《DB32T 4056-2021優(yōu)良食味半糯粳稻品質(zhì)》

ICS65.020.20

CCSB22

DB32

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/T4056—2021

優(yōu)良食味半糯粳稻品質(zhì)

Qualityofsemi-glutinousjaponicaricewithgoodtaste

2021-06-03發(fā)布2021-07-03實(shí)施

江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB32/T4056-2021

I

DB32/T4056-2021

優(yōu)良食味半糯粳稻品質(zhì)

1范圍

本文件規(guī)定了優(yōu)良食味半糯粳稻品質(zhì)的術(shù)語和定義、質(zhì)量要求、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則及判定規(guī)則。

本文件適用于半糯粳稻品種的選育、鑒定、評價(jià)和推廣，適用于商品半糯粳稻的收購、加工和銷售。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB1350稻谷

GB/T1354大米

GB/T5490糧食檢驗(yàn)一般規(guī)則

GB/T5491糧食、油料檢驗(yàn)扦樣、分樣法

GB/T15682糧油檢驗(yàn)稻谷、大米蒸煮食用品質(zhì)感官評價(jià)方法

GB/T17891—2017優(yōu)質(zhì)稻谷

GB/T21719稻谷整精米率檢驗(yàn)法

GB/T22294糧油檢驗(yàn)大米膠稠度的測定

NY/T83米質(zhì)測定方法

NY/T593食用稻品種品質(zhì)

NY/T2639稻米直鏈淀粉的測定分光光度法

3術(shù)語和定義

GB1350、GB/T1354、GB/T17891和NY/T593界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

半糯粳稻semi-glutinousjaponicarice

稻米直鏈淀粉含量在2%~13%之間，含有低直鏈淀粉含量的Wx等位基因（如Wxmp、Wxmq、Wxmw

等）的粳稻。

3.2

優(yōu)良食味半糯粳稻semi-glutinousjaponicaricewithgoodtaste

品質(zhì)達(dá)到本標(biāo)準(zhǔn)4規(guī)定的質(zhì)量要求、品質(zhì)等級(jí)三級(jí)及以上的半糯粳稻。

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3.3

鑒別標(biāo)記identificationmolecularmarker

用于鑒別低直鏈淀粉含量基因（如Wxmp、Wxmq、Wxmw等）、經(jīng)PCR反應(yīng)擴(kuò)增出的特征性條帶或

序列，詳見附錄A。

4質(zhì)量要求

4.1基本質(zhì)量要求

雜質(zhì)含量、水分含量、黃粒米含量、谷外糙米含量、色澤氣味等基本質(zhì)量指標(biāo)應(yīng)符合GB1350粳

稻谷要求，不完善粒含量應(yīng)≤3%，異品種率應(yīng)≤2%。

4.2定等質(zhì)量指標(biāo)

在符合GB1350的基礎(chǔ)上，優(yōu)良食味半糯粳稻的定等質(zhì)量指標(biāo)見表1。

表1優(yōu)良食味半糯粳稻品質(zhì)等級(jí)

等級(jí)

指標(biāo)

一二三

整精米率/%≥67.061.055.0

透明度/級(jí)≤123

直鏈淀粉（干基）含量/%8.0~13.0

膠稠度/mm≥908070

食味值/分≥908580

注1：等級(jí)評定須在相同的水分條件下進(jìn)行。

5檢驗(yàn)方法

5.1低直鏈淀粉含量基因Wxmp、Wxmq、Wxmw的檢驗(yàn)按照附錄A執(zhí)行。

5.2不完善粒含量檢驗(yàn)：按GB/T17891—2017，6.5執(zhí)行。

5.3異品種率檢驗(yàn)：按照GB/T17891—2017，附錄B執(zhí)行。

5.4整精米率檢驗(yàn)：按照GB/T21719執(zhí)行。

5.5透明度檢驗(yàn)：按照NY/T83執(zhí)行。

5.6直鏈淀粉（干基）含量檢驗(yàn)：按照NY/T2639執(zhí)行。

5.7膠稠度檢驗(yàn)：按照GB/T22294執(zhí)行。

5.8食味值檢驗(yàn)：按照GB/T15682執(zhí)行。

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6檢驗(yàn)規(guī)則

6.1扦樣、分樣按照GB/T5491執(zhí)行。

6.2檢驗(yàn)的一般規(guī)則按照GB/T5490執(zhí)行。

7判定規(guī)則

7.1類型判定

含有低直鏈淀粉含量基因（如Wxmp、Wxmq、Wxmw等）的，判定為半糯粳稻。

7.2等級(jí)判定

達(dá)到本標(biāo)準(zhǔn)4.1規(guī)定的基本質(zhì)量要求，表1中5項(xiàng)定級(jí)指標(biāo)全部達(dá)到該等級(jí)要求的，則判定為該等

級(jí)半糯粳稻。5項(xiàng)定級(jí)指標(biāo)中有1項(xiàng)達(dá)不到該等級(jí)質(zhì)量要求的，逐級(jí)降至符合的等級(jí)；不符合最低等級(jí)

