低溫對(duì)植物的傷害

低溫對(duì)植物的損害試驗(yàn)原理植物在患病低溫?fù)p害后，植物原生質(zhì)膜，選擇性喪失，對(duì)物質(zhì)的透性發(fā)生轉(zhuǎn)變，使得一些鹽類，或有機(jī)物從細(xì)胞中滲出，進(jìn)入四周溶液中，通過(guò)電導(dǎo)度的測(cè)量和糖的顯色反響，即可見(jiàn)到外界溶液中電介質(zhì)和糖類的增加。材料、儀器與試劑：儀器：電導(dǎo)率儀、火焰光度計(jì)、冰箱、小燒杯、鉆孔器、大試管、水浴鍋、移液管。2 試劑：蒽酮、濃HSO 2 方法與步驟：取植物葉片置于冰箱內(nèi)，放置2、4、6小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間，取出用直徑約1cm403遍，以除去切口汁液，置于盛有20ml蒸餾水的小燒杯中。另取未經(jīng)低溫處理的葉片，，同樣鉆取40個(gè)圓片，洗滌后，置于另一盛有20ml蒸餾水的小燒杯種，置于室溫中讓其浸泡數(shù)小時(shí)〔兩小時(shí)以上〕。1mlHSO2 4

10分鐘，如有糖存在，可產(chǎn)生綠色，綠色深淺，即表示糖分的多少。的電導(dǎo)度，電導(dǎo)度越大則溶液中的電解質(zhì)含量越高。將滲出液用火焰光度計(jì)測(cè)滲出液中的K+或其它離子濃度。比較含量的差異。思考題：滲出液離子含量有何不同？ 還有那些其它方法可以測(cè)量植物患病低溫?fù)p害的程度？有何實(shí)踐意義？呼吸速率的測(cè)定—廣口瓶法試驗(yàn)?zāi)康暮粑俾适侵参锷顒?dòng)強(qiáng)弱的重要指標(biāo)之一，常用于植物生理爭(zhēng)論及農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實(shí)踐等方面。測(cè)定呼吸速率的方法雖然很多，但不外乎測(cè)定二氧化碳的釋放量和氧氣的吸取量?jī)深惙椒?。本試?yàn)用廣口瓶法測(cè)定植物的呼吸速率，并比較小麥吸脹的種子與幼苗的呼吸速率。試驗(yàn)原理密閉容器中參加肯定量堿液〔一般用氫氧化鋇〕，并懸掛植物材料，則植物材料呼吸放出的二氧化碳可為容器中氫氧化鋇所吸取，然后用草酸滴定剩余的氫氧化鋇，從空白和樣品二者消耗的草酸溶液之差，可計(jì)算出呼吸釋放的二氧化碳量，其反響式如下：Ba(OH)

+CO

→BaCO

↓+HO2Ba(OH)+H

2CO→BaC

3 2O↓+2HO2

2 4

器24 劑2植物材料：吸脹小麥種、芽長(zhǎng)0.5cm左右的小麥種子儀器：廣口瓶裝置〔見(jiàn)圖2〕、臺(tái)秤、酸式滴定管、滴定管架一套試劑：1/44mol/L草酸溶液：準(zhǔn)確稱取重結(jié)晶HCO2 2 4

