艾滋病梅毒乙肝實驗室檢測技術

白志永艾滋病抗體檢測及

樣品處理實驗室質量管理生物安全質量控制梅毒乙肝

檢測要點

艾滋病抗體檢測及樣品處理

一、HIV抗體檢測篩查方法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）化學發(fā)光或免疫熒光試驗快速檢測（RT）（建議配備合格的快速檢測試劑，灰區(qū)。）二、篩查程序初篩和復檢流程（圖1）2、檢測程序五、樣品的處理1樣品的保存用于抗體和抗原檢測的血清或血漿樣品，短期（1周）內進行檢測的可存放于2～8℃，一周以上應存放于-20℃以下。2.樣品的運送（例）（1）應符合生物安全要求；(2)應采用三層容器對樣品進行包裝。(3)用于抗體檢測的血清和血漿樣品應在凍存條件下運送。質量控制

一、艾滋病抗體檢測的統(tǒng)計學室內質量控制1、試劑盒內部對照即試劑盒提供的陽性和陰性對照血清。用于判斷實驗的有效性，不能作為室內質控品使用，內部對照結果無效，必須重新試驗。2、室內質控品為非試劑盒組份的外部質控品，是為了監(jiān)控檢測的重復性而設置的，包括強陽性、弱陽性和陰性質控血清。也可以只設置一個弱陽性質控，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的2～3倍為宜。作用：判斷該批臨床樣品檢測的有效性，每次實驗必須包含室內質控品，其結果無效，必須重新試驗。二、統(tǒng)計室內質控的主要表示方法—建立質控圖最常用的質控圖是Levey-Jennings質控圖，下面以ELISA方法檢測HIV抗體為例，描述建立質控圖步驟：2、繪制質控圖（a）在常規(guī)條件下，對同一批血清連續(xù)測定20次（天）或以上，獲得一組S/CO值，求均數(shù)（

）和標準差（s）,超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應刪除。（b）將均值（

）和標準差（s）分別在質控框架圖中標示出來。以S/CO值作縱座標（Y軸），每一批次試驗作橫座標（x軸），繪制質控圖。（c）從第21次起，將每次質控血清的檢測結果依次點入該質控框架圖中，檢驗進入質控狀態(tài)。3、質控規(guī)則及其使用質控規(guī)則的使用應檢出隨機誤差和系統(tǒng)誤差，目前有許多質控規(guī)則，常用的是12S和13S規(guī)則。（a）告警（12S）：當外部質控品的S/CO值超出+2s范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。若將12S做失控標準，有較高的假失控概率，所以一般不采用。（b）失控（13S）：當外部質控品的S/CO值超出+3s范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實驗結果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機誤差或外部質控品穩(wěn)定性下降所致。（c）漂移：連續(xù)幾次（3～5次）外部質控品的S/CO值都落在均值的一側則稱為漂移，提示實驗條件發(fā)生了較大的變化。（d）趨勢：連續(xù)幾次（5～7次）外部質控品的S/CO值幾乎按一個方向分布時稱為趨勢，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。艾滋病實驗室生物安全

一、HIV的生物危害第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。人類免疫缺陷病毒（HIV）屬第二類病原微生物，是高致病性病原微生物。二、HIV相關檢測的生物安全級別HIV抗體檢測應在符合Ⅱ級生物安全實驗室（BSL-2）要求的艾滋病檢測實驗室中進行。三、生物安全保證措施1、建立安全制度艾滋病檢測實驗室應建立下列安全制度(1)實驗室的安全工作制度或安全標準操作程序（S-SOP）。(2)意外事故處理預案，主要是生物安全意外事故。(3)

