實(shí)驗(yàn)二顯微鏡的使用酵母菌的觀察細(xì)菌的單染色及簡單染色

關(guān)于實(shí)驗(yàn)二顯微鏡的使用酵母菌的觀察細(xì)菌的單染色及簡單染色一、目的要求了解普通光學(xué)顯微鏡(復(fù)式顯微鏡)的構(gòu)造、基本原理、維護(hù)和保養(yǎng)的方法學(xué)習(xí)并掌握普通光學(xué)顯微鏡的正確使用方法第2頁,共31頁，2024年2月25日，星期天二、光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)機(jī)械和支架系統(tǒng)照明系統(tǒng)光學(xué)放大系統(tǒng)第3頁,共31頁，2024年2月25日，星期天第4頁,共31頁，2024年2月25日，星期天三、油鏡的工作原理增加照明亮度增加顯微鏡的分辨率第5頁,共31頁，2024年2月25日，星期天顯微鏡的分辨率：顯微鏡能辨別兩點(diǎn)之間的最小距離的能力。

D=λ/2NA=λ/2n·sin(α/2)D：分辨率NA：物鏡的數(shù)值孔徑值

：可見光的波長（平均0.55

m)n:物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率：鏡口角（即入射角）第6頁,共31頁，2024年2月25日，星期天四、顯微鏡的使用方法觀察前的準(zhǔn)備顯微鏡的安置光源調(diào)節(jié)根據(jù)個(gè)人情況，調(diào)節(jié)雙筒顯微鏡的目鏡右眼看清調(diào)節(jié)左目鏡的視度調(diào)節(jié)圈扳動(dòng)鏡管，調(diào)節(jié)至瞳孔間距第7頁,共31頁，2024年2月25日，星期天顯微觀察低倍鏡觀察高倍鏡觀察（同焦現(xiàn)象）油鏡觀察在待觀察的樣品區(qū)域滴加香柏油，從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器將載物臺(tái)緩慢上升，使油鏡浸在鏡油中。第8頁,共31頁，2024年2月25日，星期天顯微鏡用畢后的處理下降載物臺(tái)，取下載玻片；用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油，然后用擦鏡紙沾取少量酒精乙醚洗液擦去鏡頭上殘留的油跡，最后用干凈的擦鏡紙擦去殘留的洗液；用擦鏡紙清潔物鏡及目鏡，用綢布清潔顯微鏡的金屬部件；將鏡體各部分復(fù)原。

第9頁,共31頁，2024年2月25日，星期天五、思考題用油鏡觀察時(shí)應(yīng)注意哪些問題？在載玻片和鏡頭之間滴加香柏油有何作用？什么是物鏡的同焦現(xiàn)象？它在顯微鏡觀察中有什么意義？影響顯微鏡分辨率的因素有哪些？

——P47五、2.（１）（3）（4）第10頁,共31頁，2024年2月25日，星期天（二）酵母菌的形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的鑒別目的要求觀察酵母菌的形態(tài)及出芽生殖方式。學(xué)習(xí)區(qū)分酵母菌死活細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法。第11頁,共31頁，2024年2月25日，星期天基本原理

美藍(lán)是一種無毒性染料.氧化型呈現(xiàn)藍(lán)色,還原型呈現(xiàn)無色.用美藍(lán)對酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色,代謝活力強(qiáng)的細(xì)胞具有較強(qiáng)的還原能力,能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型.因此,具有還原能力的酵母活細(xì)胞為無色,死細(xì)胞或代謝能力弱的衰老細(xì)胞為藍(lán)色.第12頁,共31頁，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)器材菌種啤酒酵母溶液或試劑

0.1%呂氏堿性美藍(lán)染色液儀器或其他用具顯微鏡，蓋玻片，載玻片，濾紙，擦鏡紙。第13頁,共31頁，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)步驟制片在載玻片中央加一滴0.1%美藍(lán)→取菌少許→混勻→蓋上蓋玻片→靜置3min、0.5h觀察用高倍鏡觀察酵母的形態(tài)和出芽生殖根據(jù)顏色鑒別死活細(xì)胞活細(xì)胞：無色；死細(xì)胞：藍(lán)色第14頁,共31頁，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)結(jié)果繪圖說明你所觀察到的酵母菌的形態(tài)特征及出芽生殖方式。記錄染色時(shí)間對酵母菌死活細(xì)胞數(shù)量的影響P75表Ⅳ-1。第15頁,共31頁，2024年2月25日，星期天思考題呂氏堿性美藍(lán)染色液作用時(shí)間的不同，對酵母菌死細(xì)胞數(shù)量有何影響？試分析其原因。第16頁,共31頁，2024年2月25日，星期天調(diào)節(jié)手動(dòng)光輪調(diào)節(jié)孔徑光闌手柄聚光器的升降第17頁,共31頁，2024年2月25日，星期天鏡頭復(fù)原、手動(dòng)光輪調(diào)到最低檔第18頁,共31頁，2024年2月25日，星期天細(xì)菌的單染色及革蘭氏染色第19頁,共31頁，2024年2月25日，星期天（一）簡單染色法目的要求學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的基本技術(shù)，掌握細(xì)菌的簡單染色法；鞏固顯微鏡（油鏡）的使用方法和無菌操作技術(shù)。基本原理借助物理因素（如：細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對染料的毛細(xì)現(xiàn)象、滲透、吸附作用等）和化學(xué)因素（如：正負(fù)離子之間的相互吸引等）的作用而進(jìn)行的。第20頁,共31頁，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)器材菌種土壤樣品分離純化后得到的細(xì)菌染色劑草酸銨結(jié)晶紫染液番紅染液儀器或其他用具顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、無菌水等。第21頁,共31頁，2024年2月25日，星期天操作步驟涂片干燥固定染色鏡檢水洗干燥第22頁,共31頁，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)結(jié)果根據(jù)觀察結(jié)果，繪出細(xì)菌形態(tài)圖。思考題（P76五、2.（１）（2）（3））在進(jìn)行細(xì)菌涂片時(shí)應(yīng)注意哪些環(huán)節(jié)？細(xì)菌制片時(shí)為什么要進(jìn)行加熱固定？在加熱固定時(shí)應(yīng)注意什么？為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察？第23頁,共31頁，2024年2月25日，星期天（二）革蘭氏染色法目的要求學(xué)習(xí)并初步掌握革蘭氏染色法；了解革蘭氏染色法的原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性。實(shí)驗(yàn)器材菌種枯草芽孢桿菌12-18h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物大腸桿菌約24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物土壤樣品分離純化后得到的細(xì)菌第24頁,共31頁，2024年2月25日，星期天染色劑草酸銨結(jié)晶紫染液盧戈氏碘液95%乙醇番紅染色液儀器或其他用具顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、無菌水等。第25頁,共31頁，2024年2月25日，星期天操作步驟采用三區(qū)涂片法制片大腸桿菌枯草芽孢桿菌大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混合涂片第26頁,共31頁，2024年2月25日，星期天操作步驟第27頁,共31頁，2024年2月25日，星期天大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混合涂片油鏡下形態(tài)（革蘭氏染色）大腸桿菌萌發(fā)芽孢的枯草芽孢桿菌第28頁,共31頁，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)結(jié)果列表說明你所觀察到的細(xì)菌形狀、顏色和革蘭氏染色反應(yīng)。菌種形態(tài)顏色結(jié)果（Ｇ＋、Ｇ－）第29頁,共31頁，2024年2月25日，星期天思考題你認(rèn)為哪些環(huán)節(jié)會(huì)影響革蘭氏染色結(jié)果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么？