臨床檢驗基礎(chǔ)學(xué)知識點(diǎn)

臨床檢驗基礎(chǔ)學(xué)知識點(diǎn)臨床檢驗學(xué)臨床檢驗醫(yī)學(xué)clinicallaboratorymedicine血液三大尿液常糞便規(guī)體液脫落細(xì)胞學(xué)血型與血庫臨床檢驗醫(yī)學(xué)的定義及研究范圍臨床檢驗醫(yī)學(xué)的發(fā)展史及現(xiàn)狀臨床檢驗基礎(chǔ)教學(xué)的目的學(xué)好臨床檢驗基礎(chǔ)的要求臨床檢驗基礎(chǔ)的發(fā)展史①古代最早是檢測尿液開始的。②17世紀(jì)的顯微鏡的發(fā)明推動了臨床檢驗的發(fā)展。AntonyvanLeeuwenhoek③上世紀(jì)50年代，庫爾特（Coulter）電阻抗原理的提出，使臨床檢驗從手工步入自動化、電腦化，使得檢驗變得簡便、快速、精密度高更。⑤目前，試劑更加批量化、配套化、專業(yè)化和多樣化⑥檢驗液更加重視檢驗方法的標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制，實施全面的質(zhì)量控制和質(zhì)量管理。⑦試劑和儀器的更新使得檢驗更便捷：如床邊檢測(pointofcaretest，POCT），使檢測標(biāo)本更新鮮、交叉污染率低、更接近病人的生理和病理情況。臨床檢驗基礎(chǔ)的現(xiàn)狀（二）：實施與保證全面質(zhì)量管理1.分析前：生理變化、飲食因素、藥物因素、標(biāo)本采集與保存等。2.分析中：檢測方法、儀器設(shè)備性能與質(zhì)量、試劑質(zhì)量等。3.分析后：發(fā)報告的把關(guān)。復(fù)核其信息內(nèi)容如姓名、性別、年齡、住院號、與疾病符合度等。臨床檢驗的特點(diǎn)：1.操作的自動化2.方法的標(biāo)準(zhǔn)化3.技術(shù)的現(xiàn)代化4.試劑的商品化5.計量單位的國際化6.質(zhì)量管理的全程化7.生物安全的嚴(yán)格化8.檢驗人員的合格化緒論臨床檢驗醫(yī)學(xué)的定義及研究范圍臨床檢驗醫(yī)學(xué)的發(fā)展史及現(xiàn)狀臨床檢驗基礎(chǔ)教學(xué)的目的學(xué)好臨床檢驗基礎(chǔ)的要求臨檢的基礎(chǔ)教學(xué)目的:1.疾病診斷和鑒別診斷2.疾病療效監(jiān)測和預(yù)后觀察3.疾病預(yù)防4.科學(xué)研究教學(xué)目標(biāo)：掌握：皮膚采血方法，Hb成分、種類及測定臨床意義。熟悉：血液的組成、理化性質(zhì)和功能，Hb的結(jié)構(gòu)，參考范圍。第一章chapter1血液標(biāo)本采集和血涂片制備bloodcollectionandbloodsmearpreparation血液組成離心后(寫)血液主要理化性質(zhì)①顏色：動脈血——鮮紅色靜脈血——暗紅色血漿——淺黃色高脂膳食——乳白色溶血——血漿呈不同程度紅色②量：成人約占體重的7%～9%，平均血量5L左右。③pH：7.35～7.45④比密：1.05～1.06⑤滲透壓：290～310mosm/Kg·H2O第一節(jié)血液標(biāo)本采集bloodcollection血液標(biāo)本的采集是分析前質(zhì)量控制的重要環(huán)節(jié)一、標(biāo)本采集的一般要求1.檢驗申請單：患者、臨床信息完整2.標(biāo)本采集和處理具體要求：標(biāo)本種類標(biāo)識、采集時間、急診和危重患者信息、3.標(biāo)本信息完整性：標(biāo)本的防腐、保溫等。4.標(biāo)本拒收：根據(jù)標(biāo)本接收的文件不符合者。二、血液標(biāo)本類型1.全血(wholeblood)：靜脈、動脈、毛細(xì)血管2.血漿(Plasma)：全血加入抗凝劑離心后的上清液。3.血清(serum)：血液凝固后離心所得上清液。4.分離或濃縮的血細(xì)胞成分：如血小板、白細(xì)胞、單個核細(xì)胞等。三、血液標(biāo)本采集方法（一）皮膚采血（二）靜脈采血（三）動脈采血（一）皮膚采血法適用于血量＜0.1ml的檢驗項目如RBC計數(shù)、WBC計數(shù)、Plt計數(shù)、Hb、ESR微量法等的測定等。器材：采血針專用的“采血針”或三棱針，用前應(yīng)高壓滅菌，一人一針。專用采血針三棱針采血部位（1）手指采血：WHO推薦采取外周血以左手無名指或中指指采血部位尖內(nèi)側(cè)優(yōu)點(diǎn)：方便、獲較多血量結(jié)果比較恒定缺點(diǎn)：與靜脈血仍存在某些差異。（2）耳垂采血：優(yōu)點(diǎn)：痛感輕、方便、適用于反復(fù)采集缺點(diǎn)：血循環(huán)差受氣溫影響大、檢查結(jié)果不恒定、RBC、WBC、Hb、Hct結(jié)果均比靜脈血高，特別是冬季。（3）其他拇指、拇趾或足跟采血——半歲以下嬰幼兒皮膚完整處——嚴(yán)重?zé)齻卟裳僮?、準(zhǔn)備：2、采血部位按摩：3、消毒皮膚：4、針刺：5、擦去第一滴血后吸血：6、壓住傷口片刻：注意事項（1）采血部位皮膚完整。（2）無菌技術(shù)操作：防采血部位感染，一人一針。（3）采血針刺入皮膚應(yīng)深淺適中。（4）多項檢查時，采血次序為：Plt計數(shù)→RBC計數(shù)、Hb→WBC計數(shù)與分類。（5）取血用于自動化血細(xì)胞分析儀，要防止棉球纖維混入堵塞儀器。第二章chapter2血液一般檢驗bloodgeneralexamination第一節(jié)紅細(xì)胞檢查Redbloodcell(erythrocyte)examination紅細(xì)胞檢查內(nèi)容：RBC是血液中最多的一種血細(xì)胞，其檢查包括紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白測定、紅細(xì)胞形態(tài)觀察、紅細(xì)胞平均指數(shù)計算、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)、紅細(xì)胞沉降率等。形態(tài)：無核，雙凹圓盤形不染色：呈草黃色RBC的生成及破壞：（見PPT）早幼紅細(xì)胞中幼紅細(xì)胞干細(xì)胞原始紅細(xì)胞晚幼紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟紅細(xì)胞一、紅細(xì)胞計數(shù)（redbloodcellcount）【原理（principle）】血液用等滲稀釋液稀釋一定倍數(shù)→滴入血細(xì)胞計數(shù)盤→顯微鏡下計數(shù)一定范圍內(nèi)的RBC數(shù)→換算得每升血液中的RBC數(shù)?！緟⒖挤秶╮ange）】成年女性:（3.5～5.0）×1012/L成年男性:（4.0～5.5）×1012/L新生兒：（6.0～7.0）×1012/L嬰兒：（4.0～4.3）×1012/L兒童：（4.0～4.5）×1012/L【臨床意義（clinicalmeaning）】一、生理性變化(一)生理性增多1.機(jī)體缺氧而使RBC代償性↑：新生兒、高原生活、強(qiáng)烈的體力勞動2.成年男性比女性高：男性在6～7歲時最低，25～30歲時達(dá)高峰。女性21～35歲維持最低水平。3.其他：抽煙、腎上腺素及糖皮質(zhì)激素的應(yīng)用等(二)生理性減少1.生長發(fā)育造血原料相對不足：從6個月至2歲嬰幼兒2.造血功能減退：部分老年人生理性貧血3.血容量增加：妊娠中晚期二、病理性變化(一)病理性增多1.相對增多：血液濃縮2.絕對性增多：①繼發(fā)性增多：如心肺疾?、谠l(fā)性增多：如真性RBC增多癥高于6.8×1012/L應(yīng)采取治療措施(二)病理性減少1.RBC生成減少：※骨髓功能衰竭：AA※造血物質(zhì)缺乏或利用障礙：IDA、MA2.RBC破壞過多：※內(nèi)在缺陷※外在異常3.RBC丟失過多：低于1.5×1012/L應(yīng)考慮輸血二、血紅蛋白測定Hemoglobinmeasurement(一)Hb分子結(jié)構(gòu)及成分：血紅蛋白(hemoglobin，Hb或HGB)是人體有核紅細(xì)胞及網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)合成的含色素輔基的結(jié)合蛋白質(zhì)，由珠蛋白和亞鐵血紅素組成。0.347g鐵相當(dāng)于100gHb;每克Hb可攜帶1.34ml氧。4.其它：①還原Hb：Fe2+②氧合Hb：與O2結(jié)合的Hb③Hb衍生物：HbCO、SHb④高鐵Hb：Fe3+2014年6月17日59P24(二)Hb的測定：ICSH(Internationalcouncilforstandardizationhaematology)推薦氰化高鐵血紅蛋白測定法（HiCN）1.原理:Hb是色素蛋白，在血液中以多種形式存在，利用高鐵氰化鉀將Hb氧化成高鐵血紅蛋白（Hi），Hi可與CNˉ結(jié)合成氰化高鐵血紅蛋白，在540nm處有一吸收峰，用分光光度計測定其吸光度，換算成每升血液中血紅蛋白的含量。方法學(xué)評價（1）氰化高鐵血紅蛋白測定法優(yōu)點(diǎn)：①操作簡單、顯色穩(wěn)定，便于推廣。②轉(zhuǎn)化液較穩(wěn)定，易保存。③除SHb外各Hb均可測讀A后直接計數(shù)。④HiCN參考品可長期保存，便于質(zhì)控。缺點(diǎn)：①KCN劇毒，易污染環(huán)境。②不能測SHb，HbCO轉(zhuǎn)化慢。③濁度高引起Hb濃度假性增高：高球蛋白血癥，脂血，試劑混濁，WBC和Plt高。（2）十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS－Hb）測定法SDS能破壞WBC，摩爾消光系數(shù)未定。（3）堿羥血紅蛋白測定法：HbF不能轉(zhuǎn)化，最大吸收峰在575nm。（4）疊氮高鐵Hb測定法：具有與HiCN法相似的優(yōu)點(diǎn)，但仍存在試劑污染。