GB-T色素中生物毒素的快速檢測 膠體金免疫快速定量法征求意見稿

ICSXXXX

A21

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/TXXXXX—201X

色素中生物毒素檢測膠體金快速定量法

DetectionofmycotoxininpigmentRapidquantitativemethodof

colloidalgoldtechnique

（征求意見稿）

201X-XX-XX發(fā)布201X-XX-XX實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

中國國家標(biāo)準(zhǔn)1化管理委員會

GB/T××××—201×

GB/T××××—201×

色素中生物毒素檢測膠體金快速定量法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了色素產(chǎn)品中黃曲霉素B1、桔青霉素、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素的膠體金快速定量檢

測方法原理、儀器設(shè)備、試劑和材料、操作步驟、結(jié)果分析。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于色素產(chǎn)品中黃曲霉素B1、桔青霉素、嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮的快速定量檢測。

方法檢出限為：黃曲霉毒素B12.0μg/kg，桔青霉素40μg/kg，玉米赤霉烯酮60μg/kg，

嘔吐毒素500μg/kg。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB5491糧食、油料檢驗扦樣、分樣法

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

3原理

試樣提取液中的生物毒素在層析過程中與檢測試劑條中的膠體金微粒發(fā)生呈色反應(yīng)，顏色深淺與試

樣中生物毒素含量相關(guān)。用讀數(shù)儀檢定檢測條上檢測線和質(zhì)控線顏色深淺，根據(jù)顏色深淺和讀數(shù)儀內(nèi)置

曲線自動計算出試樣中生物毒素含量。

4試劑材料

除另有說明外，所用試劑均為分析純，實驗室用水應(yīng)符合GB/T6682中二級水的要求

4.1黃曲霉毒素B1

純度≥98.0%。

4.2桔青霉素

純度≥98.0%。

4.3玉米赤霉烯酮

純度純度≥98.0%。

4.4嘔吐毒素

純度純度≥98.0%。

4.5苯+乙腈混合液

量取98.0mL苯，加2.0mL乙腈，混勻。

4.6稀釋緩沖液

1

GB/T××××—201×

由膠體金免疫檢測試紙條提供，或根據(jù)產(chǎn)品說明書配制。

4.770％甲醇溶液提取液

取70.0mL的甲醇加水30.0mL，混勻；或由膠體金生產(chǎn)商提供。

4.8PBS緩沖溶液

稱取8.0g氯化鈉、1.2g磷酸氫二鈉、0.2g磷酸二氫鉀、0.2g氯化鉀,用水溶解，調(diào)節(jié)pH至

7.0，用水定容至1000mL。

4.90.1%吐溫20-PBS溶液

準(zhǔn)確移取1mL吐溫20，以PBS緩沖溶液定容至1000mL。

4.100.1%磷酸溶液

準(zhǔn)確移取1mL磷酸，加水定容至1000mL。

4.110.1mg/L的生物毒素標(biāo)準(zhǔn)儲備液

準(zhǔn)確稱取一定量的生物毒素標(biāo)準(zhǔn)品，用苯+乙腈（98:2）溶液（3.4.1）溶解，容量瓶定容至10

mL，配置0.1mg/L的生物毒素標(biāo)準(zhǔn)儲備液，保存于4℃?zhèn)溆茫杀４?年。

5儀器設(shè)備及材料

1.1天平：精度0.01g。

1.2粉碎機：轉(zhuǎn)速不低于3000r/min。

1.3離心機：轉(zhuǎn)速不低于4000r/min。

1.4渦旋振蕩器。

1.5讀數(shù)儀

1.6膠體金免疫層析檢測試紙條：技術(shù)要求見附錄A.

