜類的協(xié)同效應(yīng)。

(2)紙片擴(kuò)散法慶大霉素(120ug)、鏈霉素(300yg)判斷生長出菌落為HLAR。

(3)對于腸球菌屬，頭抱菌素、氨基糖苗類(篩選高水平耐藥除外)、克林霉素和磺胺類可在體外顯

示活性，但臨床無效，不應(yīng)報(bào)告敏感。

(4)耐萬古霉素的腸球菌(VRE)獲得性耐藥分兩種表型，VanA和VanB,天然耐藥為VanC型。

判斷：菌落生長為耐藥。

4.肺炎鏈球菌

(1)肺炎鏈球菌對青霉素的耐藥是由于PBP的改變，減低了對B-內(nèi)酰胺類的親和力。

(2)肺炎鏈球菌對青霉素的耐藥性檢查(PRP)采用lug苯喋西林的紙片篩選法。苯喋西林的抑菌圈

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