信息安全及保密制度：（例）

2、培訓和管理3、個人保健和防護4、安全操作5、實驗室的清潔和消毒工作完畢應對工作臺面消毒，推薦用0.1～0.2%的次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥20min以上；操作過程中如有樣品、檢測試劑外濺，應及時消毒。四、污染物處理1、艾滋病實驗室產生的所有廢棄物，包括不再需要的樣品、培養(yǎng)物和其它物品，均應視為感染性廢棄物，應置于專用的密封防漏容器中，安全運至消毒室，經高壓消毒后再進行處理或廢棄。2、艾滋病檢測實驗室常用的消毒方法（1）物理消毒方法a高壓蒸汽消毒，121℃，保持15～20min;b干燥空氣烘箱消毒（干烤消毒），140℃，保持2～3h。（2）

化學消毒方法

含氯消毒劑（次氯酸鈉，含有效氯2000～5000mg/L）、75%乙醇、2%戊二醛（3）艾滋病檢測實驗室物品常用的消毒方法a、廢棄物缸：5000mg/L次氯酸鈉。b、生物安全柜工作臺面和儀器表面：75%乙醇。c、溢出物：5000mg/L次氯酸鈉。d、污染的臺面和器具：2000mg/L次氯酸鈉,也可以用過氧化氫或過氧乙酸。器械可用2%戊二醛消毒。艾滋病檢測實驗室質量管理

一、范圍艾滋病檢測實驗室質量管理包括質量保證、質量控制和質量評價2、環(huán)境條件艾滋病抗體篩查實驗室的設置及其建筑、設施、設備必須符合《全國艾滋病檢測工作管理辦法》的要求。HCV，HBV及梅毒等血清學檢測在滿足實驗室管理要求和保證生物安全的條件下，可以與HIV檢測共享空間和設備，應避免交叉污染。3、樣品采集、運送和處理4、檢測方法和試劑的選擇5、設備維護與校準6、實驗耗材7、文件和文件管理8、標準操作程序（SOP）篩查實驗室SOP文件包括：（1）樣品的接收、登記、處理、保存和運輸；（2）檢測方法和步驟；（3）試劑使用和保存；（4）儀器的使用維護和校準；（5）質量控制要求及程序；（6）結果解釋與報告；（7）保密程序；（8）實驗室數(shù)據(jù)、相關文件記錄與保存；（9）不確定樣品追蹤和處理；（10）實驗室安全防護及實驗室的清理和消毒；（11）標題和編號；（12）編寫和修訂日期；（13）編寫和修訂人員姓名；（14）方法、目的和應用范圍；（15）檢測設備；（16）試劑及有效期；（17）安全防護相關步驟；（18）結果的解釋和報告；（19）附錄，包括相關的附加文件如標準表格、設備和試劑盒說明書等。9、實驗原始記錄表（附表4）10、結果報告11、樣品登記和保存三、質量控制四、質量評價包括內部質量評價和外部質量評價。1、內部質量評價2、外部質量評價篩查實驗室應參加省級職能工作考核和PT。3、職能工作考核現(xiàn)場評價內容，篩查實驗室現(xiàn)場評價應包括：實驗室人員組成及其職責分工；實驗室分區(qū)、布局、恒溫設施；儀器設備及其使用、校準記錄；質量保證文件、實驗室SOP文件及原始記錄；實驗室的安全防護措施，安全用品及安全規(guī)程；消毒與污物處理方法及設施；HIV檢測資料數(shù)據(jù)庫的建設、存檔、備份、安全和保密；樣品保存和安全；開展的HIV檢測項目和檢測試劑等。梅毒、乙肝檢測要點

一、梅毒螺旋體感染人體后出現(xiàn)兩種抗體，特異體抗體和非特異性抗體。特異性抗體(TPHA)：為lgM，這種抗體一旦產生，終身是陽性。靈敏度高、特異性強非特異性抗體（反應素RPR）：為lgA與lgM的混合物，隨病情發(fā)展而變化?？膳c正常生物組織中的類脂抗原發(fā)生非特異性結合。二、梅毒特異性抗體檢測：用于證實試驗，即使患者已經經過充分的治療，IgG抗體仍保持陽性所以不能用以觀察