2H

O2.8651g，2溶于蒸餾水中，定容至1000ml，每ml相當(dāng)于1mgCO。20.05mol/L氫氧化鋇溶液：Ba(OH)2

8.6g或Ba(OH)2

8H2

O15.78g溶于1000ml蒸餾水中。如有渾濁待溶液澄清后使用。酚酞指示劑：稱取1g酚酞，溶于100ml95%乙醇中貯于滴瓶中。試驗(yàn)步驟 取500ml廣口瓶?jī)芍?，裝置如下圖。瓶口加一三孔橡皮塞：一孔插入裝有堿,定用，試驗(yàn)時(shí)插一小橡皮塞，塞下懸掛一尼龍紗小筐供裝植物材料用。 20ml，再塞進(jìn)登記草酸溶液用量〔ml〕,即為空白滴定值。凈廣口瓶，重加20ml100粒同時(shí)稱出重量裝入小筐中，快速掛于橡皮塞下，塞好塞子。另一瓶取100粒芽長(zhǎng)0.5cm左右的小麥種子，同時(shí)稱出重量裝入小筐中，操作同前。開(kāi)頭記錄時(shí)間，其間輕輕搖30拔出小橡皮塞，參加三滴酚酞，用草酸滴定同前，記錄草酸溶液用量，即為材料滴定值。計(jì)算呼吸速率：水勢(shì)的測(cè)定試驗(yàn)?zāi)康?0%~90%況對(duì)植物生理的生理活動(dòng)具有重要影響。植物水勢(shì)是植物的水分狀況的重要指標(biāo)，對(duì)于植物水分生理的科學(xué)爭(zhēng)論以及農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實(shí)踐具有重要指導(dǎo)意義。水勢(shì)是指偏摩爾體積水的化學(xué)勢(shì)，規(guī)定純水的水勢(shì)為零，水分總是從水勢(shì)高處流向水勢(shì)低處，依據(jù)這一原理，可以用小液流法、露點(diǎn)微伏壓計(jì)法等測(cè)定植物組織的水勢(shì)。小液流法試驗(yàn)原理將植物材料切成小塊，浸泡在不同濃度的蔗糖溶液中，由于植物材料與蔗糖溶液間水勢(shì)梯度的存在，導(dǎo)致蔗糖溶液從植物材料中吸水、失水或保持動(dòng)態(tài)平衡，從而使蔗糖溶液變稀、變濃或保持濃度不變；由此可以找到與植物材料水勢(shì)相當(dāng)?shù)恼崽侨芤簼舛?。算出植物組織的水勢(shì)。試驗(yàn)材料與試劑中試管；青霉素小瓶；彎頭毛細(xì)吸管；單面刀片；打孔器；解剖針；移液管；鑷子；蔗糖；甲基蘭試驗(yàn)步驟配制一系列不同濃度的蔗糖溶液，濃度分別為0.10.20.30.40.50.6M。取6只中試管編號(hào)，分別參加10ml不同濃度的蔗糖溶液；同時(shí)取6個(gè)青霉素小瓶，編號(hào)后分別參加1ml不同濃度的蔗糖溶液。取植物材料，用打孔器打成直徑0.7cm左右的小條，用單面刀片切成2~3mm厚的小圓周片，分別參加裝有不同濃度蔗糖溶液的青霉素小瓶中，每個(gè)小瓶中放5片(依植物材料的不同可做不同處理)，加塞，放置30min，其間搖動(dòng)數(shù)次以加速溶液與植物組織間的水分交換。溶液呈藍(lán)色。觀看記錄小液流的方向。試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果分析假設(shè)小液流上升，說(shuō)明組織水勢(shì)高于蔗糖溶液水勢(shì)，組織排水，蔗糖濃度變低；假設(shè)小液流下降，說(shuō)明組織水勢(shì)低于蔗糖溶液水勢(shì)，組織吸水，蔗糖濃度變大；假設(shè)小液流不動(dòng)，說(shuō)明組織水勢(shì)與蔗糖溶液水勢(shì)一樣，二者間無(wú)水分量的交換。表：蔗糖溶液濃度與其滲透勢(shì)留意影響結(jié)果。彎頭毛細(xì)吸管要各個(gè)濃度專用葉綠素a與葉綠素b含量的測(cè)定試驗(yàn)?zāi)康暮鸵饬x葉綠素a與葉綠素b是高等植物葉綠體色素的重要組分，約占到葉綠體色素總量的75%左右。葉綠素在光合作用中起到吸取光能、傳遞光能植物的光合速率親熱相關(guān)，在肯定范圍內(nèi)，光合速率隨葉綠素含量的增加而上升。另外，葉綠素的含量是植物生長(zhǎng)狀態(tài)的一個(gè)反映，一些環(huán)境因素如干旱、鹽漬、低溫、大氣污染、元素缺乏都可以影響葉綠素的含量與組成，并因之影響植物的光合速率。因此葉綠素含量a與葉綠素b含量的測(cè)定對(duì)植物的光合生理與逆境生理具有重要意義。試驗(yàn)原理葉綠素提取液中同時(shí)含有葉綠素a和葉綠素b，二者的吸取光譜雖有不同，但又存在著明顯的重疊，在不分別葉綠素a和葉綠素b的狀況下同時(shí)測(cè)定葉綠素a和葉綠素b的濃度，可分別測(cè)定在663nm和645nm〔分ab在紅光區(qū)的吸取峰〕的光吸取，然后依據(jù)Lambert-Beer定律，計(jì)算出提取液中葉綠素a和葉綠素b的濃度。A663=82.04Ca+9.27Cb 〔1〕A645=16.75Ca+45.60Cb 〔2〕公式中Ca為葉綠素a的濃度，Cb為葉綠素b濃〔單位為g/L〕，82.04和9.27 分別是葉綠素a和葉綠素b在663nm下的比吸取系數(shù)〔濃度為1g/L，光路寬度為1cm時(shí)的吸光度值〕；16.75和45.60分別是葉綠素a和葉綠素b在645nm下的比吸取系數(shù)。即混合液在某一波長(zhǎng)下的光吸取等于各組分在此波長(zhǎng)下的光吸取之和。將上式整理，可以得到下式：Ca=0.0127A663-0.00269A645 〔3〕Cb=0.0229A