（5）溴代十六烷基三甲銨血紅蛋白測定法：不破壞WBC，精密度、準(zhǔn)確性略低。2014年6月17日65P254.參考值新生兒：170～200g/L女：110～150g/L男：120～160g/L70歲以上老年人：男：94～122g/L女：87～112g/L質(zhì)量控制（1）血清濁度：（2）器材及試劑質(zhì)量：（3）技術(shù)與操作：（4）廢棄物的處理：臨床意義與RBC計數(shù)相似（1）鑒別貧血類型：IDA：RBC↓Hb↓↓MA：RBC↓↓Hb↓（2）影響檢驗結(jié)果的因素：血液總?cè)萘扛淖內(nèi)硌獫{容量改變教學(xué)目標(biāo)：掌握：血紅蛋白測定的原理、Hb成分、種類及測定臨床意義；網(wǎng)織紅細(xì)胞的形態(tài)、計數(shù)方法及測定的臨床意義。熟悉：血涂片制備與染色、紅細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。了解：Hb測定的方法學(xué)評價。血紅蛋白測定Hemoglobinmeasurement(一)Hb分子結(jié)構(gòu)及成分：血紅蛋白(hemoglobin，Hb或HGB)是人體有核紅細(xì)胞及網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)合成的含色素輔基的結(jié)合蛋白質(zhì)，由珠蛋白和亞鐵血紅素組成。第三節(jié)血涂片制備與染色preparationandstainingofbloodsmears血涂片的制備（一）載玻片和推片：載玻片推片載玻片：清潔、干燥、中性、無油膩。推片：邊緣光滑。（二）血涂片制作：良好血涂片：①血膜至少長25mm。②邊緣整齊，兩側(cè)、兩端留有空隙。③頭體尾分明：細(xì)胞從厚區(qū)到薄區(qū)逐步均勻分布。④血膜末端無粒狀、畫線或裂隙。(三)制備血涂片的影響因素推制適當(dāng)?shù)难そ嵌却?，速度快→太厚，太短推片邊緣不光整→刷尖用力不均→厚薄不勻血量過多、血液粘度高→無尾載玻片有油膩血涂片染色染色就是染料透入被染物并存留其內(nèi)部的過程。1..瑞氏染色法是血液染色最經(jīng)典和最常用的染色法。2.吉姆薩染色法3.瑞氏吉姆薩復(fù)合染色法4.細(xì)胞活體染色法5.巴氏染色法6.蘇木素-伊紅染色法（一）瑞氏染色法（WrightStain）1.瑞氏染料成分：⑴美藍(lán)（又稱亞甲藍(lán)，methyleneblue，M+）通常為氯鹽，氯化美藍(lán)(MCl)，陽離子，一種堿性染料。⑵伊紅（eosinEˉ）：通常為鈉鹽(NaE)，陰離子，一種酸性染料。⑶Wright染料MCl+NaEME+NaCl⑷甲醇（溶劑、固定劑）：①M(fèi)EM++Eˉ②具有強(qiáng)大的脫水力?？蓪⒓?xì)胞固定為一定形態(tài)；使蛋白沉淀為顆粒狀、網(wǎng)狀等結(jié)構(gòu)；增強(qiáng)染色效果；染色原理：物理的吸附作用和化學(xué)的親和作用正常情況染色結(jié)果：外觀：淡紫紅色鏡下：①RBC呈粉紅色，略有碟狀感。②WBC漿中顆粒清楚，并顯示各種細(xì)胞特有的色彩。③細(xì)胞核染紫紅色，核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚。RBC嗜堿性顆粒中性顆粒嗜酸性顆粒3.PH對細(xì)胞染色的影響：PH↓→正電荷增多→易與伊紅結(jié)合→染色偏紅PH↑→負(fù)電荷增多→易與美藍(lán)結(jié)合→偏藍(lán)染色的質(zhì)量保證染液質(zhì)量染色時間與染液濃度染色過程染液的沖洗脫色與復(fù)染4.方法學(xué)評價：瑞氏染色法：優(yōu)點(diǎn)：對于細(xì)胞質(zhì)成分及中性顆粒等的染色可獲得很好的染色效果，缺點(diǎn)：對細(xì)胞核的染色不如吉姆薩染色吉姆薩染色：原理：同瑞氏染色。優(yōu)點(diǎn)：本法對細(xì)胞核染色較好，結(jié)構(gòu)更清晰。缺點(diǎn)：胞質(zhì)和中性顆粒染色較差。瑞-吉復(fù)合染色：取長補(bǔ)短。chapter2血液一般檢查bloodgeneralexamination第一節(jié)紅細(xì)胞檢查Redblloodcellll(erythrocyte)examiinatiion紅細(xì)胞形態(tài)檢查Redblloodcellllmorphollogyexamiinatiion正常紅細(xì)胞形態(tài)正常色素性normochromatic異常紅細(xì)胞形態(tài)紅細(xì)胞大小異常紅細(xì)胞形態(tài)異常紅細(xì)胞血紅蛋白含量異常紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)及排列異常1.RBC大小異常小RBC大RBC巨紅細(xì)胞RBC大小不均d<6umd>10umd>15um直徑相差一倍以上2.RBC形態(tài)異常：球形RBC橢圓形RBC靶形RBC口形RBC鐮形RBC棘形RBC裂片RBC緡錢狀RBC淚滴形RBC3.紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量改變正常色素性normochromatic低色素性高色素性嗜多色性hypochromaticHyperchromaticpolychromaticRBC中出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu)：嗜堿點(diǎn)彩RBC染色質(zhì)小體basophilicstipplingcellHowell-Jolly’sbody有核RBC瘧原蟲卡波環(huán)cabotringnucleatederythrocyteplasmodium六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)Retiicullocytecount1.定義介于晚幼紅和成熟紅細(xì)胞之間未完全成熟的RBC。胞質(zhì)內(nèi)含尚存留多少不等的嗜堿性物質(zhì)RNA，經(jīng)活體染色后，嗜堿性物質(zhì)凝聚成顆粒，其顆粒又可聯(lián)綴成線而構(gòu)成網(wǎng)狀。原紅早幼紅中幼紅晚幼紅網(wǎng)織紅RBC2.分級：I型絲球型：僅存于骨髓II型網(wǎng)型III型破網(wǎng)型：外周血少量IV型點(diǎn)粒型：多見于外周血3.Ret計數(shù)法（1）顯微鏡計數(shù)法【原理】陽離子染料進(jìn)行活體染色，在顯微鏡下計數(shù)?！驹噭竣傩聛喖姿{(lán)N溶液：②煌焦油藍(lán)溶液：【參考值】成人：0.008～0.02或（25～75）×109/L新生兒：0.02～0.06【方法（method）和質(zhì)量控制】1混勻1制成薄血涂片染液新鮮2d血液2d染15~20min數(shù)1000Ret絕對值個RBC中計算出分?jǐn)?shù)=Ret分?jǐn)?shù)×RBC/L的Ret（2）Ret計數(shù)儀法（3）血液分析儀計數(shù)法（4）流式細(xì)胞儀計數(shù)法4.臨床意義（1）Ret增高：表示BM紅系生成旺盛①溶血性貧血：可高達(dá)0.20以上，急性失血后5－10天Ret達(dá)高峰，2周后恢復(fù)正常。②放、化療后，造血恢復(fù)時：Ret可短暫而迅速增高。③Ret可作為貧血治療療效觀察指標(biāo)：※抗貧血藥物治療后1－2天開始高，1周左右達(dá)高峰，貧血愈嚴(yán)重，Ret升高超高，且Ret先于RBC和Hb增高?！关氀幬镏委熀?，Ret不升高，說明治療無效或骨髓造血功能有障礙。④骨髓移植后監(jiān)測造血功能受抑或恢復(fù)：移植后21天，如＞15×109/L，表示無移植并發(fā)癥。如＜15×109/L，且Plt、WBC增高，可能移植失敗。Ret減少：表示骨髓造血機(jī)能減弱。常見再生障礙性貧血：Ret＜0.005絕對值＜15×109/L，為其診斷標(biāo)準(zhǔn)之一?！莆諆?nèi)容：靜脈采血的部位、抗凝劑的使用范圍、HCT定義、臨床意義,ESR定義、影響因素、臨床意義,紅細(xì)胞三個平均指數(shù)的計算及意義?！煜?nèi)容：靜脈采血,抗凝劑,ESR、HCT測定的方法,參考值?！私鈨?nèi)容：采血操作對檢驗結(jié)果的影響，血液標(biāo)本運(yùn)送、保存與處理。靜脈采血法Veinpunctureforbloodcollection凡需血量較多的檢查＞0.2ml如：ESR、Hct、凝血因子的測定等。1.普通靜脈采血法2.真空采血法1.普通靜脈采血法[準(zhǔn)備器材][部位]體表淺靜脈常用：肘部靜脈幼兒可用：頸外靜脈[采血操作和注意事項]真空采血法(負(fù)壓采血法)主要原理是將有膠塞頭蓋的采血管抽成不同的真空度，利用針頭、試管和針筒組合成全封閉的真空采血系統(tǒng)，實現(xiàn)自動定量采血。[主要器材]①雙向采血針②真空采血管穿刺針刺塞針[主要器材]雙向采血針、真空采血管[真空采血法的優(yōu)點(diǎn)]①計量準(zhǔn)確②傳送方便③封閉無菌④標(biāo)識醒目⑤刻度清晰⑥容易保存等。[采血方法]※硬接式雙向采血針的采血操作※軟接式雙向采血針的采血操作穿刺針刺塞針?biāo)?、血液?biāo)本抗凝bloodspecimensanticoagulation抗凝：用物理或化學(xué)的方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固?？鼓齽耗軌蜃柚寡耗痰奈镔|(zhì)。1.乙二胺四乙酸（EDTA）鹽（ethylenediaminetetraceticacid）①原理：與血鈣離子形成螯合物。②用量：15g/LEDTA水溶液0.4ml：5ml血液③適用于：血常規(guī)檢查、Hct、Plt計數(shù)④不適用于：凝血象檢查和血小板功能試驗2.枸櫞酸鈉（trisodiumcitrate）①原理：與血中鈣離子形成可溶性螯合物②用法：109mmol/L與血1：9或1：4③適用于：血栓與止血檢驗、ESR、輸血保養(yǎng)液。