版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
ICS65.020.20
CCSB22
DB32
江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)
DB32/T4056—2021
優(yōu)良食味半糯粳稻品質(zhì)
Qualityofsemi-glutinousjaponicaricewithgoodtaste
2021-06-03發(fā)布2021-07-03實(shí)施
江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布
DB32/T4056-2021
I
DB32/T4056-2021
優(yōu)良食味半糯粳稻品質(zhì)
1范圍
本文件規(guī)定了優(yōu)良食味半糯粳稻品質(zhì)的術(shù)語和定義、質(zhì)量要求、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則及判定規(guī)則。
本文件適用于半糯粳稻品種的選育、鑒定、評價(jià)和推廣,適用于商品半糯粳稻的收購、加工和銷售。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,
僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本
文件。
GB1350稻谷
GB/T1354大米
GB/T5490糧食檢驗(yàn)一般規(guī)則
GB/T5491糧食、油料檢驗(yàn)扦樣、分樣法
GB/T15682糧油檢驗(yàn)稻谷、大米蒸煮食用品質(zhì)感官評價(jià)方法
GB/T17891—2017優(yōu)質(zhì)稻谷
GB/T21719稻谷整精米率檢驗(yàn)法
GB/T22294糧油檢驗(yàn)大米膠稠度的測定
NY/T83米質(zhì)測定方法
NY/T593食用稻品種品質(zhì)
NY/T2639稻米直鏈淀粉的測定分光光度法
3術(shù)語和定義
GB1350、GB/T1354、GB/T17891和NY/T593界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。
3.1
半糯粳稻semi-glutinousjaponicarice
稻米直鏈淀粉含量在2%~13%之間,含有低直鏈淀粉含量的Wx等位基因(如Wxmp、Wxmq、Wxmw
等)的粳稻。
3.2
優(yōu)良食味半糯粳稻semi-glutinousjaponicaricewithgoodtaste
品質(zhì)達(dá)到本標(biāo)準(zhǔn)4規(guī)定的質(zhì)量要求、品質(zhì)等級(jí)三級(jí)及以上的半糯粳稻。
1
DB32/T4056-2021
3.3
鑒別標(biāo)記identificationmolecularmarker
用于鑒別低直鏈淀粉含量基因(如Wxmp、Wxmq、Wxmw等)、經(jīng)PCR反應(yīng)擴(kuò)增出的特征性條帶或
序列,詳見附錄A。
4質(zhì)量要求
4.1基本質(zhì)量要求
雜質(zhì)含量、水分含量、黃粒米含量、谷外糙米含量、色澤氣味等基本質(zhì)量指標(biāo)應(yīng)符合GB1350粳
稻谷要求,不完善粒含量應(yīng)≤3%,異品種率應(yīng)≤2%。
4.2定等質(zhì)量指標(biāo)
在符合GB1350的基礎(chǔ)上,優(yōu)良食味半糯粳稻的定等質(zhì)量指標(biāo)見表1。
表1優(yōu)良食味半糯粳稻品質(zhì)等級(jí)
等級(jí)
指標(biāo)
一二三
整精米率/%≥67.061.055.0
透明度/級(jí)≤123
直鏈淀粉(干基)含量/%8.0~13.0
膠稠度/mm≥908070
食味值/分≥908580
注1:等級(jí)評定須在相同的水分條件下進(jìn)行。
5檢驗(yàn)方法
5.1低直鏈淀粉含量基因Wxmp、Wxmq、Wxmw的檢驗(yàn)按照附錄A執(zhí)行。
5.2不完善粒含量檢驗(yàn):按GB/T17891—2017,6.5執(zhí)行。