-0.00468A645

663

〔4〕將葉綠素的濃度改為mg/L，則上式變?yōu)椋篊a=12.7A

-2.69A663

645

〔5〕Cb=22.9A

-4.68A

〔6〕CT=Ca+Cb=8.02A

645+20.21A663

645

663〔7〕CT為葉綠素的總濃度試驗(yàn)儀器及材料試驗(yàn)材料：菠菜或其它綠色植物：UV-1700分光光度計(jì)；天平；剪刀；打孔器；研缽；移液CaCO；3試驗(yàn)步驟提取葉綠素選取有代表性的菠菜葉片數(shù)張，于天平上稱取0.5g〔也可用打孔器打取肯定數(shù)量的葉圓片，計(jì)算總的葉面積，剪碎后置于研體中，參加5ml80%少許CaCO3和石英砂。認(rèn)真研磨成勻漿，用濾斗過(guò)濾到10ml量筒中，留意在研缽中參加少量80%丙酮將研缽洗凈，一并轉(zhuǎn)入研缽中過(guò)濾到量筒內(nèi)，并定容至10ml。將量筒內(nèi)的提取液混勻，用移液管留神抽取5ml轉(zhuǎn)入25ml量筒中再參加80丙酮定容至25l 最終植物材料與提取液的比例為W：＝0.5：5＝1：10，葉色深的植物材料比例要稀釋到：20。測(cè)量光吸取利用722分光光度計(jì)或UV1700645nm663nm下的吸光度。結(jié)果分析將測(cè)得的數(shù)值代入到公式〔5〕〔6〕〔7〕a、葉綠素b綠素的含量：葉綠素a 含量(mg/g 鮮重)＝Ca×50ml〔總體積數(shù)〕×1ml/1000ml/L÷0.5g=0.1Ca葉綠素b含量(mg/g鮮重)＝0.1Cb爭(zhēng)論：葉綠素在蘭光區(qū)的吸取峰高于紅光區(qū)的吸取峰，為何不用蘭光區(qū)的光吸取來(lái)測(cè)定葉綠素的含量。計(jì)算葉綠素a與葉綠素b含量的比值，可以得到什么結(jié)論？比較陽(yáng)生植物和陰生植物的葉綠素a和葉綠素b的含量以及比例，可以得到什么結(jié)論？葉綠體色素的提取、分別及理化性質(zhì)的鑒定試驗(yàn)原理葉綠體色素是植物吸取太陽(yáng)光能進(jìn)展光合作用的重要物質(zhì)，主要有葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素和葉黃素組成。從植物葉片中提取和分別葉綠體色素是對(duì)其生疏和了解的前提。利用葉綠體色素能溶于有機(jī)溶劑的特性，可用95%乙醇提取。分別色素的方法有多種，如紙層析、柱層析等。紙層析是其中最簡(jiǎn)潔的一種。當(dāng)溶劑不斷地從層析濾紙上流過(guò)時(shí)，由于混合色素中各種成分在兩相(即流淌相和固定相)間具有不同的安排系數(shù)，它們的移動(dòng)速度不同，使樣品中的各種成分得到分別。材料、器材與試劑植物材料依據(jù)季節(jié)從市場(chǎng)上購(gòu)置穎的菠菜，芹菜或油菜，選取其中之一穎綠葉作為試驗(yàn)材料。也可以從校園內(nèi)采集其他植物穎綠葉。器材大試管〔20*20杯、華濾紙、小試管假設(shè)干、分光計(jì)、酒精燈、吸耳球、移液管、電吹風(fēng)、毛細(xì)管試劑95%乙醇、碳酸鈣、石英砂、汽油、苯、KOH、甲醇、醋酸銅、鹽酸試驗(yàn)步驟葉綠體色素的提取與分別①稱取穎去大葉脈的菠菜葉片〔或其他植物葉〕2g，剪碎放入研缽中，參加乙醇5ml、少許CaCO3(中和細(xì)胞中的酸防止Mg2+從葉綠素中心釋放)和石英砂，研磨成勻漿，再參加適量的乙醇〔5-10m，然后用漏斗過(guò)濾，即得葉綠體色素液。②取預(yù)備好的濾紙條〔2*20cm〕,將其一端剪去兩側(cè)，中間留一長(zhǎng)約1.5cm，寬約0.5cm的窄條。③用毛細(xì)管吸取葉綠體色素提取液點(diǎn)于濾紙的下端窄條的上方中心，留意下一次所1-2次。5-10ml(:丙酮:20:2:1的混合溶液可作層析液)〔色素點(diǎn)要略高于液面，濾紙條邊緣不行遇到試管壁〕，蓋緊軟木塞，直立于陰暗處〔或試管外套一黑紙?zhí)?。⑤?jīng)0.5-1h后，觀看分別后色素帶的分布。最上端橙黃色的是胡蘿卜素，其次為葉ab.葉綠體色素的理化性質(zhì)①葉綠素的熒光現(xiàn)象：1支試管中，用反射光和透射光觀看的熒光顏色。②光對(duì)葉綠素的破壞作用：取葉綠體色素提取液少許，分裝兩支試管中，一支放在黑暗處〔或用黑紙?zhí)装硪恢Х旁趶?qiáng)光下〔陽(yáng)光下，經(jīng)過(guò)2-3h試管中溶液的顏色有何不同？③黃色素〔胡蘿卜素和葉黃素〕與綠色素〔葉綠素〕的分別：取葉綠體色素提取液5ml,加到盛有2mlKOH甲醇溶液的分液漏斗中，搖動(dòng)分液漏斗，參加1mlDW，再參加5ml苯，輕輕搖動(dòng)分液漏斗，靜置片刻，溶液即分為兩層。上層是黃色素，下層是綠色素，分別保存于試管中。④觀看色素溶液的吸取光譜：調(diào)整分光計(jì)，觀看日光的光譜。觀看下層綠色局部的吸取光譜觀看上層黃色局部的吸取光譜。植物光合速率的測(cè)定目的意義光合作用是植物體內(nèi)最為重要的同化過(guò)程，光合速率的測(cè)量是爭(zhēng)論植物的光合性能、診斷植物光合機(jī)構(gòu)的運(yùn)轉(zhuǎn)、爭(zhēng)論環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響的重要方法。測(cè)定方法依據(jù)光合作用的方程式：HO+CO2 2