④不適用于：血細(xì)胞計數(shù)，Hct(不能干燥)3.肝素（heparin）：①原理：加強(qiáng)AT-III滅活絲氨酸蛋白酶，從而具有阻止凝血酶形成②用量：1g/L水溶液，0.5ml干燥后可抗凝5ml血液。③適用于：RBC脆性試驗、Hct及細(xì)胞培養(yǎng)等。④不適用于：WBC和Plt計數(shù)、血涂片檢查、凝血象檢驗。4.草酸鹽（oxalate）：①原理：草酸根與血液中鈣離子生成草酸鈣沉淀。②用法：0.1mol/L濃度與血液之比1：9③適用于：制備正吸漿。④不適用于：對凝血因子V保護(hù)功能差，影響PT測定；沉淀物影響自動凝血儀的使用。第一節(jié)紅細(xì)胞檢查Redblloodcellll(erythrocyte)examiinatiion四、紅細(xì)胞比容測定紅細(xì)胞比容（hematocrit，Hct或packedcellvolume，PCV）是指在一定體積全血中RBC所占容積的相對比例，與RBC數(shù)量和平均體積有關(guān)。（一）檢測方法1.離心沉淀法：溫氏法、微量血細(xì)胞比容法2.血液分析儀法：（二）溫氏法的試劑、器材和質(zhì)量控制長毛細(xì)滴管溫氏管血漿層白色乳糜層灰紅色層暗紅色層含還原HbHct含氧RBC層(三）方法學(xué)評價]（四）參考值男：0.380～0.508女：0.335～0.450（五）臨床意義1.HCT降低：①各種貧血②稀釋血癥2.HCT增高：①血漿丟失②RBC量增加3.臨床補(bǔ)液量的參考：4.用于計算MCV和MCHC五、紅細(xì)胞平均指數(shù)1.平均紅細(xì)胞容積：(meancorpuscularvolume，MCV)RBC群體中各個RBC體積的平均值。MCV＝×10（fL）1fL=10ˉLRBC/L2.平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量：（meancorpuscularhemoglobinMCH)RBC群體中各個RBC血紅蛋白含量的平均值。Hb(g/L)MCH=RBC/L×10pg1pg=10g3.平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度：(meancorpuscularhemoglobinconcentrationMCHC)平均每升RBC中含有的Hb濃度Hb(g/L)MCHC=Hct4.參考值:MCV(fL)MCH(pg)MCHC(g/L)成人80－10026－34320－3601～3歲79－10425－32280－350新生兒86－12027－36250－3702014-6-17335.臨床意義貧血的形態(tài)學(xué)分類MCV(fL)MCH(pg)MCHC(g/L)病因正常細(xì)胞性貧血80－10027－34320－360急HA、AA單純小細(xì)胞性貧血＜80＜27320－360慢性炎癥小細(xì)胞低色素性貧血＜80＜27＜320IDA大細(xì)胞性貧血＞100＞34320－360MA八、紅細(xì)胞沉降率測定erythrocytesedimentationrateESR（一）定義：指在一定條件下，離體抗全血中的RBC自然下沉的速率。（二）魏氏法的試劑、器材和質(zhì)量控制ESR1h后1.6ml血0.4ml抗凝劑三、ESR影響因素血漿或RBC本身發(fā)生改變則使血沉發(fā)生變化。1.血漿因素：纖維蛋白原球蛋白增高↑ESR加快+-膽固醇白蛋白↓—糖蛋白ESR減慢卵磷脂2.紅細(xì)胞因素：①RBC數(shù)量②RBC形態(tài)ESR快正常數(shù)量數(shù)量減少ESR慢3.抗凝劑影響實驗溫度血沉測定值校正值4.溫度的影響溫度升高，ESR增快5.血沉管因素：血沉管傾斜30，血沉加快30%(四)參考值<50歲男：0~15mm/h女：0~20mm/h（五）方法學(xué)評價(六)臨床意義：對疾病的鑒別和動態(tài)觀察具有一定的參考價值1.生理性增快：①女比男快②妊娠＞3月③＞50歲④婦女月經(jīng)期2.病理性增快：①組織損傷、壞死和大手術(shù)：心肌梗塞和心絞痛鑒別。②惡性腫瘤：良、惡性腫瘤的鑒別。③各種炎癥：急性細(xì)菌感染、風(fēng)濕病活動期、結(jié)核病活動期等。④高球蛋白血癥：MM、SLE、肝硬化、慢性腎炎等。⑤高膽固醇血癥：動脈粥樣硬化、糖尿病等。3.ESR減慢:真性紅細(xì)胞增多癥、RBC形態(tài)異常、低纖維蛋白原血癥等?！锇准?xì)胞檢驗Whitebloodcell(WBC)orLeukocyte(LEC)外周血WBC：RBC＝1：(500～750)（一）白細(xì)胞的組成：WBC單核細(xì)胞monocyte淋巴細(xì)胞lymphocyte粒細(xì)胞granulocyte（中性粒細(xì)胞neutrocyte，NC嗜酸性粒細(xì)胞eosinophil，Eos嗜堿性粒細(xì)胞basophil，Bas）（二）WBC起源及分布粒細(xì)胞的發(fā)育過程如何計數(shù)WBC？白細(xì)胞計數(shù)whitebloodcellcount測定單位體積的外周血（循環(huán)池）中各種白細(xì)胞的總數(shù)?！緳z測原理】血液經(jīng)一定倍數(shù)稀釋并破壞紅細(xì)胞→計數(shù)→換算【試劑】白細(xì)胞稀釋液：2%冰醋酸冰醋酸：溶解紅細(xì)胞，同時固定核蛋白10g/L美藍(lán)：數(shù)滴→可使核略為著色。2014-6-176【器材（equipment）】1、微量吸管：2、血細(xì)胞計數(shù)盤：0.1mm【方法和質(zhì)量控制】11混勻稀釋液血20ul充池0.38ml計數(shù)計算WBC/L＝N/4×10×106×20＝N/20×109血涂片WBC密度與WBC的總數(shù)的關(guān)系WBC血涂片WBC個數(shù)/HP(4～7)×109/L2～4(7～9)×109/L4～6(10～12)×109/L6～10(13～18)×109/L10～124.減少計數(shù)域誤差的措施WBC措施＜3×109/L擴(kuò)大計數(shù)范圍、縮小稀釋倍數(shù)＞15×109/L增加稀釋倍數(shù)、適當(dāng)減少加血量參考值：成人：（4－10）×109/L兒童：（5－12）×109/L6個月－2歲：（11－12）×109/L新生兒：（15－20）×109/L5.方法學(xué)評價：顯微鏡法血液分析儀法二、白細(xì)胞分類計數(shù)Diifferentiialllleukocytecount，DLC(一)定義及方法：根據(jù)白細(xì)胞的形態(tài)進(jìn)行分類計數(shù)，求得各種白細(xì)胞的百分比和絕對值。采血制備良好血涂片染色觀察（二）外周血五種常見白細(xì)胞的形態(tài)①中性粒細(xì)胞②嗜酸性粒細(xì)胞③嗜堿性粒細(xì)胞④單核細(xì)胞⑤淋巴細(xì)胞細(xì)胞胞體胞漿胞核Neud:10～15um較多細(xì)小均勻的桿狀、分2～5葉，染色淡粉紅中性顆粒質(zhì)小塊狀染成深紫紅色Eosd:13～15um充滿粗大、緊密排列的桔紅色嗜酸性顆粒分兩葉，呈八字形也有3～4葉者Basd:10～12um少量粗大小不均，紫黑色嗜堿性顆粒常被顆粒遮蓋，分葉不明顯，模糊不清感CellLymphocyte胞體小d：6－10um大d：10－15um胞漿透明藍(lán)色，有少量粗大，但大小不等的紫紅色顆粒胞核粗糙致密，排列均勻，常隱約成塊。CellMonocyte胞體d：14－20um胞漿淡藍(lán)或灰藍(lán)，毛玻璃樣半透明，含有細(xì)小、粉塵狀紫紅色顆粒胞核大，不規(guī)則,染色質(zhì)細(xì)致、疏松如網(wǎng)狀(三)WBC分類計數(shù)法和質(zhì)量保證：①血涂片制備和染色：②低倍鏡：③油鏡：數(shù)100－200個WBC分類計數(shù)，求出各種WBC所占比值。⑤若有幼稚或異常WBC應(yīng)分類鑒定，包括在WBC百分率中。⑥若有幼稚紅細(xì)胞，應(yīng)逐個計數(shù)，但不包括在WBC總數(shù)中。⑦有寄生蟲和細(xì)胞形態(tài)有異常改變應(yīng)報告。（(四)WBC分類計數(shù)參考值(成人)：WBC百分率(%)中性桿狀核1～5分葉核50～70Eos0.5～5Bas0～1LC20～40MC3～8（五）白細(xì)胞計數(shù)與分類的臨床意義(1)生理變化①年齡：Neu和Lym兩次交叉②日間變化：安靜、休息＜活動、進(jìn)食，早晨＜下午③運(yùn)動、疼痛和情緒的影響：④妊娠與分娩：↑，NC比值正常。分娩2－5天內(nèi)恢復(fù)正常，如再次升高，有產(chǎn)后感染的可能性。（2）中性粒細(xì)胞病理性增多1).反應(yīng)性增多★①急性感染：最常見原因。a.急性化膿性膽囊炎：WBC＞20×109/Lb.急性胰腺炎：WBC＞10×109/Lc.腸缺血、壞死：WBC＞10×109/L，腸壞死的指標(biāo)。d.局限性感染：輕度感染：WBC可正常；中度感染：WBC（10~20）×109/L；重度感染：WBC（20~30）×109/L②嚴(yán)重的組織損傷：③大量血細(xì)胞破壞和急性內(nèi)出血：④非造血系統(tǒng)惡性腫瘤⑤急性中毒：2異常增生性增多：白血?。杭毙裕篧BC（10~50）×109/L；慢性：WBC（100~300）×109/L；類白：WBC＜100×109/L。惡性腫瘤：肝癌、胃癌其他：骨髓增殖性疾病、類風(fēng)關(guān)、自身免疫性疾病、缺氧等。類白血病反應(yīng)：機(jī)體對某些刺激因素所產(chǎn)生的類似白血病表現(xiàn)的血象反映。數(shù)量增多，并可出現(xiàn)幼稚細(xì)胞，但紅細(xì)胞和血小板一般無變化，病因去除后逐漸消失。(3)中性粒細(xì)胞減少①某些感染：傷寒、副傷寒等②某些血液?。孩勐岳砘瘬p傷：藥物、射線等④脾功能亢進(jìn)：⑤自身免疫性疾?。篒TP(六)異常白細(xì)胞形態(tài)1.