5.3異品種率檢驗(yàn):按照GB/T17891—2017,附錄B執(zhí)行。
5.4整精米率檢驗(yàn):按照GB/T21719執(zhí)行。
5.5透明度檢驗(yàn):按照NY/T83執(zhí)行。
5.6直鏈淀粉(干基)含量檢驗(yàn):按照NY/T2639執(zhí)行。
5.7膠稠度檢驗(yàn):按照GB/T22294執(zhí)行。
5.8食味值檢驗(yàn):按照GB/T15682執(zhí)行。
2
DB32/T4056-2021
6檢驗(yàn)規(guī)則
6.1扦樣、分樣按照GB/T5491執(zhí)行。
6.2檢驗(yàn)的一般規(guī)則按照GB/T5490執(zhí)行。
7判定規(guī)則
7.1類型判定
含有低直鏈淀粉含量基因(如Wxmp、Wxmq、Wxmw等)的,判定為半糯粳稻。
7.2等級(jí)判定
達(dá)到本標(biāo)準(zhǔn)4.1規(guī)定的基本質(zhì)量要求,表1中5項(xiàng)定級(jí)指標(biāo)全部達(dá)到該等級(jí)要求的,則判定為該等
級(jí)半糯粳稻。5項(xiàng)定級(jí)指標(biāo)中有1項(xiàng)達(dá)不到該等級(jí)質(zhì)量要求的,逐級(jí)降至符合的等級(jí);不符合最低等級(jí)
指標(biāo)要求的,為非等級(jí)產(chǎn)品。基本質(zhì)量要求有1項(xiàng)及以上不符合的,為非等級(jí)產(chǎn)品。
7.3等級(jí)分類
品質(zhì)等級(jí)達(dá)三級(jí)及以上的判定為優(yōu)良食味半糯粳稻,低于三級(jí)的判定為普通半糯粳稻。
3
DB32/T4056-2021
附錄A
(規(guī)范性)
低直鏈淀粉含量基因Wxmp、Wxmq和Wxmw分子標(biāo)記檢測方法
A.1原理
低直鏈淀粉含量突變基因Wxmp、Wxmq和Wxmw是在Wxb基因的第4、第5和第6外顯子發(fā)生了單堿基突
變(圖A.1)。僅在第4外顯子第53位堿基發(fā)生G-A突變的為Wxmp基因,同時(shí)在第4外顯子第53位堿基發(fā)
生G-A突變和第5外顯子第52位堿基發(fā)生T-C突變的為Wxmq基因,僅在第6外顯子第62位堿基發(fā)生A/C突變
的為Wxmw基因。利用四引物擴(kuò)增受阻突變體系PCR技術(shù)可針對第4和第6外顯子的變異位點(diǎn)進(jìn)行分子標(biāo)
記檢測;利用成對引物可針對第5外顯子的變異位點(diǎn)進(jìn)行PCR擴(kuò)增和序列分析,根據(jù)突變位點(diǎn)的有無和
類型,來判斷是否含有突變基因Wxmp、Wxmq和Wxmw。
圖A.1Wx基因的結(jié)構(gòu)及Wxmp、Wxmq和Wxmp基因突變位點(diǎn)示意圖
A.2儀器設(shè)備
高速冷凍離心機(jī)、PCR擴(kuò)增儀、超純水系統(tǒng)、組織研磨儀、瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)及制膠附件、凝膠
成像系統(tǒng)、微量可調(diào)移液器(2uL、10uL、100uL、1000uL)。
A.3試劑與溶液
A.3.1DNA提取試劑
十六烷基三甲基溴化銨、三氯甲烷、異戊醇、異丙醇、乙二胺四乙酸二鈉、三羥甲基氨基甲烷、鹽
酸、氫氧化鈉、氯化鈉。
A.3.2PCR擴(kuò)增試劑
DNA、引物、dNTP、Taq酶、10×PCR緩沖液、超純水。
A.3.3電泳試劑
1
DB32/T4056-2021
6×上樣緩沖液、DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)、1×TAE電泳緩沖液、核酸染料。
A.3.4DNA回收試劑
凝膠回收試劑盒。
A.4DNA提取
稻谷出苗后在三葉期按單株取水稻葉片,提取基因組DNA。DNA提取方法及試劑配制方法按NT/T
1433執(zhí)行。
A.5分子標(biāo)記序列
A.5.1用于鑒定Wxmq或Wxmp的分子標(biāo)記序列
利用四引物擴(kuò)增受阻突變體系PCR技術(shù)可對Wxmq或Wxmp第4外顯子第53位堿基發(fā)生的G-A突