CHO+O2 2測(cè)定方法可分為三大類測(cè)定干重的增加〔半葉法、改進(jìn)半葉法〕測(cè)定氧的釋放〔葉園片氧電極法〕測(cè)定CO2的吸取〔氣流法〕在這三種方法中，方法〔1〕過(guò)于粗糙，誤差輕大而牢靠性差，且過(guò)于耗時(shí)，僅可用于驗(yàn)證性試驗(yàn)；方法〔2〕通過(guò)測(cè)定液體中的含氧量的連續(xù)變化來(lái)測(cè)定光合物的光合速率，具有較高的靈敏度，適應(yīng)于試驗(yàn)室中使用；方法〔3〕通過(guò)直接測(cè)定活體葉片的CO2交換，可以快速準(zhǔn)確地測(cè)出光合速率，近年來(lái)便攜式光合作2轉(zhuǎn)變?nèi)~室的光強(qiáng)、CO濃度、濕度，還可以格外快速便利地測(cè)定植物的CO2補(bǔ)償2CO2飽和點(diǎn)、光補(bǔ)償點(diǎn)、光飽和點(diǎn)、植物的羧化效率、表觀光合量子效率、蒸騰速率等指標(biāo)。在爭(zhēng)論逆境生理、生態(tài)生理中得到了廣泛地利用。氣流法設(shè)備：紅外氣體———IRGA〔infraredgasanalyzer〕原理：任何具非對(duì)稱性的氣體分子，都有紅外吸取，如CO、2HO、NO、SO等，在肯定濃度內(nèi)，其紅外吸取與其濃度成2 2 2線性關(guān)系，由此可依據(jù)其紅外吸取量測(cè)出其濃度。CIRAS－2 便攜式光合作用系統(tǒng)系統(tǒng)主要組成調(diào)整葉面積主機(jī)：氣路吸取管IRGA：4個(gè)，分別測(cè)定參比室與葉室的CO2與H2O的濃度，范圍0~9999ppmCO2調(diào)整器：可供給穩(wěn)定的CO2，范圍0~2023ppm電池氣路設(shè)計(jì)原理簡(jiǎn)易圖測(cè)量參數(shù)可測(cè)量葉室、參比室的CO

、HO濃度、溫度、濕度、氣壓、2 2光合速率、蒸騰速率、氣孔導(dǎo)度、葉肉細(xì)胞間隙CO數(shù)十個(gè)指標(biāo)。

濃度等2可由此測(cè)得植物的光合速率、蒸騰速率、呼吸速率、CO補(bǔ)2償點(diǎn)、飽和點(diǎn)、光補(bǔ)償點(diǎn)、飽和點(diǎn)、羧化效率、表觀光合量子效率等多種參數(shù)試驗(yàn)前的預(yù)備：

簡(jiǎn)要使用說(shuō)明主機(jī)電池充電、光源蓄電池充電、掌上電腦充電–CO吸附劑〔Ca(OH)、吸水劑〔CaCl〕的檢查與更換–2 2 2試驗(yàn)材料玉米或其它植物，將玉米種子充分吸漲后播種于細(xì)砂中，出苗后澆以Hoagland培育液，長(zhǎng)至5葉期時(shí)可用于做試驗(yàn)。試驗(yàn)步驟主機(jī)與葉室連接如需CO2調(diào)整器則安裝CO2調(diào)整器如需人工光源則安裝光源及光源蓄電池翻開(kāi)光合儀主機(jī)電源翻開(kāi)電腦，進(jìn)入Ciras掌握功能Ciras登陸進(jìn)入操作界面，進(jìn)展系統(tǒng)設(shè)置，設(shè)定葉室參數(shù)，進(jìn)展各項(xiàng)測(cè)定，記錄結(jié)果。關(guān)閉系統(tǒng)關(guān)閉Ciras系統(tǒng)、Ciras電源、關(guān)閉光源、光源電源、關(guān)閉電腦結(jié)果輸出：測(cè)定的結(jié)果儲(chǔ)存于掌上電腦中，可以通過(guò)ActiveSync通訊軟件將掌上電腦連到臺(tái)式機(jī)中，將結(jié)果輸出到臺(tái)式機(jī)中，用Excel軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)展分析，并可打印出來(lái)。結(jié)果分析留意事項(xiàng)25米以外，以防止CO濃度的波動(dòng)。而在室內(nèi)測(cè)定時(shí)，空氣須來(lái)自室外，2或最好利用壓縮氣體鋼瓶供給CO2

