DB1308-T314-2022羊肚菌液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

65.020.20

B05DB1308

承德市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB1308/T314—2022

羊肚菌液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

DB1308/T314—2022

羊肚菌液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了羊肚菌液體菌種生產(chǎn)的生產(chǎn)環(huán)境、前期準(zhǔn)備、操作流程以及各步驟的操作方法指示。

本文件適用于羊肚菌液體菌種生產(chǎn)的過(guò)程管理。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引

用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修

改單）適用于本文件。

本文件沒(méi)有規(guī)范性引用文件。

3術(shù)語(yǔ)和定義

本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

4生產(chǎn)環(huán)境

生產(chǎn)車間環(huán)境整潔，通風(fēng)良好，溫度20℃～23℃，符合安全生產(chǎn)需求。

5前期準(zhǔn)備

5.1制種設(shè)備

由無(wú)菌空氣過(guò)濾系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、冷卻系統(tǒng)、停電保護(hù)裝置、耐高壓罐體等組成。

5.2其他設(shè)備工具

發(fā)酵罐、高壓滅菌鍋﹑磁力攪拌機(jī)、電磁爐﹑顯微鏡、搖床、電子秤、玻璃杯、500ml三角瓶﹑1000

ml燒杯﹑玻璃棒、磁力攪拌子、棉塞、小勺﹑刀、菜板、牛皮紙、繩、pH試紙等。

5.3原料

新鮮土豆﹑葡萄糖粉﹑化學(xué)純磷酸二氫鉀﹑化學(xué)純硫酸鎂﹑化學(xué)純蛋白胨﹑瓊脂粉、100目豆粕粉、

食品級(jí)消泡劑等。

6操作流程

母種擴(kuò)繁培養(yǎng)液制作→發(fā)酵罐準(zhǔn)備→原種制作→檢驗(yàn)→備用。

7操作方法

１

DB1308/T314—2022

7.1母種擴(kuò)繁培養(yǎng)液制作

用燒杯量取1000ml水，放電爐上燒開(kāi)，依次將豆粕5g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g

倒入燒杯中，用玻璃棒不斷攪拌均勻，使其完全溶解。培養(yǎng)液配制好后，裝入500ml三角瓶中，每瓶裝

150ml，加入1顆磁力攪拌子，加棉塞后再包扎牛皮紙封口。在1.5kg/cm2壓力（121℃）下滅菌30min，

取出冷卻到30℃以下時(shí)，接入一塊約2cm2的斜面母種或6～10塊2mm2的斜面母種。于23℃～25℃下靜

置培養(yǎng)48h，再置放到復(fù)式搖床上振蕩培養(yǎng)，振蕩頻率為80～100次/min，振幅6cm～10cm。如果用旋

轉(zhuǎn)式搖床，振蕩頻率為200～220轉(zhuǎn)/min。搖床室溫控制在24℃～25℃，一般7d左右，達(dá)到培養(yǎng)液清澈透

明，液中懸浮著大量小菌絲球，并伴有相關(guān)菇類特有的香味為宜。

7.2發(fā)酵罐準(zhǔn)備

7.2.1清理

發(fā)酵罐在使用之前和使用之后都要進(jìn)行徹底的清洗，洗罐水由罐底排污管道排出。清潔的標(biāo)準(zhǔn)為罐

內(nèi)壁無(wú)懸掛物，無(wú)殘留菌球，排放的水清澈無(wú)污物。清洗完畢后，檢查發(fā)酵罐的各個(gè)部件和控制系統(tǒng)，

合格后方能開(kāi)始工作。

7.2.2滅菌和使用

對(duì)于新的發(fā)酵罐、染菌的發(fā)酵罐、長(zhǎng)時(shí)間不用的發(fā)酵罐要進(jìn)行空消。首先關(guān)閉所有閥門(mén)，打開(kāi)電源

開(kāi)關(guān)，將滅菌開(kāi)關(guān)旋至開(kāi)，打開(kāi)蒸汽至罐內(nèi)部線路所有開(kāi)關(guān)，打開(kāi)過(guò)濾器滅菌線路所有開(kāi)關(guān)，空消壓力

0.1Mpa，溫度119℃，時(shí)間30min?？障Y(jié)束后，將滅菌開(kāi)關(guān)關(guān)閉，逆行關(guān)閉過(guò)濾器滅菌線路開(kāi)關(guān)和蒸

汽線路開(kāi)關(guān)，打開(kāi)排氣線路開(kāi)關(guān)，降壓后開(kāi)罐使用。

7.3原種制作

7.3.1預(yù)熱

加水至視鏡下方第一顆螺釘平齊處，打開(kāi)滅菌開(kāi)關(guān)和夾層進(jìn)出蒸汽線路開(kāi)關(guān)，進(jìn)行預(yù)熱，每隔10min