變進(jìn)行分子標(biāo)記鑒定,四引物序列為:
正向外引物(Wxmq/Wxmp-O-F)序列為5'-ATGTTGTGTTCTTGTGTTCTTTGCAGGC-3',
反向外引物(Wxmq/Wxmp-O-R)序列為5'-GTAGATCTTCTCACCGGTCTTTCCCCAA-3',
正向內(nèi)引物(Wxmq/Wxmp-I-F)序列為5'-GGGTGAGGTTTTTCCATTGCTACAATCG-3',
反向內(nèi)引物(Wxmq/Wxmp-I-R)序列為5'-GTCGATGAACACACGGTCGACTCAAT-3'。
利用成對引物PCR擴(kuò)增法可對Wxmq第5外顯子第52位堿基發(fā)生的T-C突變進(jìn)行分子標(biāo)記鑒定,
成對引物序列為:
正向引物(Wxmq-F)序列為5'-GGCTTCACGCAACGGCGCTACAAATAG-3',
反向引物(Wxmq-R)序列為5'-CCATTCGCCTGCAAAGAACACAAGAAC-3'。
A.5.2用于鑒定Wxmw的分子標(biāo)記序列
利用四引物擴(kuò)增受阻突變體系PCR技術(shù)可對Wxmw第6外顯子第62位堿基發(fā)生的A/C突變進(jìn)行分
子標(biāo)記鑒定,四引物序列為:
正向外引物(Wxmw-O-F)序列為5'-GCTTAGCTTCCACTGGTGATTTCA-3',
反向外引物(Wxmw-O-R)序列為5'-GTAGATGCCATTGGGCTGGTAGT-3',
正向內(nèi)引物(Wxmw-I-F)序列為5'-AACAACCCATACTTCAAAGGAACATC-3',
反向內(nèi)引物(Wxmw-I-R)序列為5'-TCTTGAGATCAATTGTAACTCCCCAT-3'。
A.6PCR反應(yīng)體系
20μLPCR反應(yīng)體系,包括2.0μL樣品DNA(10ng/μL),2.0μL引物等摩爾混合液(4pmol/μL/每條),
2.0μL10×PCR緩沖液(含MgCl2),0.4μLdNTP(2.5mmol/L),0.5μLTaq酶(5U/μL),13.1μL超純水。
2
DB32/T4056-2021
A.7PCR反應(yīng)程序
A.7.1Wxmq或Wxmp第4外顯子分子標(biāo)記的PCR反應(yīng)程序
95℃下預(yù)變性3min;95℃下變性30s,65℃退火30s,72℃下延伸1min,共33個(gè)循環(huán);72℃延
伸5min,4℃保存。反應(yīng)在PCR擴(kuò)增儀(熱循環(huán)儀)上進(jìn)行。
A.7.2Wxmq第5外顯子分子標(biāo)記的PCR反應(yīng)程序
95℃下預(yù)變性3min;95℃下變性30s,58℃退火30s,72℃下延伸2min,共33個(gè)循環(huán);72℃延
伸5min,4℃保存。反應(yīng)在PCR擴(kuò)增儀(熱循環(huán)儀)上進(jìn)行。
A.7.3Wxmw分子標(biāo)記的PCR反應(yīng)程序
95℃下預(yù)變性3min;95℃下變性30s,55℃退火30s,72℃下延伸1min,共33個(gè)循環(huán);72℃延
伸5min,4℃保存。反應(yīng)在PCR擴(kuò)增儀(熱循環(huán)儀)上進(jìn)行。
A.8PCR產(chǎn)物檢測
A.8.1瓊脂糖凝膠制備
在三角瓶中將瓊脂糖與1×TAE緩沖液按1.5%質(zhì)量比混合,煮沸至瓊脂糖顆粒完全溶解,按1:10000
(體積比)加入核酸染料,搖勻后倒入制膠槽托盤板上,插上樣品梳,冷卻凝固后拔出樣品梳,備用。
A.8.2上樣樣品制備
在20uL的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中加入4uL6×上樣緩沖液,混勻。
A.8.3電泳
將瓊脂糖凝膠放入電泳槽,加入1×TAE緩沖液至剛沒過凝膠,每個(gè)樣品孔加入5uL上樣樣品,以
20V/cm的電壓進(jìn)行電泳,電泳20min。
A.8.4凝膠成像
將電泳后的瓊脂糖凝膠放于凝膠成像系統(tǒng)的紫外光源下進(jìn)行PCR擴(kuò)增產(chǎn)物觀察,拍照備用。用成