CO2

掌握器掌握CO2

濃度。在測(cè)定植物的光合速率前須對(duì)植物進(jìn)展光適應(yīng)，使其氣孔處于開(kāi)放狀態(tài)。試驗(yàn)后須松開(kāi)葉室，使葉室密封墊恢復(fù)正常狀態(tài)。植物灰分元素的分析試驗(yàn)?zāi)康闹参矬w內(nèi)含有大量礦質(zhì)元素，通過(guò)對(duì)植物體內(nèi)礦質(zhì)元素的分析，可以了解植物對(duì)礦質(zhì)元素的吸取和利用，有助于制定合理施肥打算。本試驗(yàn)練習(xí)定性測(cè)定植物組織內(nèi)的礦質(zhì)元素。試驗(yàn)原理1：獲得礦質(zhì)元素穎材料 水分以氣態(tài)跑掉2：分析礦質(zhì)元素通常利用灰分元素與特別試劑的專一性反響，能夠產(chǎn)生肯定外形的晶體和顏色，就可以在顯微鏡下作定性鑒定。設(shè)備與材料顯微鏡馬伏爐玻璃棒載玻片蓋玻片白磁板黑磁板烘箱臺(tái)稱1%鹽酸1%硫酸1%氨水1%磷酸氫二鈉1%硝酸鍶1%黃血鹽1%KCl植物葉片

試驗(yàn)步驟植物材料的灰化稱取50g2100~105℃烘箱中約30~60min，然后放于坩堝中于550℃約6小時(shí)灰化至白色。灰分溶液的預(yù)備少量灰分溶解于1－2ml蒸餾水中，用于鑒定氯元素。少量灰分溶解于3－4ml10%HCl中，用于鑒定其它元素?；曳衷氐蔫b定氯取干凈黑磁板，加上一滴灰分元素溶液，再參加一滴1%AgNO，看生成的AgNO

沉淀。3 3鉀取灰分元素一滴參加干凈載玻片上，再加上一滴鉀試劑混合，蓋上蓋玻片，數(shù)分鐘后，于顯微鏡下觀看有無(wú)鉛黑色的鉛銅亞硝酸鉀結(jié)晶，繪簡(jiǎn)圖。鈣取灰分元素一滴參加干凈載玻片上，再加上一滴1%硫酸混合，蓋上蓋玻片，數(shù)分鐘后，于顯微鏡下觀看石膏的針狀結(jié)晶簇，繪簡(jiǎn)圖。鎂11%1%磷酸氫二鈉，生成磷酸鎂氨鹽，結(jié)晶有雪花、星星、箱子、屋頂?shù)韧庑?，繪簡(jiǎn)圖。磷取灰分元素一滴參加干凈載玻片上，再加上一滴1%磷鉬酸銨結(jié)晶，且顏色漸漸變綠，繪簡(jiǎn)圖硫取灰分元素一滴參加干凈載玻片上，再加上一滴1%硝酸鍶，生成硫酸鍶結(jié)晶，繪簡(jiǎn)圖。鐵取灰分元素一滴參加干凈白磁板上，再加上一滴黃血鹽，生成蘭色普魯士蘭。留意滴加灰分及試劑時(shí)滴管勿相互污染。加后放蓋玻片由于結(jié)晶的形成需要時(shí)間，故須幾分鐘后觀看。植物溶液培育與缺素癥的觀看試驗(yàn)?zāi)康臓?zhēng)論植物礦質(zhì)養(yǎng)分培育的方法，觀看植物在缺乏N、P、K、Ca、Mg、Fe等礦質(zhì)元素時(shí)的生理病癥。試驗(yàn)原理當(dāng)植物有某些必需的礦物質(zhì)元素的適量供給時(shí)，才能正常的生長(zhǎng)發(fā)育，如缺少某一元素，便表現(xiàn)出缺素癥，把這些必需的礦物質(zhì)元素用適當(dāng)?shù)臒o(wú)機(jī)鹽配成養(yǎng)分液，即能使植物正常生長(zhǎng)，這就是溶液培育。設(shè)備與材料儀器：⑴燒杯，250ml、500ml各一個(gè)；⑵刻度吸管，5ml10支、1ml1支⑶量筒，1000ml1個(gè)；(4〕黑色蠟光紙適量；(5)周密PH試紙〔PH5-6〕或廣泛PH指示劑；(6)搪瓷盤〔帶蓋〕1個(gè)；石英砂適量；培育瓶〔陶質(zhì)盆或塑料廣口瓶〕8個(gè)；(9)，500ml11個(gè)。試劑：⑴硝酸鉀； ⑵硫酸鎂； ⑶磷酸二氫鉀；⑷硫酸鉀； ⑸硫酸鈉； ⑹磷酸二氫鈉；⑺硝酸鈉；⑻硝酸鈣；⑼氯化鈣； ⑽硫酸亞鐵； ⑾硼酸；⑿氯化錳；⒀硫酸銅； ⒁硫酸鋅； ⒂鉬酸；⒃鹽酸；⒄乙二胺四乙酸二鈉〔EDTA-。培苗：