打開(kāi)進(jìn)氣開(kāi)關(guān)攪拌1min，預(yù)熱至80℃時(shí)開(kāi)始配料。

7.3.2配料

稱取葡萄糖7.5kg﹑豆粕粉1.5kg﹑酵母膏1.5kg﹑磷酸二氫鉀500g、硫酸鎂250g﹑消泡劑600ml~800

ml。將除消泡劑外的原料用罐內(nèi)熱水溶解后加入加料罐，吹入高溫氣體攪拌均勻。等罐內(nèi)水溫達(dá)到90℃

后便可加料。用壓力將混合均勻的營(yíng)養(yǎng)料加入罐內(nèi)，最后加入消泡劑。

7.3.3滅菌

將夾層蒸汽開(kāi)關(guān)關(guān)閉，打開(kāi)罐內(nèi)蒸汽開(kāi)關(guān)。將過(guò)濾器滅菌線路開(kāi)關(guān)打開(kāi)，開(kāi)始升溫滅菌。滅菌溫度

為119℃，壓力0.1Mpa，時(shí)間60min。滅菌結(jié)束后將蒸汽開(kāi)關(guān)和過(guò)濾器滅菌線路開(kāi)關(guān)關(guān)閉。

7.3.4冷卻

打開(kāi)排氣線路開(kāi)關(guān)自動(dòng)降壓至罐內(nèi)壓力為0.03Mpa左右時(shí)，打開(kāi)進(jìn)氣閥門(mén)，并打開(kāi)自來(lái)水和冷卻進(jìn)

排管路的開(kāi)關(guān)，開(kāi)始降溫，直至降溫到培養(yǎng)溫度24℃。

7.3.5接種

２

DB1308/T314—2022

將搖瓶種于接種前放置磁力攪拌器上攪拌12h，待發(fā)酵罐溫度降到培養(yǎng)溫度時(shí)開(kāi)始接種。關(guān)閉進(jìn)氣

閥門(mén)將罐內(nèi)壓力降至排氣管微有氣體排出，關(guān)閉排氣閥。將火焰圈套至接種口點(diǎn)燃，打開(kāi)接種口后，將

進(jìn)氣開(kāi)關(guān)微開(kāi)，使接種口微有氣體排出。將搖瓶在火焰圈的保護(hù)下打開(kāi)瓶口，倒入罐內(nèi)。擰緊接種口蓋

后用濕毛巾熄滅火焰圈。打開(kāi)進(jìn)出氣閥門(mén)，調(diào)節(jié)罐內(nèi)壓力至0.03Mpa進(jìn)入培養(yǎng)階段。

7.3.6培養(yǎng)

培養(yǎng)溫度為24℃，壓力為0.03Mpa，培養(yǎng)5h。培養(yǎng)過(guò)程中每天觀察發(fā)酵罐壓力﹑溫度﹑氣味﹑氣流

量等相關(guān)數(shù)據(jù)并填寫(xiě)培養(yǎng)記錄表。

7.4檢驗(yàn)

7.4.1取樣

發(fā)酵液培養(yǎng)滿3h和5h時(shí)各取樣檢驗(yàn)一次。取樣時(shí)在火焰的保護(hù)下用無(wú)菌瓶接取少量發(fā)酵液，然后

用75％酒精沖洗出料口消毒。所取樣液在超凈工作臺(tái)內(nèi)接種平板和栽培包后涂片鏡檢。

7.4.2感官檢查

7.4.2.1看

將樣品靜置桌上觀察。一看菌液顏色和透明度；二看菌絲形態(tài)和大??；三看上清液與沉淀的比例中

菌絲體占比，第一次檢驗(yàn)菌絲占比≥65%、第二次檢驗(yàn)菌絲占比≥80%為合格。

7.4.2.2旋

手提樣品瓶輕輕旋轉(zhuǎn)一下，觀其菌絲體的特點(diǎn)。醪液的粘稠度高，說(shuō)明菌種性能好；稀薄表明菌球

少，不宜使用。菌絲的懸浮力好，放置5min不沉淀，表明菌種生長(zhǎng)力強(qiáng)；反之，如果菌絲極易沉淀，

說(shuō)明菌絲已老化或死亡。

7.4.2.3嗅

在旋轉(zhuǎn)樣品后，打開(kāi)瓶蓋嗅氣味。培養(yǎng)好的優(yōu)質(zhì)液體菌種，均具有芳香氣味；染雜菌的培養(yǎng)液則散

發(fā)出酸、甜、霉、臭等各種異味。

7.4.3理化試驗(yàn)

7.4.3.1菌絲干重

量取液體菌種10ml，用水分測(cè)試儀烘干至含水量18%，然后稱量菌絲干重。菌絲干重第一次檢驗(yàn)