中性粒細(xì)胞毒性變化：①大小不均②中毒顆粒③空泡形成④杜勒氏體⑤核變性2.棒狀小體（Auerbody)中性粒細(xì)胞毒性變化中性粒細(xì)胞的核象變化①核左移(shifttoleft)：再生性的、退行性的核左移②核右移(shifttoright)中性粒細(xì)胞胞核異常形態(tài)：多分葉核中性粒細(xì)胞雙核中性粒細(xì)胞胞環(huán)形桿狀核中性粒細(xì)胞巨多分葉核中性粒細(xì)胞巨桿狀核中性粒細(xì)胞淋巴細(xì)胞計數(shù)1、淋巴細(xì)胞數(shù)量變化：增多：⑴某些病毒或細(xì)菌所致的急性傳染?、颇承┞愿腥荆孩悄I移植術(shù)后：⑷LC性白血?。孩稍偕系K性貧血、粒細(xì)胞缺乏癥：減少：主要見于接觸放射線及應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素。2、淋巴細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化：⑴異型LC：在傳染性單核細(xì)胞增多癥、病毒性肺炎、流行性出血熱、濕疹、過敏性疾病等病毒性感染或過敏原刺激下，可使淋巴細(xì)胞增生，并出現(xiàn)某些形態(tài)變化。I型漿細(xì)胞型→胞漿中含有小空泡或呈泡沬狀。II型單核細(xì)胞型→胞核不規(guī)則似單核。III型未成熟細(xì)胞型→染色質(zhì)細(xì)致呈網(wǎng)狀排列，可見1－2個核仁。異形淋巴細(xì)胞⑵受放射線損傷后LC形態(tài)變化：衛(wèi)星核⑶LC性白血病時形態(tài)學(xué)變化：課程要求：A.掌握：EOS和PLT計數(shù)的原理、方法、臨床意義B.熟悉：質(zhì)量控制、參考值C.了解：EOS和PLT的來源、功能、計數(shù)方法學(xué)評價※嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophil)計數(shù)㈢EOS的功能A.趨化、吞噬作用B.抑制Bas和肥大細(xì)胞活性物質(zhì)的合成與釋放C.分泌組胺酶破壞組胺，限制超敏反應(yīng)D.參與寄生蟲感染的病理過程㈣EOS計數(shù)方法【原理】用EOS稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)，同時破壞RBC和大部分其它WBC，并將EOS著色，然后滴入細(xì)胞計數(shù)盤中，計數(shù)一定范圍內(nèi)EOS數(shù)，即可求得每升血液中EOS數(shù)?！居嫈?shù)方法】1.顯微鏡計數(shù)法2.血液分析儀法【試劑】EOS稀釋液：伊紅-丙酮稀釋液、乙醇-伊紅稀釋液、溴甲酚紫稀釋液、固綠稀釋液①EOS保護(hù)劑(如丙酮、乙醇）②破壞RBC和大部分其它WBC(如碳酸鉀、草酸銨或低滲狀態(tài))③將EOS著色(如伊紅、溴甲酚紫、固綠)【顯微鏡計數(shù)法操作方法】1混勻1充池計數(shù)：10個大方稀釋液血20μl0.38ml格內(nèi)的Eos計算：Eos=N×20×106/L【質(zhì)量控制】盡量減少人為誤差保護(hù)劑用量混勻不宜太過用力；適當(dāng)延長混勻時間計數(shù)應(yīng)在血液稀釋后1h內(nèi)完成注意與殘留的中性粒細(xì)胞區(qū)別【參考值】（0.05~0.5）×109/L【臨床意義】1．生理變化：①勞動、饑餓、寒冷、精神刺激等Eos減低②日間變化正常人Eos白天較低，夜間較高上午波動較大，下午比較恒定下丘腦垂體前葉促腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)抑制骨髓釋放EOS腎上腺皮質(zhì)激素EOS減少EOS減少2.病理性變化：⑴EOS增多：＞0.5×109/L①寄生蟲?。夯紫x、鉤蟲、絳蟲等②過敏性疾?。捍斡诩纳x病的另一病因，Eos常（1~2）×109/L如：支氣管哮喘、蕁麻疹、藥物或食物過敏、血管神經(jīng)性水腫、過敏性肺炎等③某些皮膚?。簼裾?、剝脫性皮炎、銀屑病等④.血液?。郝?、嗜酸性粒細(xì)胞性白血病等⑤.某些惡性腫瘤：胃癌、肺癌、結(jié)腸癌、何杰金淋巴瘤⑥.某些傳染?。盒杉t熱(乙型溶血性鏈球菌)⑦.某些內(nèi)分泌疾?。耗X垂體功能低下及原發(fā)性腎上腺皮質(zhì)功能不全等(2).EOS減少：傳染病急性期：傷寒、副傷寒嚴(yán)重組織損傷：手術(shù)后應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素或促腎上腺皮質(zhì)激素后垂體或腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)時3.嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)的其他應(yīng)用A.觀察急性傳染病的預(yù)后：急性感染時，嗜酸性粒細(xì)胞減少，恢復(fù)時增高。B.觀察手術(shù)和燒傷病人的預(yù)后：手術(shù)后4小時，嗜酸性粒細(xì)胞減少，24～48小時后增多；大面積燒傷的病人，數(shù)小時后嗜酸性粒細(xì)胞完全消失。C.測定腎上腺皮質(zhì)功能：血小板(platelet)計數(shù)血小板出血一、概述血小板（一）形態(tài)：胞體：圓形、橢圓形或不規(guī)則形胞質(zhì)：淡藍(lán)色或粉紅色，中心部位有細(xì)小的紫紅色顆粒，無核，常3～5成群聚集成團(tuán)壽命：7~14天造血干細(xì)胞（二）來源：原始巨核細(xì)胞骨髓巨核細(xì)胞幼稚巨核細(xì)胞顆粒型巨核細(xì)胞產(chǎn)血小板巨核細(xì)胞裸核巨核細(xì)胞血小板（三）功能主要功能：粘附、聚集、釋放、參與凝血和血塊收縮、維護(hù)血管內(nèi)皮完整等功能。二、計數(shù)不明原因的出血排除出血性疾病化療和放療病人的檢測懷疑骨髓造血系統(tǒng)疾病懷疑血小板破壞增加、消耗過多或反應(yīng)性增多檢測原理方法原理檢測原理方法原理普通顯微鏡直接計數(shù)法破壞紅細(xì)胞—溶血法和不破壞紅細(xì)胞法相差顯微鏡直接計數(shù)法相差顯微鏡下血小板立體感增強(qiáng)血液分析儀法電阻抗法和光散射法流式細(xì)胞儀法免疫法熒光素標(biāo)記血小板特異性抗體，流式細(xì)胞儀計數(shù)【原理】血液經(jīng)一定比例稀釋后，滴入計數(shù)池，在顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的血小板數(shù)，經(jīng)換算求出每升血液中血小板的數(shù)量?！驹噭坎菟徜@溶血法、復(fù)方尿素溶血法、高鐵氰化鉀法、復(fù)方碘法等?！静僮鞣椒ā炕靹蜢o置15min稀釋液充池計數(shù)1ml血10μlPLT/L＝N×10×100×106＝N×109【質(zhì)量控制】原則：盡量避免PLT被激活、破壞，避免雜質(zhì)污染。檢測前：采血順利抗凝劑：肝素、EDTA-K2儲存溫度和時間檢測中：器材標(biāo)準(zhǔn)化，清潔干燥充池前充分搖勻，充池后靜置15min后計數(shù)1h內(nèi)計數(shù)完畢計數(shù)時光線要適中；注意與雜質(zhì)鑒別檢測后：PLT計數(shù)＜60×109/L，應(yīng)觀察血涂片中的PLT分布情況?！緟⒖贾怠浚?00～300)×109/L【臨床意義】1.生理性變化：①正常人晨間較低，午后略高；春季低、冬季略高；平原居民低，高原居民略高。②婦女月經(jīng)前低，月經(jīng)后上升；妊娠中晚期升高，分娩后1～2天降低。③劇烈活動和飽餐后高、休息后恢復(fù)。2.病理性變化：PLT數(shù)減低：小于100×109/L（20～50)×109/L：輕度出血或手術(shù)后出血低于5×109/L：導(dǎo)致嚴(yán)重出血①PLT生成減少：AA、AL、惡性腫瘤放化療后等②PLT破壞過多：ITP、脾亢③PLT消耗過多：DIC、血栓性血小板減少性紫癜等④PLT分布異常：脾腫大⑤先天性的PLT減少：PLT減少癥、巨大PLT綜合征血小板數(shù)增多：＞400×109/L原發(fā)性增多：CML；真紅反應(yīng)性增多：急性化膿性感染；急性出血；脾切后異常血小板形態(tài)1、大小異常①大血小板：d4～7μm②小血小板：d＜1.5μm2、形態(tài)異常：①血小板顆粒減少②血小板衛(wèi)星現(xiàn)象③血小板“粘附”紅細(xì)胞3、聚集性和分布異常：非抗凝血外周血涂片中?？梢?～5個聚集成簇，聚集與散在血小板之比為20：1復(fù)習(xí)題1.顯微鏡下計數(shù)EOS的區(qū)域是（）EA.一側(cè)計數(shù)室，四角四個大方格B.一側(cè)計數(shù)室，對角兩個大方格C.兩側(cè)計數(shù)室，對角共四個大方格D.兩側(cè)計數(shù)室，四角共八個大方格E.兩側(cè)計數(shù)室，共十個大方格2.外周血中EOS增高見于（）DA.風(fēng)疹感染期B.傳染性單核細(xì)胞增多癥感染期C.百日咳感染期D.猩紅熱感染期E.流行性腮腺炎感染期3.可引起EOS數(shù)量增高的一組疾病是（）DA.鉤蟲病，急性化膿性膽囊炎B.急性失血，肺癌C.蕁麻疹，心肌梗死D.支氣管哮喘，猩紅熱E.嚴(yán)重外傷，肝吸蟲病4.血小板減少是指血小板數(shù)量小于（）BA.80×109/LB.100×109/LC.110×109/LD.120×109/LE.150×109/L5.血小板破壞過多見于（）DA.急性白血病B.急性放射病C.急性溶血后D.原發(fā)性血小板減少性紫癜E.血栓性血小板減少性紫癜6.將20μl血液加入0.38ml血小板稀釋液中，計數(shù)5個中方格血小板數(shù)為78個，問每升血液中血小板是多少？判斷血小板是增高還是降低了，并簡述可能的病理原因？7．簡述嗜酸性粒細(xì)胞增高的原因有哪些？