試驗(yàn)步驟用搪瓷盤裝入肯定量的石英砂或干凈的河沙，將已浸種一夜的玉米〔或番茄〕種子等均勻地排列在砂面上，再掩蓋一層石英砂，保持潮濕，然后放置在溫和處發(fā)芽。第一片真葉完全展開(kāi)后，選擇生長(zhǎng)全都的幼苗，留神地移植出來(lái)待用，移植時(shí)注意勿損傷根系。配制貯備液微量元素貯備按以下配方配制：稱取HBO 2.86g3 4MnCl·4HO 1.81g2 2CuSO·5HO 0.08g4 2ZnSO·7HO 0.22g4 2HMoO·HO 0.09g,2 4 2缺素培育液的配制取7個(gè)1000ml種缺素培育液1000mlpH6-7，貼上標(biāo)簽，寫明日期。然后把各瓶用黑色蠟光紙或黑紙包起來(lái)〔黑面對(duì)里〕，或用報(bào)紙包三層，并用打孔器在瓶蓋中間打三個(gè)圓孔，把選好的植株去掉胚乳，并用棉花纏裹住莖基部，留神的通過(guò)圓孔固定在瓶蓋上，使整個(gè)根系浸入培育液中，每瓶放三株，裝好后將〔20-25℃〕3-4周。 表現(xiàn)的病癥及最先消滅病癥的部位。培育液每周換一次，為使根部生長(zhǎng)良好，最好應(yīng)在蓋與溶液之間保存肯定空隙，以利通氣。在下表中記錄結(jié)果：留意試驗(yàn)用容器須洗干凈以防污染。配缺素培育液時(shí)先在容器中參加適量DW以防貯備液相互反響生成沉淀。污染。放幼苗時(shí)摘除胚乳。植物組織滲透勢(shì)的測(cè)定試驗(yàn)?zāi)康臐B透勢(shì)是水勢(shì)的組分之一，是指由于細(xì)胞內(nèi)溶質(zhì)顆粒的存在而使水勢(shì)下降的數(shù)值，純水的滲透勢(shì)為零，溶液的滲透勢(shì)為負(fù)值。植物細(xì)胞的滲透勢(shì)是植物的一個(gè)重要生理指標(biāo)，對(duì)于植物的水分代謝、生長(zhǎng)及抗性都具有重要的意義。常用于測(cè)定植物細(xì)胞與組織水勢(shì)的方法有質(zhì)壁分別法、冰點(diǎn)降低法、蒸汽壓降低法等。成熟植物細(xì)胞水勢(shì)的組成：Ψ=Ψs+ΨpΨs溶質(zhì)勢(shì)/滲透勢(shì)依據(jù)Van‘tHoffEquation計(jì)算：Ψs=-CiRTψp壓力勢(shì)〔如細(xì)胞壁〕對(duì)細(xì)胞的壓力而使水勢(shì)增大的值。一般狀況下細(xì)胞質(zhì)體使產(chǎn)生壓力勢(shì)。當(dāng)發(fā)生質(zhì)壁分別時(shí)，ψp＝0，這時(shí)Ψ=Ψs質(zhì)壁分別法試驗(yàn)原理而對(duì)于一些溶質(zhì)如蔗糖的透性較低。因此當(dāng)把植物組織放在肯定濃度的外液中，組織內(nèi)外的水分便可通過(guò)原生質(zhì)膜依據(jù)水勢(shì)梯度的方向而發(fā)生水分的遷移，當(dāng)外液濃度較高時(shí)〔高滲溶液低時(shí)〔低滲溶液生質(zhì)壁分別時(shí)〔初始質(zhì)壁分別，質(zhì)壁分別僅在細(xì)胞角隅處發(fā)生〕，細(xì)胞的壓力勢(shì)等于零，細(xì)胞的滲透勢(shì)等于細(xì)胞的水勢(shì)，也就等于外液的滲透勢(shì)。該溶液即稱為細(xì)胞或組織的等滲溶液，其濃度稱為等滲濃度。試驗(yàn)設(shè)備與材料顯微鏡；鑷子；載玻片；蓋玻片；刀片；培育皿；移液管；蔗糖；洋蔥試驗(yàn)步驟配制一系列不同濃度的蔗糖溶液，濃度分別為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6M。取6個(gè)培育皿，編號(hào)，分別吸取上述濃度的蔗糖溶液各10ml放于培育皿內(nèi)。浸沒(méi)。投入時(shí)先從高濃度開(kāi)頭，每隔5min向下一濃度放2~3片洋蔥表皮。在洋蔥表皮在各濃度的蔗糖溶液中平衡30min后，從高濃度開(kāi)頭依次取出放入顯微鏡下觀看質(zhì)壁分別的狀況〔低倍鏡即可〕，記錄觀看結(jié)果。試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果分析50%的細(xì)胞發(fā)生初始質(zhì)壁質(zhì)壁分別，而在其后一個(gè)濃度的蔗糖溶液中不發(fā)生質(zhì)壁分別，以這兩個(gè)濃度的平均濃度作為等滲濃度，其對(duì)應(yīng)的滲透勢(shì)即為細(xì)胞的滲透勢(shì)。表：蔗糖溶液濃度與其滲透勢(shì)留意：觀看時(shí)要在載玻片上滴一滴同濃度的蔗糖溶液。試驗(yàn)用洋蔥以紫色的最易于觀看質(zhì)壁分別，其它材料如紫鴨趾草、紅甘藍(lán)也可代替。冰點(diǎn)下降法試驗(yàn)原理：依據(jù)VanHoffψs＝－icRT,因此只要知道溶液的ic值即顆粒的總濃度即可算出溶液的滲透勢(shì)。而依據(jù)物理化學(xué)溶液理論之一——〔Raoult〕假設(shè)其單位體積中所溶解的溶質(zhì)顆?！