指標(biāo)要求的，為非等級(jí)產(chǎn)品。基本質(zhì)量要求有1項(xiàng)及以上不符合的，為非等級(jí)產(chǎn)品。

7.3等級(jí)分類

品質(zhì)等級(jí)達(dá)三級(jí)及以上的判定為優(yōu)良食味半糯粳稻，低于三級(jí)的判定為普通半糯粳稻。

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附錄A

（規(guī)范性）

低直鏈淀粉含量基因Wxmp、Wxmq和Wxmw分子標(biāo)記檢測方法

A.1原理

低直鏈淀粉含量突變基因Wxmp、Wxmq和Wxmw是在Wxb基因的第4、第5和第6外顯子發(fā)生了單堿基突

變（圖A.1）。僅在第4外顯子第53位堿基發(fā)生G-A突變的為Wxmp基因，同時(shí)在第4外顯子第53位堿基發(fā)

生G-A突變和第5外顯子第52位堿基發(fā)生T-C突變的為Wxmq基因，僅在第6外顯子第62位堿基發(fā)生A/C突變

的為Wxmw基因。利用四引物擴(kuò)增受阻突變體系PCR技術(shù)可針對第4和第6外顯子的變異位點(diǎn)進(jìn)行分子標(biāo)

記檢測；利用成對引物可針對第5外顯子的變異位點(diǎn)進(jìn)行PCR擴(kuò)增和序列分析，根據(jù)突變位點(diǎn)的有無和

類型，來判斷是否含有突變基因Wxmp、Wxmq和Wxmw。

圖A.1Wx基因的結(jié)構(gòu)及Wxmp、Wxmq和Wxmp基因突變位點(diǎn)示意圖

A.2儀器設(shè)備

高速冷凍離心機(jī)、PCR擴(kuò)增儀、超純水系統(tǒng)、組織研磨儀、瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)及制膠附件、凝膠

成像系統(tǒng)、微量可調(diào)移液器（2uL、10uL、100uL、1000uL）。

A.3試劑與溶液

A.3.1DNA提取試劑

十六烷基三甲基溴化銨、三氯甲烷、異戊醇、異丙醇、乙二胺四乙酸二鈉、三羥甲基氨基甲烷、鹽

酸、氫氧化鈉、氯化鈉。

A.3.2PCR擴(kuò)增試劑

DNA、引物、dNTP、Taq酶、10×PCR緩沖液、超純水。

A.3.3電泳試劑

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6×上樣緩沖液、DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)、1×TAE電泳緩沖液、核酸染料。