血型和輸血(一)重點(diǎn)難點(diǎn)：血型定義、ABO系統(tǒng)抗原、抗體、血型物質(zhì)、血型鑒定、交叉配血熟習(xí)內(nèi)容：ABO系統(tǒng)的亞型第一節(jié)血型血型（bloodgroup）是指血液系統(tǒng)的一種遺傳多態(tài)性，它是以血型抗原為表現(xiàn)形式的遺傳性狀，血型由血型基因決定，是血細(xì)胞的主要特征之一。血型系統(tǒng)有很多，常見的有ABO血型系統(tǒng)、Rh血型系統(tǒng)，此外還有Kidd血型系統(tǒng)、MNSs血型系統(tǒng)等。一.ABO血型系統(tǒng)（一）抗原1.ABO抗原的遺傳：由ABO、Hh、Sese三個分離位點(diǎn)的基因所控制ABO基因：①ABO基因位于9q34，基因座上有A、B、O，A、B基因?qū)τ贠基因是顯性基因。②父母各遺傳給子代一個基因。③有6個基因型，4種表現(xiàn)型ABO基因型表型RBC上抗原血清中抗體血型AO、AAAA抗BABO、BBBB抗ABABABAB—ABOOO—抗A、BO8.ABO抗原的生物合成：基因ABO及H基因控制著A、B抗原的形成。O為無效基因；H位點(diǎn)有Hh兩個等位基因，h為無效基因。ABH血型抗原決定簇的前身物質(zhì)是紅細(xì)胞膜上含4個糖的低聚糖鏈，由各自的糖基轉(zhuǎn)移酶作用決定抗原物質(zhì)的形成。9（1）前身物質(zhì)：4個糖的低聚糖鏈（2）H物質(zhì)：基因H→巖藻糖轉(zhuǎn)移酶→H抗原（3）A抗原：TheAAntigen基因A→酶A：N-乙酰半乳糖氨基轉(zhuǎn)移酶→A抗原（4）B抗原：基因B→酶B：半乳糖基轉(zhuǎn)移酶→B抗原（5）h基因：如體內(nèi)僅有h基因，則不能合成巖藻糖轉(zhuǎn)移酶，所以無H物質(zhì)，表現(xiàn)型為O型，稱為Oh型（孟買型）h基因RBC膜上含4個Oh型(孟買型)糖的低聚糖鏈O基因H物質(zhì)RBC膜上含4個糖的低聚糖鏈A基因H基因A抗原H物質(zhì)基轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)移酶B基因B抗原)基轉(zhuǎn)移酶N-乙酰半乳糖胺N--acetylGlucosamineD-GalactoseAN-乙酰葡萄糖胺H.ABO抗原的發(fā)生：（1）5～6周胎兒RBC可測出ABH抗原→出生時還未發(fā)育完全。（2）新生兒A、B抗原位點(diǎn)較成人少（3）一般出生后18個月時才充分表現(xiàn)出抗原性。（4）抗原頻率也有地區(qū)、種族差異。4.分泌型：血型物質(zhì)：組織細(xì)胞也能合成分泌可溶性的ABH抗原→存在于許多體液中。以唾液中含量最豐富，CSF中無。⑴分泌型：體液中含有這種血型物質(zhì)者為分泌型→80%人受控基因是Sese、SeSe⑵非分泌型：無血型物質(zhì)者→約20%人受控基因是sese、se是無效基因。⑶血型物質(zhì)的作用：①輔助鑒定血型②預(yù)測胎兒ABO血型：羊水③可中和天然抗體，有助于鑒別抗體的性質(zhì)。5ABO系統(tǒng)抗體：1.抗A、抗B抗體：主要是IgM天然抗體：機(jī)體沒有經(jīng)過可察覺的Ag刺激就在體內(nèi)存在的Ab.人血清中存在的Ab能天然地與其自身RBC所缺乏的A、B抗原相對應(yīng)→血型定型的依據(jù)。產(chǎn)生：人在出生前尚未產(chǎn)生Ab，生后幾個月才開始形成自已的Ab，5－6歲時達(dá)高峰，產(chǎn)生Ab的功能一直延續(xù)到生命的晚期，但成人后，效價隨年齡增長而逐漸↓。免疫抗體：通過輸注異型抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體，IgG6.抗體特性：.抗A、B抗體：O型人血清中；與A型或B型RBC都能凝集。7.ABO系統(tǒng)的亞型：亞型：是指屬于同一血型Ag，但Ag結(jié)構(gòu)和性能或Ag位點(diǎn)數(shù)有一定差異所引起的變化。㈠A亞型：最多見，有A1、A2，A3，AX，我國人中A2和A2B型在A與AB型中所占比例＜1%A2的抗原性弱，定型時很可能誤認(rèn)為O型㈡B亞型：較A亞型少見，臨床意義不大。（五）.ABO血型鑒定（ABObloodtyping）【原理（principle）】正定型：用已知標(biāo)準(zhǔn)抗血清檢測RBC上的抗原。反定型：用已知RBC測血清中的抗體?！驹噭╮eagent）】1.標(biāo)準(zhǔn)抗A、抗B、抗AB血清：制備：青壯年混合血清，無菌分離，56℃30min滅活標(biāo)準(zhǔn)：①特異性：不含意外Ab，無非特異性凝集。②效價：抗A：1:128以上;抗B：1:64以上。③親和力：血清0.05ml+10%RBC0.1ml→15S內(nèi)出現(xiàn)凝集，3min凝塊≥1mm2。④冷凝集素：冷凝集素效價＜1:4。2.ABO血型單克隆抗體:①特異性：能凝集A1、A2抗原。②親和力：對A1、A2、A2B分別為15s、30s、45s③凝效價：大于1：128。④穩(wěn)定性：較血清抗體好?！痉椒ǎ╩ethod）】1.玻片法2.試管法1.玻片法：（正定型）【ABO血型的臨床意義】1.輸血2.新生兒溶血病檢查3.器官移植4.其他用途：親緣鑒定、可疑血跡、精斑、毛等的鑒定及相關(guān)疾病的調(diào)查等（六）.交叉配血交叉配血實驗是在血型鑒定的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步檢查受血者和供血者血液中是否含有不相配的抗原和抗體成分的試驗。交叉配血試驗受血者不產(chǎn)生凝集或溶血時，方主側(cè)可將供血者的血液或血液次成分給受血者輸注。供側(cè)血者目的：是在血型鑒定的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步檢測受血者和供血者血液中是否含有不配合的成分。33實驗方法1.鹽水介質(zhì)配血2.聚凝胺介質(zhì)配血3.微柱凝膠法配血4.酶介質(zhì)配血菠蘿酶，無花果酶，木瓜酶5.抗球蛋白介質(zhì)配血1.鹽水介質(zhì)交叉配血試驗【原理】主要檢查：①供受者血清中中是否存在破壞對方RBC的不規(guī)則IgM抗體或補(bǔ)體依賴性RBC抗體。②驗證ABO血型鑒定是否正確，防止發(fā)生急性溶血反應(yīng)?！驹噭┖推鞑摹可睇}水報告方式：1.受血者XXX(X型)血清＋供血者XXX(X型)紅細(xì)胞凝集溶血與否2.供血者XXX(X型)血清＋受血者XXX(X型)紅細(xì)胞凝集溶血與否3.受血者XXX與供血者XXX配血是否相合。4.實驗方法：鹽水介質(zhì)交叉配血法2.低離子聚凝胺介質(zhì)交叉配血試驗【原理】RBC表面帶有大量的負(fù)電荷，以避免其產(chǎn)生自發(fā)性聚集凝聚胺溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中和RBC表面帶有的負(fù)電荷→縮短RBC之間距離，使RBC產(chǎn)生非特異性凝聚。利用低離子溶液，降低介質(zhì)的離子強(qiáng)度，以促進(jìn)RBC和抗體結(jié)合。加入重新懸浮液能中和凝聚胺陽離子的作用，使正常的RBC非特異性凝集散開。而RBC被相應(yīng)的抗體致敏，則不會散開。3.微柱凝膠介質(zhì)交叉配血試驗【原理】利用抗原抗體特異性反應(yīng)的作用→通過離心技術(shù)→利用凝膠的微孔過濾作用，將發(fā)生凝集反應(yīng)的RBC阻滯于凝膠之內(nèi)，而未凝集的單個RBC則穿過微孔運(yùn)動至柱底→從而區(qū)分有無凝集。【結(jié)果判斷】陽性結(jié)果：主次側(cè)或單側(cè)管內(nèi)RBC凝集塊位于凝膠表面或凝膠中，和(或)出現(xiàn)溶血→不相容→不可輸注反應(yīng)強(qiáng)度：①特異性RBC抗原抗體復(fù)合物位于膠表面→強(qiáng)陽性反應(yīng)②復(fù)合物在膠中→弱陽性反應(yīng)愈靠近膠底部凝集，顆粒愈小，反應(yīng)愈弱。陰性結(jié)果：主次側(cè)管內(nèi)RBC完全沉降于底部→相容→輸注重點(diǎn)內(nèi)容：Rh血型抗原與抗體及臨床意義；新生兒溶血??；血液保存方法；主要的血液成分制品及適應(yīng)癥。熟習(xí)內(nèi)容：Rh血型鑒定方法；獻(xiàn)血員條件和發(fā)出要求獻(xiàn)血后并發(fā)癥；輸血后的不良反應(yīng)及并發(fā)癥。了解內(nèi)容：成分輸血的優(yōu)點(diǎn)；自身輸血。二.Rh血型系統(tǒng)Rh系統(tǒng)重要性僅次于ABO系統(tǒng)。㈠.Rh抗原：①Rh抗原有40多種，②與臨床關(guān)系最密切：D、E、C、c、e5種，D的抗原性最強(qiáng)。③臨床習(xí)慣地稱含D抗原的RBC為Rh＋，不含D的為Rh－。④我國Rh－頻率約占人群中的0.34%㈡.Rh系統(tǒng)抗體：①多是通過外來RBC免疫刺激后產(chǎn)生，即通過輸血或妊娠產(chǎn)生。這些抗體均為IgG。②D抗原是非ABO紅細(xì)胞抗原中免疫性最強(qiáng)的抗原，可以引起抗D的產(chǎn)生，抗D與D紅細(xì)胞產(chǎn)生嚴(yán)重的溶血反應(yīng)。㈢.Rh血型鑒定及方法學(xué)評價：Rh抗體屬IgG不能在鹽水介質(zhì)中與RBC發(fā)生凝集。1.低離子強(qiáng)度鹽水試驗原理：降低介質(zhì)的離子強(qiáng)度→可減少RBC外圍的離子云①促進(jìn)IgG分子在兩個RBC之間搭橋→使之結(jié)合，②能縮短抗原與抗體的反應(yīng)時間，并提高其靈敏度。2.抗人球蛋白法：又稱Coombs試驗P81直接法：用于檢查受檢者的RBC是否已被不完全抗體致敏；間接法：可用于鑒定Rh血型及血清中是否存在不完全抗體。P813.酶介質(zhì)法：原理：①木瓜酶或菠蘿酶可以破壞RBC表面的唾液酸，使RBC膜失去電荷，縮小RBC間的距離；②酶可以部分地改變RBC結(jié)構(gòu)，使某些隱蔽的抗原得以暴露，增強(qiáng)凝集性4.