卜肿雍碗x子〕總數(shù)一樣，則引起冰點(diǎn)下降的數(shù)值也一樣。試驗(yàn)說(shuō)明，1摩爾的任何非電解質(zhì)〔6.02×1023分子顆粒數(shù)〕1000克水中,則使水的冰點(diǎn)由0度下降至-1.857度;1摩爾的電解質(zhì)溶解于1000克水中,其冰點(diǎn)下降值為解離的離子與不解離的分子的總摩爾數(shù)同1.857的乘積,即冰點(diǎn)下降值與溶質(zhì)的總顆粒數(shù)有關(guān)。因此,欲求某一溶液的溶質(zhì)顆粒數(shù)目,可先測(cè)其冰點(diǎn)下降數(shù)值,然后再按下式算出結(jié)果:OS=(△t)/1.857式中:OS為1000克水中所溶解的溶質(zhì)顆粒數(shù)目,即重量摩爾滲透濃度〔osmolarity顆粒濃度ic值;△t為冰點(diǎn)下降數(shù)值(度);1.857為水的摩爾冰點(diǎn)下降常數(shù)。點(diǎn)滲透壓計(jì)的測(cè)量原理是以冰點(diǎn)下降值與溶液的摩爾濃度成比例關(guān)系為根底,承受高靈敏度的感溫元件熱敏電阻測(cè)量溶液的冰點(diǎn),通過(guò)電量轉(zhuǎn)換,冰點(diǎn)下降值直接轉(zhuǎn)換為常用滲透勢(shì)單位(mosm/KGHO2時(shí)將被測(cè)液體樣品置于半導(dǎo)體致冷槽中進(jìn)展冷卻，使之溫度下降至-10度左右,通過(guò)強(qiáng)掁使之結(jié)冰，測(cè)定其冰點(diǎn)。滲透壓計(jì)的操作過(guò)程承受程序自動(dòng)掌握。試驗(yàn)儀器及材料冰點(diǎn)滲透壓計(jì)(美國(guó)產(chǎn)Fiske210型)；液氮罐；注射器；eppendorf管；紗布；吸水紙。試驗(yàn)步驟取肯定量的植物材料，用潮濕紗布輕輕擦去外表灰塵；將材料包在干凈的細(xì)胞液擠出，存于Eppendorf管內(nèi)，如臨時(shí)不能測(cè),可放入冰箱冰室內(nèi)保存。進(jìn)展校正。20ul“COOL”鍵致冷，約70Sec后，測(cè)定管內(nèi)發(fā)出強(qiáng)振聲，同時(shí)數(shù)字顯示器顯示數(shù)字，待數(shù)字穩(wěn)定不變后，即可登記讀數(shù)。下一個(gè)樣品。結(jié)果分析冰點(diǎn)滲透壓計(jì)已經(jīng)直接將冰點(diǎn)下降值換算成滲透濃度單位〔ic，且顯示正數(shù)，所以再依據(jù)Ψs=-icRT公式〔R=0.0083143L.MPa.Mol-.K-液的滲透勢(shì)。留意結(jié)果不準(zhǔn)確。儀器長(zhǎng)期不用后需校正后再用。種子活力的快速測(cè)定試驗(yàn)?zāi)康牧私鉁y(cè)定種子活力和發(fā)芽率的方法。溴麝香草酚蘭法〔BTB法〕試驗(yàn)原理：O,放出CO,CO溶2 2 2于水成為HCO。HCO解離為H+和HCO_,使得種胚周2 3 2 3 3圍環(huán)境的酸度增加。用溴麝香草酚蘭〔BTB〕來(lái)測(cè)定酸度的轉(zhuǎn)變BTBPH6.0—7.6,色〔變色點(diǎn)為H7.1。材料：小麥種子儀器：恒溫箱、培育皿、天平、燒杯、鑷子、漏斗、濾紙?jiān)噭?.1%BTB溶液：稱取BTB0.1g,溶解于煮沸過(guò)的自來(lái)水中〔因配置指示劑的應(yīng)為微堿性，使溶液呈藍(lán)色或藍(lán)綠色，而蒸餾水為微酸性不宜用數(shù)滴稀氨水，使之變?yōu)樗{(lán)色或藍(lán)綠色。此液可長(zhǎng)時(shí)期貯存于棕色瓶中。1%BTB瓊脂凝膠：取0.1%BTB溶液100ml至于燒瓶中，另將1g瓊脂剪碎后參加，用小火加熱并不斷攪拌。待瓊脂完全溶解后，趁熱倒入數(shù)個(gè)干凈的培育皿中，使成為一均勻的薄層冷卻后備用。方法與步驟：1、浸種：為了增加種胚的呼吸強(qiáng)度，使BTB反響快速而鮮亮,必需預(yù)先充分浸種。取小麥種子50粒，在30—50oC條件下，浸種3—5小時(shí)，2的間距應(yīng)大些，使各種子的胚部相互離開(kāi)〔直徑10厘米的培育皿不宜超過(guò)50粒〕。務(wù)必使種子的胚部都向下，腹溝向上，當(dāng)凝膠溫度降至40oC時(shí)，沿玻棒認(rèn)真倒入各種子之間，成一均勻薄層〔0.2-0.4cm為宜〕，使種胚埋沒(méi)與膠層之中。330—50oC條件下小麥1-2小時(shí)，就可對(duì)光觀看，并初次計(jì)數(shù)?！灿^看時(shí)要從透射光下看〕。在藍(lán)色背景下，凡局限于種胚四周，消滅較深的黃暈色圈的是活種子，無(wú)黃暈色圈的可能是死種子。結(jié)果計(jì)數(shù)。4同上。5BTB計(jì)數(shù)后，可將小麥種子種胚翻轉(zhuǎn)向上，數(shù)日后，測(cè)定其真實(shí)發(fā)芽率。原理：