1.7微量移液器：1μL~10μL，10μL~100μL，100μL~1000μL。

1.8免疫親和柱:柱體積6mL,最大柱容量20ng,或等效柱。

2樣品制備

2.1試樣取樣

按照GB5491執(zhí)行

2.2試樣制備

2.2.1固體樣品：取有代表性的固體或樣品500g，其中300g用粉碎機（4.2）粉碎至全部通過20目

篩，混勻，分兩份密封冷凍保存。

2.2.2取一份保存樣品準(zhǔn)確稱取10.0g試樣于50mL具塞錐形瓶中，加入20.0mL試樣提取液，密閉，

2

GB/T××××—201×

用渦旋振蕩器振蕩2min-3min，靜置后用濾紙過濾，或取1.5mL混合液于離心管中，用離心

機離心1min。

取濾液或離心后上清液100μL于另一離心管中，加入1.0mL稀釋緩沖液，充分混勻待測。如

樣品為特殊材料，需將稀釋后的混合液用針頭過濾器過濾，即為待測液

2.2.3液體樣品：液體待測樣品用均質(zhì)器（處理不少于2min）充分混勻后，用微量移液器分別吸取1.0

mL加入2個2.0mL離心管中，一份密封冷凍保存，一份用于檢測。

從待測離心管中吸取200μL液體樣品于另一離心管中，加入2mL稀釋緩沖液（3.3.2），充分

混勻待測。

2.2.4凈化處理：參考國標(biāo)GB5009.222-2016中紅曲及其制品的凈化方法：

將免疫親和柱連接在10mL玻璃針筒下，準(zhǔn)確移取10.0mL上述樣品濾液過免疫親和柱，以1

滴/s~2滴/s的流速全部通過親和柱；加入10mL0.1%吐溫20-PBS溶液，以1滴/s~2滴/s的

流速淋洗柱子,直至空氣進入到親和柱中，棄去全部流出液。準(zhǔn)確加入1.0mL洗脫液進行洗脫,

洗脫流速為1滴/s~2滴/s。收集全部洗脫液于離心管中備用。

注：凈化處理僅針對紅曲紅等對膠體金反應(yīng)結(jié)果產(chǎn)生嚴(yán)重背景干擾的色素產(chǎn)品。

3樣品測定

3.1參考膠體金免疫層析檢測試紙條的儲存要求，如需低溫保存（2~8℃），使用前需將檢測試紙條取出，

室溫放置20~30min。

3.2將放至室溫的膠體金免疫層析檢測試紙條浸入含300-500μL待測溶液的離心管中，或?qū)?00μL

待測溶液加入到檢測孔中。

3.3室溫孵育5min后。

4結(jié)果判定

7.1反應(yīng)結(jié)束后，取出膠體金免疫層析檢測試紙條觀察C線（質(zhì)控線）和T線（檢測線）的顯色情

況。若出現(xiàn)下述情況，視為無效檢測：

a）C線不出現(xiàn)；

b）C線出現(xiàn)，但彌散或嚴(yán)重不均勻；

c）C線出現(xiàn)，但T線彌散或嚴(yán)重不均勻。

7.2選擇讀數(shù)儀的相應(yīng)生物毒素檢測頻道，以目標(biāo)毒素檢測的陽性對照標(biāo)準(zhǔn)樣品,開始樣品測定，

測定需要在2min內(nèi)完成，讀數(shù)儀自動計算并顯示樣品中相應(yīng)生物毒素的含量，單位為微克每千克

（μg/kg）或微克每升（μg/L）。

5重復(fù)性

3

GB/T××××—201×

在重復(fù)性條件下獲得的2次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20％。

附錄A

4

GB/T××××—201×

(規(guī)范性附錄)

膠體金快速檢測試紙條性能要求

A.1準(zhǔn)確性

采用最低檢測限2倍、5倍、8倍濃度水平的實物標(biāo)準(zhǔn)樣品，每個濃度水平測定不低于6次。計算

檢測條檢測結(jié)果與實物標(biāo)準(zhǔn)樣品的偏差，3個濃度水平的偏差均應(yīng)控制在-20％~+20％之間。

A.2精密度

采用最低檢測限5倍濃度水平的實物標(biāo)準(zhǔn)樣品，測定不低于6次，計算檢測條批次內(nèi)變異系數(shù)，變

異系數(shù)