聚凝胺法：帶有高價陽離子，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中和RBC表面的負(fù)電荷。本法已在實踐中逐漸推廣。5.人源鹽水介質(zhì)抗D試驗：采用免疫蛋白變性劑(如二硫蘇糖)處理人源IgG類抗D血清，使小分子的IgG抗體分子增大為具有大分子的“IgM”的性質(zhì)，能在鹽水介質(zhì)中與相應(yīng)紅細(xì)胞發(fā)生凝集，可用于Rh血型的快速鑒定。㈣.RH血型的臨床意義：1.與輸血關(guān)系：Rh－第一次接受Rh＋血液→不溶血，產(chǎn)生抗體－＋Rh第二次接受Rh血液→產(chǎn)生大量的抗體，溶血2.與新生兒溶血病的關(guān)系：第二節(jié)新生兒溶血?。╤emolyticdiseaseofnewborn)一.定義母嬰血型不合，孕母體內(nèi)IgG類血型抗體通過胎盤進(jìn)入體內(nèi)，胎兒RBC被母親的同種抗體包被(這種抗體是針對胎兒RBC上父源性的抗原的)，被包被的RBC在分娩前后加速破壞，發(fā)生溶血，造成胎兒發(fā)生以溶血為主要損害的一種被動免疫性疾病。二.臨床表現(xiàn)：①貧血：Hb＜180g/L②高膽紅素血癥：342umol/L或更高：③肝脾腫大：④組織水腫：⑤肌張力降低：三.發(fā)病機(jī)制：種類母親胎兒溶血嚴(yán)溶血發(fā)生發(fā)病率血型血型重程度胎次ＡＢＯ溶血癥O型A或B型較嚴(yán)重第一胎即可發(fā)病最常見Rh溶一般第一胎不發(fā)－＋病，而從第二胎血病RhRh嚴(yán)重起發(fā)病較低三.實驗室檢查：1.患嬰確診的依據(jù)：①RBC直接抗人球蛋白試驗陽性：②釋放試驗：③血清中存在與患嬰RBC上抗原相對應(yīng)的游離抗體2.輔助檢查：①高膽紅素血癥：②孕母血清內(nèi)檢查到與胎兒RBC不相合的抗體3.產(chǎn)前試驗：①血清學(xué)檢查：ABO血型系統(tǒng)Rh血型系統(tǒng)②羊水分析：四、預(yù)防與治療（一）產(chǎn)前治療對象1.ABO血型不合：一般無必要預(yù)防，但抗A或抗B效價超過64時，可給予預(yù)防。2.Rh血型不合：一般也無需特殊預(yù)防，當(dāng)Rh抗體較高時，有必要降到8以下。（二）產(chǎn)前治療方法1.藥物治療：大量丙球治療。2.血漿置換3.宮內(nèi)輸血4.剖宮產(chǎn)（三）新生兒治療1.換血2.丙球、白蛋白、激素等藥物治療。3.光照療法第二節(jié)輸血（tansfusion）一.輸血1.輸入自然的血液成份，以達(dá)到治療的目的。2.輸入現(xiàn)代生物技術(shù)生產(chǎn)的與血液相關(guān)的制品。3.血液成份可以根據(jù)需要先在體外對血液進(jìn)行處理后再輸入。4.利用某些手段將患者血中病理成份加以去除。二.血液的采集：1.獻(xiàn)血員的要求：①18-55周歲，身體健康，無傳染病，無貧血者，均可獻(xiàn)血。②采血前要做體格檢查、測Hb、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、HBsAg等，合格后方可獻(xiàn)血。③采血前要做好血型鑒定。④獻(xiàn)血員在獻(xiàn)血前4h不得吃富含脂肪及蛋白質(zhì)的食物。2.采集：3.獻(xiàn)血并發(fā)癥①貧血：健康成人每3個月獻(xiàn)血一次，每次不超過400ml是不會發(fā)生貧血的。②空氣栓塞：少于30ml，多可好轉(zhuǎn)。③暈厥：④血腫：三.血液的保存：㈠.RBC的儲存損傷：發(fā)生一系列生物化學(xué)與結(jié)構(gòu)上的變化。㈡.抗凝劑：①枸櫞酸鹽：基本抗凝物質(zhì)。可被身體所代謝，又可阻止溶血②肝素：必須在采血后48h內(nèi)輸入。缺乏支持RBC代謝的能力，又可被中和。㈢.血液保存液：具有抗凝、保護(hù)細(xì)胞生存能力及功能的作用。1.主要成份：①枸櫞酸鹽：抗凝②葡萄糖：RBC代謝所必需的營養(yǎng)成份③磷酸鹽和腺嘌呤：合成ATP的原料→補(bǔ)充ATP2.種類：①枸櫞酸鈉：適用于現(xiàn)抽現(xiàn)用。4℃保存≤5天②ACD保存液：枸櫞酸鈉、枸櫞酸、G?！?1天③CPD保存液：再加磷酸鹽和腺嘌呤?！?5天④肝素：主要用于新生兒溶血病換血或體外循環(huán)。1～2天㈣儲血質(zhì)量鑒定：正常：在自然光或日光燈下，以眼睛觀察庫存血液，血漿呈帶草黃色，半透明，RBC層呈暗紅色，不含在血凝塊，交界面呈灰白色，無溶血環(huán)。不正常：1.氣泡進(jìn)行性增加。2.血漿層有絮狀物，色澤暗淡而混濁。3.細(xì)胞層與血漿層分界不清或有溶血。4.RBC層中有在血凝塊或呈泥狀紫紅玫瑰色。5.封口不嚴(yán)、標(biāo)簽不清以及開封后有臭味等。四.發(fā)血：1.憑病歷或提血單發(fā)血，并仔細(xì)查對：病歷或提血單、配血報告單及血袋標(biāo)簽三者相符合2.血液質(zhì)量良好。3.注意事項：①查對無誤后，發(fā)血者與取者共同簽名②保存期長者一般先發(fā)③發(fā)血后，配血標(biāo)本至少須保留24h，最好1周。五.輸血㈠全血輸注：①需補(bǔ)充RBC和血容量時②需進(jìn)行體外循環(huán)的手術(shù)時③換血㈡成分輸血：將血液的各種成分分開，加工制成高濃度的血液成分制品，根據(jù)病情需要，缺什么輸給什么，叫成分輸血。1.備制方法：①塑料袋離心沉降的方法②細(xì)胞單采儀器2.成分輸血優(yōu)點(diǎn)：①提高療效。②減少反應(yīng)。③合理使用。④經(jīng)濟(jì)，既可節(jié)省寶貴的血液又可減少經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。3.成分輸血種類：①紅細(xì)胞輸注②粒細(xì)胞輸注③血小板輸注④血漿及血漿蛋白制品的臨床應(yīng)用血漿、血漿白蛋白、免疫球蛋白、凝血因子?紅細(xì)胞制品：1．少漿血：從全血中移出部分血細(xì)胞壓積約為50%。2．濃縮紅細(xì)胞：其紅細(xì)胞壓積為70-90%，紅細(xì)胞壓積在80%以上者輸注時應(yīng)加生理鹽水調(diào)節(jié)。3．代漿血或晶體鹽紅細(xì)胞懸液：移去大部血漿用代血漿或晶體鹽溶液保存，其優(yōu)點(diǎn)既可補(bǔ)充紅細(xì)胞與血容量，又可因去除血漿而減少不良反應(yīng)，血漿留做它用。4．洗滌紅細(xì)胞：用生理鹽水洗紅細(xì)胞3-6次，使其血漿蛋白含量極少，可降低輸血不良反應(yīng)，同時由于除去絕大數(shù)的抗A、抗B抗體。在必要時，可把洗滌O型紅細(xì)胞輸給其它血型患者則比較安全。5．少白細(xì)胞的紅細(xì)胞：除去白細(xì)胞可減少由白細(xì)胞引起的不良反應(yīng)，現(xiàn)在有專門除去白細(xì)胞的濾器，可在輸血時應(yīng)用。6．其它：冰凍紅細(xì)胞。?粒細(xì)胞輸注白細(xì)胞主要適應(yīng)證有：①用于治療：當(dāng)患者白細(xì)胞少于0.5×109/L，有嚴(yán)重細(xì)菌感染而經(jīng)抗生素治療24-48小時，無效時，治療時應(yīng)給輸注大劑量的白細(xì)胞，并至少連續(xù)輸數(shù)天，才可能有效。②用于預(yù)防：當(dāng)治療白血病或骨髓移植后引起粒細(xì)胞缺乏癥時，輸白細(xì)胞可能降低合并嚴(yán)重感染的危險，但引起副作用的弊病可能更大，故除非在嚴(yán)密觀察下，不宜采取這種預(yù)防措施；③新生兒敗血病，特別是早產(chǎn)兒，由于粒細(xì)胞的趨化性、殺傷力均較弱，故易發(fā)生感染。?血小板輸注：輸血小板的適應(yīng)證：①血小板減少：決定于血小板數(shù)與出血程度，一般血小板數(shù)<20×109/L并合并出血時應(yīng)給輸血小板。②血小板功能異常：如血小板無力癥、血小板病、巨大血小板綜合癥。藥物或肝腎功能引起的血小板功能異常等患者。?血漿及血漿蛋白制品的臨床應(yīng)用：血漿：適用于：A.凝血因子缺乏B.肝功能衰竭C.抗凝治療血漿白蛋白：適用于：補(bǔ)充血管內(nèi)或血管外白蛋白缺乏免疫球蛋白：預(yù)防傳染??；代替異種血清制品；免疫缺陷凝血因子制品：各種凝血因子缺乏㈢自身輸血方式：1.保存式自身輸血2.稀釋式自身輸血3.手術(shù)中回收自身輸血優(yōu)點(diǎn)：1.避免由輸血傳染疾??；2.避免血型抗原等引起的同種免疫；3.避免由免疫作用引起的過敏反應(yīng)；4.自身輸血者由于反復(fù)放血，刺激紅細(xì)胞再生；5.為無條件供血的地提供血源。六.輸血不良反應(yīng)和輸血傳播性疾?。?.輸血不良反應(yīng)：①發(fā)熱②過敏③細(xì)菌污染④溶血⑤大量輸血的副作用2.輸血傳播性疾?。孩俑窝注诎滩、劬藜?xì)胞病毒④瘧疾⑤梅毒⑥其他：EB病毒感染、黑熱病等。一、概述血液分析儀發(fā)展史：50年代：RBC、WBC計數(shù)60年代：增加Hb濃度、HCT、平均RBC體積等70年代：增加PLT計數(shù)80年代：雙通道儀器90年代：多功能、多參數(shù)、多分類，全自動RET、RDW、MPV、PDW、PCT、大PLT比率，提示異常淋巴細(xì)胞和幼稚細(xì)胞，WBC分類從三分群到五分類分類：半自動三分群①②全自動五分類特點(diǎn)：多參數(shù)分析操作簡便、高度自動化精密度高速度快較強(qiáng)的質(zhì)控功能智能化基本結(jié)構(gòu)：機(jī)械系統(tǒng)：進(jìn)樣針、稀釋器、混勻器、真空泵等電學(xué)系統(tǒng)：血細(xì)胞檢測系統(tǒng)：血紅蛋白測定系統(tǒng)：計算機(jī)和鍵盤控制系統(tǒng)等檢測原理電阻抗法電學(xué)檢射頻電導(dǎo)法測染色原激光散射法理非染色光學(xué)分光光度法1、電阻抗法：P93※Coulter原理：懸浮在電解質(zhì)稀釋液中的血細(xì)胞經(jīng)負(fù)壓吸引通過傳感器的微孔時，在由外電極、內(nèi)電極和電解質(zhì)稀釋液組成的電路上產(chǎn)生短暫的電阻增大變化而形成脈沖信號并經(jīng)計算機(jī)處理，脈沖數(shù)被轉(zhuǎn)化為細(xì)胞數(shù)，脈沖信號幅度則與細(xì)胞體積大小呈正相關(guān)?！