紅墨水染色法凡生活細(xì)胞的原生質(zhì)膜具選擇性吸取力量，而死的種子細(xì)胞原生質(zhì)膜喪失這種力量，于是染料便進(jìn)入死細(xì)胞而使胚著色。儀器、材料與試劑：培育皿、鑷子、刀片、5%紅墨水〔紅墨水5ml+95ml自來(lái)水〕、玉米種子。方法與步驟：1、浸種：〔同BTB法〕2200粒，沿胚和中線切為兩半，將一半置于培育皿中，參加5%紅墨水〔以漂浮種子為度〕，5-10分鐘，〔溫度高時(shí)時(shí)間可短些〕。染色后，倒去紅墨水液，用水沖洗屢次，至沖洗液為無(wú)色止。檢查種子死活。結(jié)果凡種胚不著色或著色很淺的為活種子，凡種胚與胚乳著色程度一樣的為死種子?？捎梅兴畾⑺赖姆N子為比照觀看。3、計(jì)數(shù)種胚不著色或著色淺的種子數(shù)，算出其發(fā)芽率。原理：

紙上熒光法凡有生活力的種子和已經(jīng)死亡的種子，它們的種皮對(duì)物質(zhì)的透性是不同的，而很多植物的種子中又都含有熒光物質(zhì)。利用對(duì)熒光物質(zhì)的不同透性來(lái)區(qū)分種子的死活，方法簡(jiǎn)潔，特別是對(duì)十字花科植物的種子，尤為適用。儀器、材料與試劑：紫外、培育皿、鑷子、濾紙〔無(wú)熒光〕、油菜種子。方法與步驟：1〔油菜、白菜等十字花科植物的種子〕100粒，于25—30oC水中浸泡2-3小時(shí)。23-5mm間隔整齊的排列在培育皿中的潮濕濾紙上，濾紙上水分不能太多，以免熒光物質(zhì)流散。培育皿可以不必加蓋，放置1.5-2小時(shí)取出種子，將濾紙陰干。取出的種子仍按原來(lái)挨次排列在另一皿中〔以備驗(yàn)證〕3，效果更好。4是死種子，可將這些種子揀出來(lái)集中在一個(gè)培育皿中，而讓不產(chǎn)生熒光的種子留在另一培育皿中。維持適宜溫度，讓其自然發(fā)芽。種子萌發(fā)過(guò)程中淀粉、脂肪、蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)化原理種子的貯存物質(zhì)淀粉、脂肪、蛋白質(zhì)在萌發(fā)過(guò)程中，在各種水解酶的作用下，分別轉(zhuǎn)變成簡(jiǎn)潔的有機(jī)化合物，如葡萄糖、蔗糖、氨基酸等。這些物質(zhì)是構(gòu)成器官的材料，也是供給呼吸作用的原料。原理：

淀粉的轉(zhuǎn)化種子萌發(fā)過(guò)程中，需要消耗很多有機(jī)物，