植物類(lèi)病毒脫除處理規(guī)程_第1頁(yè)
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植物類(lèi)病毒脫除處理規(guī)程4.1.3解剖鏡。4.1.4光照培養(yǎng)箱。4.1.5高壓滅菌鍋。4.1.8分子雜交箱。4.1.9電泳槽。4.2.2容量瓶。4.2.3接種針。4.2.4鑷子。5類(lèi)病毒檢測(cè)方法5.1生物學(xué)檢測(cè)(指示植物法)。5.2往返聚丙烯酰胺凝膠電泳return。5.3RT-PCR方法。5.4核酸雜交方法。6類(lèi)病毒脫除處理程序6.1植株的低溫處理將植株放在2℃~7℃條件下，在光照或黑暗條件下連續(xù)處理6個(gè)月以上。6.2材料剪取與滅菌剪取經(jīng)過(guò)低溫處理的植株莖尖1cm~2cm,自來(lái)水沖洗30min,剝?nèi)ネ饷娴娜~片。將莖尖置于超凈工作臺(tái)上，無(wú)菌條件下進(jìn)行消毒：75%的乙醇浸泡10s.已滅菌的蒸餾水沖洗3次～5次；再用0.1%的升汞浸泡材料，滴人1滴～2滴吐溫，消毒時(shí)間5min~15min,用滅菌的燕餾水沖洗3次～5次，每次5min。將處理過(guò)的材料放入滅菌的培養(yǎng)皿中待用。6.3基尖剝離與接種將經(jīng)過(guò)上一步處理過(guò)的莖尖放在解制鏡下，用已滅菌的解剖刀逐層剝?nèi)ビ兹~，直至出現(xiàn)頂端分生組織，將頂端分生組織和毗鄰的1個(gè)～2個(gè)幼葉原基切下，直立向上接種到適宜的固體培養(yǎng)基上。參見(jiàn)附6.4試管苗類(lèi)病毒檢測(cè)用上述類(lèi)病毒的檢測(cè)方法檢測(cè)試管苗，如果檢測(cè)結(jié)果為陰性則徹步定為脫類(lèi)病毒試管苗，進(jìn)行后期的擴(kuò)繁和生根移裁，如果檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性則不是脫類(lèi)病毒試管苗，需要再進(jìn)一步進(jìn)行類(lèi)病毒脫除處理。6.5試管苗的擴(kuò)繁與生根培養(yǎng)6.5.1試管苗的擴(kuò)繁檢測(cè)結(jié)果為陰性的試管苗可接種到擴(kuò)繁培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖。6.5.2生根培養(yǎng)試管苗長(zhǎng)至3cm~5cm時(shí)轉(zhuǎn)至生根培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。6.6試管苗的馴化將生長(zhǎng)苗壯，有3片～5片葉的試管苗移至溫室進(jìn)行煉苗。6℃~7℃,黑暗條件下，處理時(shí)間為6個(gè)月，剝?nèi)∏o尖heamchdoraricmurrle成在5℃條件下，每天給與16h.⑧RT-PCR方法間為8個(gè)月以上，剝?nèi)∏o失

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