}沖信號和細(xì)胞體積直方圖的關(guān)系P882、射頻電導(dǎo)法射頻：射頻電流，變化﹥1萬次/秒的高頻交流電磁波。電導(dǎo)：電的傳導(dǎo)性能。高頻電流能通過細(xì)胞膜，測定細(xì)胞的導(dǎo)電性，提供細(xì)胞內(nèi)部化學(xué)成分、胞核和胞質(zhì)、顆粒成分(大小和密度)等特征性信息。3、激光散射法P89應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測原理將經(jīng)稀釋、染色、球形化的細(xì)胞懸液注入鞘液流中央，單個細(xì)胞隨懸液和鞘液流兩股液流整齊排列，以恒定流速定向通過石英毛細(xì)管。當(dāng)細(xì)胞通過激光束被照射時，細(xì)胞可阻擋或改變激光束的方向，產(chǎn)生與細(xì)胞特征相應(yīng)的各種角度的散射光。低角度散射光：前向散射光，反映細(xì)胞的數(shù)量和體積大小。高角度散射光：側(cè)向散射光，反映細(xì)胞內(nèi)部顆粒、細(xì)胞核等。被信號檢測器接受，將來自各種散射光的信息進(jìn)行綜合分析，可準(zhǔn)確區(qū)分正常類型的細(xì)胞。4、分光光度法：測Hb溶血劑＋Hb血紅蛋白衍生物（有顏色）比色三、血液分析儀檢測參數(shù)原理不同型號的血液分析儀檢測原理不盡相同(一)血液分析儀檢測原理的綜合運(yùn)用P961.體積、電導(dǎo)、光散射法Volume,conductivity,lightscantter,VCS①電阻抗技術(shù)檢測：細(xì)胞體積。②電導(dǎo)(射頻)技術(shù)檢測：細(xì)胞大小和內(nèi)部結(jié)構(gòu)，包括細(xì)胞化學(xué)成分和核的體積。③光散射技術(shù)(10°～70°)檢測：細(xì)胞內(nèi)的顆粒性、核分葉性和細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)。各種血細(xì)胞的特征不同，在散點(diǎn)圖上處于不同的部位，得以區(qū)別。立體散點(diǎn)圖平面散點(diǎn)圖2.電阻抗、射頻、流式細(xì)胞術(shù)和特殊細(xì)胞染色法：（1）4DIFF通道：激光流式細(xì)胞術(shù)、核酸熒光染色技術(shù)專一的溶血劑紅細(xì)胞和血小板WBC膜部分溶解出現(xiàn)小開口溶解和破壞核酸熒光染料進(jìn)入WBC，與DNA、RNA結(jié)合，染上色經(jīng)激光照射，所產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度與細(xì)胞核酸含量成一定比例（2）WBC／BASO通道：堿性溶血劑只保留血液中的嗜堿性粒細(xì)胞，其他所有細(xì)胞均被溶解，根據(jù)脈沖的多少可得嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量。（3）未成熟粒細(xì)胞信息通道：在細(xì)胞懸液中加入硫化氨基酸，幼稚細(xì)胞與其結(jié)合的量較成熟細(xì)胞多，并且幼稚細(xì)胞對溶血劑有拮抗作用，加入溶血劑后成熟細(xì)胞被溶解，可通過電阻抗的方法檢測出來。鎢光源、激光散射法：應(yīng)用激光散射和過氧化物酶染色技術(shù)(1)過氧化物酶染色通道：過氧化物酶活性：嗜酸粒細(xì)胞＞中性粒細(xì)胞＞單核細(xì)胞，而淋巴細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞則無。細(xì)胞經(jīng)表面活性劑溶解紅細(xì)胞，過氧化物酶染色后，通過測試區(qū)，由于酶反應(yīng)強(qiáng)度不同（陰性、弱陽性、強(qiáng)陽性）和細(xì)胞大小不同，激光束射到細(xì)胞上的前向角和散射角不同，以X軸為吸光率標(biāo)記（酶反應(yīng)強(qiáng)度），Y軸為光散射（細(xì)胞大?。?。圖激光與細(xì)胞化學(xué)聯(lián)合檢測白細(xì)胞示意圖(2)嗜堿性細(xì)胞／核分葉性通道除嗜堿性細(xì)胞外，其他細(xì)胞均被溶解成為裸核，嗜堿性細(xì)胞定位于圖上半部，裸核位于下半部，單個核位于左方，分葉越多越靠右方。（3）未染色大細(xì)胞計數(shù)檢測：在單獨(dú)的Perox通道，可檢測異常的淋巴細(xì)胞、幼稚的淋巴細(xì)胞、原始細(xì)胞等。4．多角度偏振光散射法（multi—anglepolarisedscatterseparationofwhitecell,MAPSS）原理：全血標(biāo)本用鞘流液稀釋，WBC內(nèi)部結(jié)構(gòu)近似于自然狀態(tài)，RBC與鞘流液的折光系數(shù)相同，可以從四個角度測定散射光的密度：7°散射測定細(xì)胞體積、數(shù)量測細(xì)胞結(jié)構(gòu)及核染色質(zhì)復(fù)雜性90°去偏振散射光測細(xì)胞內(nèi)部顆粒及分葉狀況區(qū)別EOS(二)紅細(xì)胞檢測原理：電阻抗法1.RBC和HCT2.Hb、MCV、MCH、MCHCfl3.紅細(xì)胞體積分布寬度Redbloodcellvolumedistributionwidth,RDW流式細(xì)胞術(shù)加二維激光散射法專用稀釋液RBC變成球形并固定激光束以低角度前向光散射和高角度散射測量測量單個紅細(xì)胞的體每個紅細(xì)胞內(nèi)積和紅細(xì)胞總數(shù)血紅蛋白濃度RBC、Hb、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW(三)血小板檢測原理P101血小板和紅細(xì)胞共用一個小孔管。大血小板：鞘流技術(shù)、浮動界標(biāo)、擬合曲線等激光散射法：低角度(2°～3°)主要測量血小板大??；高角度(5°～l5°)主要檢測血小板折射指數(shù)RI大血小板與各種碎片即使體積相似，但由于內(nèi)容物不同，RI相差較大，故能鑒別。四、檢測參數(shù)和結(jié)果顯示P107（一）檢測參數(shù)（二）結(jié)果顯示：數(shù)據(jù)、圖形、報警數(shù)據(jù)：檢測項目、結(jié)果、參考值標(biāo)識出超出參考值的檢測結(jié)果圖形1、直方圖(1)白細(xì)胞直方圖：小細(xì)胞群峰中間細(xì)胞群峰單核嗜酸嗜堿大細(xì)胞群峰原始、幼稚白細(xì)胞增多LC減少和NC增多LC增多和NC減低中間細(xì)胞群增多單個核細(xì)胞絕對增多異常的直方圖只是粗略判斷細(xì)胞比例變化或有無異常細(xì)胞如果存在異常要進(jìn)一步血涂片復(fù)核(2)紅細(xì)胞直方圖P109正常紅細(xì)胞直方圖小RBC且大小不均巨RBC且大小不均巨幼細(xì)胞性貧血治療有效(3)血小板直方圖、散點(diǎn)圖第三節(jié)血液分析儀檢測結(jié)果顯微鏡復(fù)查規(guī)則自學(xué)五、質(zhì)量控制P115＊分析前的質(zhì)量控制檢驗人員、儀器、檢測標(biāo)本＊分析中的質(zhì)量控制1.按規(guī)程操作，選用原裝配套試劑2.環(huán)境溫度、標(biāo)本混勻3.注意儀器的半堵孔現(xiàn)象＊分析后的質(zhì)量控制1.發(fā)現(xiàn)問題或報警的標(biāo)本，應(yīng)及時復(fù)查，并與臨床資料進(jìn)行相關(guān)分析2.參加室間質(zhì)評活動掌握：尿液的理學(xué)檢查、顯微鏡檢查熟悉：尿液檢驗的目的，尿標(biāo)本的種類、采集、保存和處理。了解：尿液的生成和排出一、尿液的生成尿腎小球濾過膜的濾過：液腎小管重吸收：生成腎小管的排泌：二、尿液檢查的臨床意義?泌尿系統(tǒng)疾病的診斷與療效：?其他系統(tǒng)疾病的輔助診斷與觀察：?安全用藥的監(jiān)護(hù)：?職業(yè)病的輔助診斷：?對人體健康狀態(tài)的評估：第五章尿液一般檢查P126第一節(jié)尿液標(biāo)本的收集、保存和處理一.尿液標(biāo)本收集①清潔、干燥的容器內(nèi)②避免陰道分泌物、月經(jīng)血、糞便等污染。③無干擾化學(xué)物質(zhì)混入。④如收集定時尿，容器應(yīng)足夠大，并加蓋，必要時加防腐劑。⑤如需培養(yǎng)應(yīng)在無菌條件下，用無菌容器收集中段尿液⑥尿標(biāo)本收集后應(yīng)及時送檢(2h)。二.尿標(biāo)本種類1.晨尿：泌尿系疾病動態(tài)觀察及早期妊娠試驗。2.隨機(jī)尿：適用于門診、急診患者。3.餐后尿：適于尿糖、尿蛋白、尿膽原等。4.3h尿：測定尿液有形成分，如白細(xì)胞排出率。5.12h尿：尿有型成分計數(shù)。6.24h尿：用于化學(xué)成分的定量。7.尿三杯試驗?zāi)蛉囼灒║rineThree-CupTest)是臨床上遇到血尿、白細(xì)胞尿(膿尿)時，為了確定病變部位和揭示病因而進(jìn)行的臨床檢驗方法。方法：清洗外陰及尿道口后，將最初10～20毫升尿液留于第一杯中，中間30～40毫升尿液留在第二杯中，終末5～10毫升留在第三杯中。尿三杯試驗和病變部位的關(guān)系第一杯尿，排尿開始出現(xiàn)血尿或膿尿，后兩杯清晰，提示病變在前尿道，如尿道炎等。第一杯尿和第二杯尿清晰，第三杯尿出現(xiàn)紅細(xì)胞和膿細(xì)胞，排尿終末出現(xiàn)的血尿或膿尿，提示病變部位在膀胱底部、后尿道或前列腺部位，如前列腺炎、精囊炎等。三杯皆混濁或出現(xiàn)血尿，提示病變部位在膀胱或膀胱以上部位，如腎盂腎炎，腎小球炎等。三.尿標(biāo)本保存1、冷藏：4℃,但不能超過8小時2、化學(xué)防腐：?甲醛：5ml/L尿液，用于尿管型、細(xì)胞防腐。?