對引物Wxmq-F/R擴(kuò)增得到的PCR條帶需割膠回收、回收試劑盒純化后,送測序公司進(jìn)行序列分析。
A.9結(jié)果分析
A.9.1分子標(biāo)記檢測結(jié)果分析
利用四引物Wxmq/Wxmp-O-F/O-R/I-F/I-R分子標(biāo)記可擴(kuò)增得到三種類型的DNA特征條帶(圖A.2),
擴(kuò)增得到439bp和292bpDNA條帶的樣品,證明含第4外顯子突變位點(diǎn);擴(kuò)增得到439bp和200bpDNA
條帶的樣品,證明不含此突變位點(diǎn),同時(shí)擴(kuò)增得到439bp、292bp和200bpDNA條帶的樣品,證明此突
變位點(diǎn)為雜合位點(diǎn)。
利用成對引物Wxmq-F/R分別作為測序引物,可獲得DNA條帶的核苷酸序列(圖A.3),如第5外
3
DB32/T4056-2021
顯子第52位為C堿基,證明含此突變位點(diǎn),如為T堿基,證明不含此突變位點(diǎn),如為T/C堿基疊加,
證明此突變位點(diǎn)為雜合位點(diǎn)。
利用四引物Wxmw-O-F/O-R/I-F/I-R可擴(kuò)增得到三種類型的DNA特征條帶(圖A.4):擴(kuò)增得到459bp
和301bpDNA條帶的樣品,證明含Wxmw突變位點(diǎn);擴(kuò)增得到459bp和209bpDNA條帶的樣品,證明
不含此突變位點(diǎn),同時(shí)擴(kuò)增得到459bp、301bp和209bpDNA條帶的樣品,證明此突變位點(diǎn)為雜合位點(diǎn)。
(M:分子量標(biāo)準(zhǔn);1,7-10為含第4外顯子突變位點(diǎn)的特征條帶,2-6為不含第4外顯子突變位點(diǎn)的特征
條帶,11-12為雜合位點(diǎn)的特征條帶)
圖A.2Wxmp或Wxmq第4外顯子突變位點(diǎn)的分子標(biāo)記檢測電泳圖譜
(2,4為含第5外顯子突變位點(diǎn)的特征序列,1,3,5-10為不含第5外顯子突變位點(diǎn)的特征序列,11-12為雜
合位點(diǎn)的特征序列)
圖A.3Wxmq第5外顯子突變位點(diǎn)的核苷酸序列分析
4
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 可充氣游泳池娛樂用品相關(guān)項(xiàng)目建議書
- 壓茶磚機(jī)相關(guān)項(xiàng)目實(shí)施方案
- 信號(hào)哨子相關(guān)項(xiàng)目實(shí)施方案
- 口述聽寫機(jī)項(xiàng)目評價(jià)分析報(bào)告
- 冰壺刷市場環(huán)境與對策分析
- 產(chǎn)業(yè)規(guī)劃和招商策劃方案
- Ethyl-8-chloro-4-oxo-4H-quinolizine-3-carboxlate-生命科學(xué)試劑-MCE
- EOS-d18-1-30-0-18-2-N-30-Linoleoyloxy-triacontanoyl-sphingosine-生命科學(xué)試劑-MCE
- DSPE-PEG-OH-MW-5000-生命科學(xué)試劑-MCE
- 增強(qiáng)男性功能的草藥膠囊商業(yè)發(fā)展計(jì)劃書
- 中醫(yī)定向透藥治療在臨床上的應(yīng)用試題及答案
- 2024年大連英歌石科技產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司招聘筆試沖刺題(帶答案解析)
- 部編版語文七年級(jí)上冊字詞匯總
- 2023年內(nèi)科規(guī)培生年度總結(jié)
- 小學(xué)語文文言文閱讀課件
- 北師大版 2024-2025學(xué)年四年級(jí)數(shù)學(xué)上冊典型例題系列第二單元:角度計(jì)算問題“基礎(chǔ)型”專項(xiàng)練習(xí)(原卷版+解析)
- 香奈兒營銷策略分析報(bào)告
- 2024年事業(yè)單位工勤技能考試題庫(含答案)
- 保護(hù)個(gè)人隱私的網(wǎng)絡(luò)安全
- 輸尿管內(nèi)支架的健康教育
- 暖菜寶行業(yè)分析
評論
0/150
提交評論