A.3.4DNA回收試劑

凝膠回收試劑盒。

A.4DNA提取

稻谷出苗后在三葉期按單株取水稻葉片，提取基因組DNA。DNA提取方法及試劑配制方法按NT/T

1433執(zhí)行。

A.5分子標(biāo)記序列

A.5.1用于鑒定Wxmq或Wxmp的分子標(biāo)記序列

利用四引物擴(kuò)增受阻突變體系PCR技術(shù)可對Wxmq或Wxmp第4外顯子第53位堿基發(fā)生的G-A突

變進(jìn)行分子標(biāo)記鑒定，四引物序列為：

正向外引物（Wxmq/Wxmp-O-F）序列為5'-ATGTTGTGTTCTTGTGTTCTTTGCAGGC-3'，

反向外引物（Wxmq/Wxmp-O-R）序列為5'-GTAGATCTTCTCACCGGTCTTTCCCCAA-3'，

正向內(nèi)引物（Wxmq/Wxmp-I-F）序列為5'-GGGTGAGGTTTTTCCATTGCTACAATCG-3'，

反向內(nèi)引物（Wxmq/Wxmp-I-R）序列為5'-GTCGATGAACACACGGTCGACTCAAT-3'。

利用成對引物PCR擴(kuò)增法可對Wxmq第5外顯子第52位堿基發(fā)生的T-C突變進(jìn)行分子標(biāo)記鑒定，

成對引物序列為：

正向引物（Wxmq-F）序列為5'-GGCTTCACGCAACGGCGCTACAAATAG-3'，

反向引物（Wxmq-R）序列為5'-CCATTCGCCTGCAAAGAACACAAGAAC-3'。

A.5.2用于鑒定Wxmw的分子標(biāo)記序列

利用四引物擴(kuò)增受阻突變體系PCR技術(shù)可對Wxmw第6外顯子第62位堿基發(fā)生的A/C突變進(jìn)行分

子標(biāo)記鑒定，四引物序列為：

正向外引物（Wxmw-O-F）序列為5'-GCTTAGCTTCCACTGGTGATTTCA-3'，

反向外引物（Wxmw-O-R）序列為5'-GTAGATGCCATTGGGCTGGTAGT-3'，

正向內(nèi)引物（Wxmw-I-F）序列為5'-AACAACCCATACTTCAAAGGAACATC-3'，

反向內(nèi)引物（Wxmw-I-R）序列為5'-TCTTGAGATCAATTGTAACTCCCCAT-3'。

A.6PCR反應(yīng)體系

20μLPCR反應(yīng)體系，包括2.0μL樣品DNA(10ng/μL)，2.0μL引物等摩爾混合液(4pmol/μL/每條)，

2.0μL10×PCR緩沖液(含MgCl2)，0.4μLdNTP(2.5mmol/L)，0.5μLTaq酶(5U/μL)，13.1μL超純水。

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A.7PCR反應(yīng)程序

A.7.1Wxmq或Wxmp第4外顯子分子標(biāo)記的PCR反應(yīng)程序

95℃下預(yù)變性3min；95℃下變性30s，65℃退火30s，72℃下延伸1min，共33個(gè)循環(huán)；72℃延

伸5min，4℃保存。反應(yīng)在PCR擴(kuò)增儀（熱循環(huán)儀）上進(jìn)行。

A.7.2Wxmq第5外顯子分子標(biāo)記的PCR反應(yīng)程序

95℃下預(yù)變性3min；95℃下變性30s，58℃退火30s，72℃下延伸2min，共33個(gè)循環(huán)；72℃延

伸5min，4℃保存。反應(yīng)在PCR擴(kuò)增儀（熱循環(huán)儀）上進(jìn)行。

A.7.3Wxmw分子標(biāo)記的PCR反應(yīng)程序

95℃下預(yù)變性3min；95℃下變性30s，55℃退火30s，72℃下延伸1min，共33個(gè)循環(huán)；72℃延

伸5min，4℃保存。反應(yīng)在PCR擴(kuò)增儀（熱循環(huán)儀）上進(jìn)行。

A.8PCR產(chǎn)物檢測

A.8.1瓊脂糖凝膠制備

在三角瓶中將瓊脂糖與1×TAE緩沖液按1.5%質(zhì)量比混合，煮沸至瓊脂糖顆粒完全溶解，按1：10000

（體積比）加入核酸染料，搖勻后倒入制膠槽托盤板上，插上樣品梳，冷卻凝固后拔出樣品梳，備用。

A.8.2上樣樣品制備

在20uL的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中加入4uL6×上樣緩沖液，混勻。

A.8.3電泳

將瓊脂糖凝膠放入電泳槽，加入1×TAE緩沖液至剛沒過凝膠，每個(gè)樣品孔加入5uL上樣樣品，以

20V/cm的電壓進(jìn)行電泳，電泳20min。

A.8.4凝膠成像

將電泳后的瓊脂糖凝膠放于凝膠成像系統(tǒng)的紫外光源下進(jìn)行PCR擴(kuò)增產(chǎn)物觀察，拍照備用。用成

對引物Wxmq-F/R擴(kuò)增得到的PCR條帶需割膠回收、回收試劑盒純化后，送測序公司進(jìn)行序列分析。

A.9結(jié)果分析

A.9.1分子標(biāo)記檢測結(jié)果分析

利用四引物Wxmq/Wxmp-O-F/O-R/I-F/I-R分子標(biāo)記可擴(kuò)增得到三種類型的DNA特征條帶（圖A.2），

擴(kuò)增得到439bp和292bpDNA條帶的樣品，證明含第4外顯子突變位點(diǎn)；擴(kuò)增得到439bp和200bpDNA

條帶的樣品，證明不含此突變位點(diǎn)，同時(shí)擴(kuò)增得到439bp、292bp和200bpDNA條帶的樣品，證明此突

變位點(diǎn)為雜合位點(diǎn)。

利用成對引物Wxmq-F/R分別作為測序引物，可獲得DNA條帶的核苷酸序列（圖A.3），如第5外

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顯子第52位為C堿基，證明含此突變位點(diǎn)，如為T堿基，證明不含此突變位點(diǎn)，如為T/C堿基疊加，

證明此突變位點(diǎn)為雜合位點(diǎn)。

利用四引物Wxmw-O-F/O-R/I-F/I-R可擴(kuò)增得到三種類型的DNA特征條帶（圖A.4）：擴(kuò)增得到459bp

和301bpDNA條帶的樣品，證明含Wxmw突變位點(diǎn)；擴(kuò)增得到459bp和209bpDNA條帶的樣品，證明

不含此突變位點(diǎn)，同時(shí)擴(kuò)增得到459bp、301bp和209bpDNA條帶的樣品，證明此突變位點(diǎn)為雜合位點(diǎn)。

（M：分子量標(biāo)準(zhǔn)；1,7-10為含第4外顯子突變位點(diǎn)的特征條帶，2-6為不含第4外顯子突變位點(diǎn)的特征

條帶，11-12為雜合位點(diǎn)的特征條帶）

圖A.2Wxmp或Wxmq第4外顯子突變位點(diǎn)的分子標(biāo)記檢測電泳圖譜

（2,4為含第5外顯子突變位點(diǎn)的特征序列，1,3,5-10為不含第5外顯子突變位點(diǎn)的特征序列，11-12為雜

合位點(diǎn)的特征序列）

圖A.3Wxmq第5外顯子突變位點(diǎn)的核苷酸序列分析

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