甲苯：5ml/L尿液，用于尿糖、尿蛋白等定量檢查。?麝香草酚：1L尿中小于1g，既能抑菌，又能較好的保存尿中有型成分，可用于尿化學(xué)檢查及防腐。?濃鹽酸：10ml/L尿液，用于尿中17-酮、17-羥類固醇、兒茶酚胺。1第二節(jié)尿液一般性狀檢查1.尿量：一般健康成人尿量為1～2L/24。晝/夜尿量為2～4：1，小兒尿量較成人多。（1）.多尿（polyuria）：24h尿量大于2.5L。）生理性多尿：飲水過多、咖啡、精神緊張、失眠，使用利尿劑或輸液過多等。）病理性多尿：a.內(nèi)分泌?。耗虮腊Y、糖尿病等b.腎疾病：慢性腎炎、腎功能不全、慢性腎盂腎炎等。c.精神因素：癔病等d.藥物：甘露醇、山梨醇等。（2）少尿（oliguria）：24h尿量＜0.4L稱為少尿A）生理性少尿：機(jī)體缺水、出汗過多等。B）病理性少尿：①腎前性少尿：各種原因引起的脫水、大失血、休克等②腎性少尿：急性腎小球腎炎、慢性腎功能衰竭。③腎后性少尿：單側(cè)或雙側(cè)上尿路梗阻疾病。（3）無尿（anuria）：24小時尿量＜0.1L或在12小時內(nèi)完全無尿者。2.外觀：包括顏色和透明度①血尿:尿內(nèi)含有一定量的紅細(xì)胞時稱血尿。顏色：淡紅色云霧狀、淡洗肉水樣或鮮血樣原因：泌尿系統(tǒng)出血。如腎結(jié)核、腎腫瘤、結(jié)石及出血性疾病肉眼血尿：＞1ml血/L尿→可出現(xiàn)淡紅色。鏡下血尿：尿液外觀變化不明顯，離心沉淀鏡檢時，＞3個RBC/HPF→鏡下血尿。②血紅蛋白尿（hemoglobinuria）：酸性尿中血紅蛋白可氧化成正鐵血紅蛋白呈棕色。含量多呈棕黑色醬油樣外觀。③膽紅素尿（bilirubinuria）：深黃色見于：阻塞性黃疸和肝細(xì)胞性黃疸→震蕩后呈泡沫亦呈黃色。服用痢特靈、核黃素、牛黃類藥物等時尿液可呈深黃色。④乳糜尿（chyluria）：外觀：呈不同程度的乳白色，嚴(yán)重者頗似乳汁，有時含有血液。原因：多由絲蟲病引起，少數(shù)可由腫瘤、腹部創(chuàng)傷或手術(shù)。⑤膿尿（pyuria）：外觀：含有大量白細(xì)胞→黃白色渾濁或含膿絲狀懸浮物→鏡檢可見大量膿細(xì)胞原因：見于泌尿系統(tǒng)感染及前列腺炎、精囊炎等。⑥鹽類結(jié)晶尿：外觀：呈白色或淡粉紅色顆粒狀渾濁比重A.化學(xué)試帶法B.折射計法C.比重計法4.尿滲量5.尿氣味第三節(jié)尿液有形成分顯微鏡檢查一、檢查方法（一）不離心直接鏡檢法1.標(biāo)準(zhǔn)定量計數(shù)板法2.直接涂片法（混勻一滴尿法）：低倍鏡觀察20個視野的管型，高倍鏡觀察10個視野的細(xì)胞，以最高～最低數(shù)報告。二）離心鏡檢法10ml尿液加入刻度離心管，1000r/min，5分鐘，傾倒或吸去上清，剩余0.2ml，鏡檢。1.直接涂片法2.標(biāo)準(zhǔn)化計數(shù)板法（三）有形成分染色法（四）1h尿液有形成分計數(shù)法尿細(xì)胞成分檢查一、紅細(xì)胞①.正常成人偶見一個紅細(xì)胞/HP。②.＞1～2個RBC/HP，時應(yīng)考慮為異常。③.若＞3個RBC/HP，則可診斷為鏡下血尿均一紅細(xì)胞血尿：RBC增多，尿蛋白增多不明顯RBC外形及大小正常，形態(tài)一致。非腎小球性疾病。變形紅細(xì)胞血尿：尿蛋白增多，伴管型增多RBC大小不等，外形呈兩種以上的多形性變。腎小球性源性。參考值：混勻一滴尿：0～偶見/HPF離心尿：0～3/HPF臨床意義：1.生理性血尿：劇烈運(yùn)動、急行軍、冷水浴、久站、或重體力勞動可出現(xiàn)一過性鏡下血尿2.病理性血尿：①泌尿系統(tǒng)自身疾?。貉装Y、腫瘤、結(jié)核、結(jié)石等②全身其他系統(tǒng)的疾?。褐饕娪诟鞣N原因引起的出血性疾?。孩勖谀蛳到y(tǒng)附近器官的疾?。喝缜傲邢傺?、精囊炎等。二.白細(xì)胞正常成人：可偶然見到1～2個WBC/HPF；如果＞5個WBC為增多，稱為鏡下膿尿。膿細(xì)胞：破壞或死亡的中性粒細(xì)胞，結(jié)構(gòu)模糊，漿內(nèi)充滿粗大顆粒，核不清楚，易聚集成團(tuán)。參考值：混勻一滴尿：白細(xì)胞：0～3/HP離心后尿沉渣：白細(xì)胞：0～5/HP臨床意義：A.泌尿系統(tǒng)炎癥：尿中白細(xì)胞增多。B.女性陰道炎、宮頸炎、附件炎：白細(xì)胞增多，大量扁平上皮細(xì)胞。C.腎移植后排異反應(yīng)：大量LC、單核C。D.腎盂腎炎活動期、慢性腎盂腎炎的急性發(fā)作期：可見閃光細(xì)胞：在低滲條件下，中性粒細(xì)內(nèi)顆粒呈布朗分子運(yùn)動，由于光折射，出現(xiàn)閃光現(xiàn)象。E.尿中單核細(xì)胞增多：藥物性急性間質(zhì)性腎炎三、吞噬細(xì)胞為白細(xì)胞的2~3倍，分為大吞噬細(xì)胞（巨噬細(xì)胞）和小吞噬細(xì)胞（中性粒細(xì)胞）。常見于泌尿系統(tǒng)的急性感染。四.上皮細(xì)胞：腎小管、腎盂、輸尿管、膀胱、尿道等脫落。臨床意義：①.扁平鱗狀上皮：正常尿：少量鱗狀上皮婦女尿：可成片出現(xiàn)，沒有臨床意義。尿道炎：大量出現(xiàn)，常成片且伴有較多白細(xì)胞。②移形上皮細(xì)胞：少見，來源與腎盂、輸尿管、膀胱等處A.表層移形上皮細(xì)胞（大圓上皮）B.中層移形上皮細(xì)胞（尾狀上皮）C.底層移形上皮細(xì)胞（小圓上皮）意義：在腎盂、輸尿管或膀胱頸炎癥時可成片脫落③腎小管上皮細(xì)胞：極少見。來源于腎小管，較中性粒細(xì)胞大1.5倍，有一個較大的細(xì)胞核。（小圓上皮）意義：（1）急性腎小球性腎炎：最多見。（2）慢性腎?。耗I小管上皮細(xì)胞發(fā)生脂肪變性：漿內(nèi)充滿脂肪顆粒，甚至將胞核遮蓋，此時稱為脂肪顆粒細(xì)胞或稱復(fù)粒細(xì)胞。尿管型檢查一、概念：管型(casts):在腎小管、集合管中形成的圓柱樣蛋白聚合體。二.管型形成的條件：A.蛋白尿的存在。B.腎小管有使尿液濃縮、酸化的能力。C.尿流緩慢。D.有供交替使用的腎單位。三.常見管型類型：1.透明管型（hyalinecast）：形態(tài)：無色半透明，兩邊平行、兩端鈍圓、質(zhì)地菲薄的圓柱體。有少許顆粒及少量細(xì)胞。臨床意義：正常人：0~偶見/LP，見于正常人清晨濃縮尿中大量出現(xiàn)：腎實質(zhì)病變，如急慢性腎小球腎炎等。.細(xì)胞管型（cellularcasts）：細(xì)胞超過管形面積1/3①紅細(xì)胞管型：管型內(nèi)含有較多的紅細(xì)胞，?；ハ嗾尺B界限不清，略呈銹色或棕紅色。臨床意義：提示腎單位有出血，如急慢性腎小球腎炎。②白細(xì)胞管型：管型內(nèi)充滿白細(xì)胞。臨床意義：表示有細(xì)菌感染性病變。見于急性腎盂腎炎，間質(zhì)性腎炎等③腎上皮細(xì)胞管型：內(nèi)含有腎小管上皮細(xì)胞。細(xì)胞大小不一，呈瓦片狀排列。臨床意義：見于腎小管病變。如：急性腎小管壞死、重金屬及化學(xué)藥物中毒，腎移植后排斥反應(yīng)等。3.顆粒管型：管型內(nèi)含有大小不等的顆粒物，超過1/3面積。粗顆粒管型：顆粒粗大濃密細(xì)顆粒管型：含有較多細(xì)小而稀疏的顆粒。臨床意義：見于腎實質(zhì)性病變，提示腎單位內(nèi)有淤滯。.蠟樣管型：呈淺灰色或蠟黃色、有折光性、質(zhì)厚、外形寬大、易斷裂成平齊狀、有時呈扭曲狀。臨床意義：提示腎小管有嚴(yán)重病變，預(yù)后差。如：慢性腎小球腎炎的晚期5.脂肪管型：管型內(nèi)含有大小不等，折光性很強(qiáng)的脂肪。見于：腎病綜合征。6.其它管型：細(xì)菌管型、結(jié)晶管型7結(jié)晶檢查一.酸性尿液中的結(jié)晶：1.與疾病無關(guān)的結(jié)晶有：尿酸、尿酸鹽、草酸鈣等尿酸結(jié)晶尿酸鹽結(jié)晶草酸鈣.與疾病有關(guān)的結(jié)晶有：胱氨酸、亮氨酸、酪氨酸、膽固醇等二.酸性尿液中的結(jié)晶：無定型磷酸胺結(jié)晶、磷酸鎂胺、磷酸鹽、磷酸鈣結(jié)晶。其他有行成分細(xì)菌2.真菌3.寄生蟲4.精子5.纖維狀物重點(diǎn)內(nèi)容：尿液膽色素檢查、尿酮體檢查、乳糜尿檢查、熟習(xí)內(nèi)容：干化學(xué)分析儀教學(xué)難點(diǎn)：膽紅素的代謝尿酮體檢查3一、概述：酮體(ketones,KET)組成:乙酰乙酸、β-羥丁酸、丙酮酮尿的形成：正常情況下：肝產(chǎn)生的酮體肝外組織氧化供能血液異常情況下：當(dāng)糖類代謝發(fā)生障礙時，脂肪代謝會代嘗性增加，肝內(nèi)產(chǎn)生酮體＞肝外利用→血中酮體增加→超過腎閾值→尿中出現(xiàn)酮體(酮尿)。4酮體主要是脂肪酸分解代謝過程中的中間產(chǎn)物。肝中產(chǎn)生，肝外組織利用。主要用于氧化供能。1.酮體為酸性物質(zhì)，可引起人體全身乏力，不適。2.呼吸中有酮體的爛水果味。3.惡心、嘔吐。4.酮體長期存在引起酸中毒，昏迷、危及生命。二.檢測方法亞硝基鐵氰化鈉試管法或粉劑檢查法、干化學(xué)試帶法.〔原理〕堿性生成紫紅色化合物酮體＋亞硝基鐵氰化鈉注：乙酰乙酸的靈敏度最高，β-羥丁酸不反應(yīng)。三、干擾因素假陽性：尿中含較多量肌酸、肌酐，高色素尿，尿中含酞、苯丙酮等假陰性：標(biāo)本收集和保存不當(dāng)；亞硝基鐵氰化鈉失效，試帶受潮失活等四、質(zhì)量保證1、檢測前丙酮易揮發(fā)，乙酰乙酸易被細(xì)菌分解，要使用新鮮尿標(biāo)本2、檢測中有陰陽性對照3、檢測后仔細(xì)審核結(jié)果，及時與臨床溝通，做出合理解釋8五.臨床意義：常規(guī)定性法是陰性(－)1.糖尿病酮癥酸中毒：早期診斷。并能與低血糖、心腦疾病、乳酸中毒和高血糖高滲性糖尿病昏迷區(qū)別。2.碳水化合物丟失或攝入不足：長期禁食的病人、妊娠嘔吐等3.中毒：如氯仿、磷中毒等可造成酮體增加4.服用雙胍類降糖藥：降糖靈等一些藥物尿液膽色素檢查一、尿中膽色素成分：膽紅素：bilirubinBIL尿膽原：urobilinogen