≥1.5g、第二次檢驗(yàn)≥2g為合格。

7.4.3.2液體粘稠度

將液體菌種置于量筒中，使用比重計(jì)進(jìn)行粘稠度測(cè)量。第一次檢驗(yàn)比重﹥1.0、二次檢驗(yàn)比重≥1.2

為合格。

7.4.3.3pH值測(cè)定

將液體菌種取出后，使用pH值酸度計(jì)進(jìn)行測(cè)量。第一次檢驗(yàn)pH值4.5～4.8、第二次檢驗(yàn)pH值4～4.2

為合格。

３

DB1308/T314—2022

7.4.3.4菌絲活力

將液體菌種菌絲球轉(zhuǎn)接與平板PDA培養(yǎng)基上，28℃恒溫培養(yǎng)24h，菌絲球正常萌發(fā)菌絲為合格。

7.5備用

當(dāng)平板和栽培包所接樣品正常萌發(fā)，鏡檢無(wú)雜菌感染后，液體菌種方可投入使用。使用時(shí)在火焰的

保護(hù)下連接接種管道，接種過(guò)程中罐內(nèi)壓力維持在0.1Mpa。接種結(jié)束后放掉多于菌液，及時(shí)清洗發(fā)酵

罐和接種管道。

_________________________________

４

DB1308/T314—2022

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由承德市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局歸口。

本文件起草單位：平泉市希才應(yīng)用菌科技發(fā)展有限公司。

本文件主要起草人：梁曉生、劉海軍、柳鳳玉、李大港、張晨光、梁希才、梁宏麗、孫彥平、孟凡

飛、劉紹蒼、王彥玲、王帥。

I

DB1309/T56—2011

表D.1無(wú)公害滄州金絲小棗主要病蟲(chóng)害及防治方法（續(xù)）

一、農(nóng)業(yè)措施

冬春掰蟲(chóng)繭，土中挖繭，集中燒毀

二、生物防治

1．秋季和早春

刺蛾類保護(hù)天敵如五齒青蜂、黑小蜂等

2．七月上、中旬-八月中旬

三、化學(xué)防治

建議使用下列藥劑：0.5%甲維鹽、猛拳、速滅殺丁、滅掃利、BT

等

一、農(nóng)業(yè)措施

1.早春1.清理剪口，鏟除雜草，消滅越冬蟲(chóng)卵。

綠盲蝽象2．5月上、中旬-6月中、下2.春季樹(shù)干涂抹粘蟲(chóng)膠。

旬二、化學(xué)措施

建議使用下列藥劑：吡蟲(chóng)啉、啶蟲(chóng)咪、乙酰甲胺磷、殺滅菊酯等。

發(fā)芽前噴布3度～5度（波美）

棗葉壁虱早春發(fā)芽前后石硫合劑，棗股部位噴重些

發(fā)芽期噴乙酰甲胺磷、毒死蜱、敵敵畏等

一、農(nóng)業(yè)措施

1．冬季、早春結(jié)合冬剪刮樹(shù)皮，消滅越冬若蟲(chóng)

棗粉蚧

2．5月上旬-6月上旬二、化學(xué)防治

建議使用下列藥劑如毒死蜱、農(nóng)斯特等

一、農(nóng)業(yè)措施

利用假死性振落捕殺

食芽象甲4月中、下旬-5月中旬

二、化學(xué)防治

建議使用下列藥劑：辛硫磷、乙酰甲胺磷等。

一、農(nóng)業(yè)措施

冬季刮樹(shù)皮，人工捕捉幼蟲(chóng)；利用成蟲(chóng)假死性搖樹(shù)震蟲(chóng)捕殺

六星吉丁蟲(chóng)5月中旬-6月中旬

二、化學(xué)防治

在5、6月份成蟲(chóng)發(fā)生期噴乙酰甲胺磷、滅掃利、農(nóng)斯特防治

一、利用黑光燈或高壓汞燈在棉蛉蟲(chóng)成蟲(chóng)活動(dòng)高峰期開(kāi)燈，誘殺成蟲(chóng)。

二、可利用性誘劑，楊樹(shù)枝把搞好蟲(chóng)情測(cè)報(bào)。

三、抓好防治關(guān)鍵期，突出早、準(zhǔn)、狠的防治特點(diǎn)。棗樹(shù)上抓住第二

棉鈴蟲(chóng)6月中、下旬-7月中旬

代落卵高峰和幼蟲(chóng)孵化高峰期，一般年份在6月20日至25日，

使用藥劑可選擇強(qiáng)殺卵劑辛硫磷、殺幼蟲(chóng)劑0.5%甲維鹽、猛拳等，

提倡發(fā)生盛期連續(xù)2次噴藥防治。

一、農(nóng)業(yè)措施

1．發(fā)芽前后，剪除被害枝集中燒毀

2．利用成蟲(chóng)趨光性強(qiáng)的特點(diǎn)，在6月～7月份成蟲(chóng)盛發(fā)期進(jìn)行

春季發(fā)芽前后

豹紋木蠹蛾黑光燈誘殺

6月-7月份

二、化學(xué)防治

在成蟲(chóng)發(fā)生期建議使用下列農(nóng)藥：滅掃利、乙酰甲胺磷、敵敵畏、

毒死蜱、辛硫磷等

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DB1309/T56—2011

表D.1無(wú)公害滄州金絲小棗主要病蟲(chóng)害及防治方法（續(xù)）