形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)-細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)十二細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)細(xì)胞融合（cellfusion）又稱細(xì)胞雜交（cellhybridization），是指兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞的現(xiàn)象。此雜交細(xì)胞具有很強(qiáng)的生命力，增殖旺盛。細(xì)胞融合術(shù)是細(xì)胞遺傳學(xué)、細(xì)胞免疫學(xué)、病毒學(xué)、腫瘤學(xué)等研究的一重要手段，也是制備單克隆細(xì)胞株的重要技術(shù)。一，細(xì)胞融合概念在誘導(dǎo)物（如仙臺(tái)病毒，聚乙二醇）作用下，相互融合的細(xì)胞發(fā)生凝集，隨后在質(zhì)膜接觸處發(fā)生質(zhì)膜成份的一系列變化，主要是某些化學(xué)鍵的斷裂與重排，最后打通兩質(zhì)膜，形成雙核或多核細(xì)胞（此時(shí)稱同核體或異核體）。二、實(shí)驗(yàn)原理病毒是最早采用的融合劑。常用于誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的病毒有仙臺(tái)病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等，其中仙臺(tái)病毒最常用。用作融合劑的病毒必須事先用滅活，使病毒的感染活性喪失而保留病毒的融合活性。優(yōu)點(diǎn)：融合率較高，對(duì)各種動(dòng)物細(xì)胞都適宜，且仙臺(tái)病毒能在雞胚中大量繁殖，容易培養(yǎng)；缺點(diǎn)：仙臺(tái)病毒不穩(wěn)定，在保存過(guò)程中融合活性會(huì)降低，并且制備過(guò)程比較煩瑣。此外，病毒引進(jìn)細(xì)胞后，可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的生命活動(dòng)產(chǎn)生干擾。病毒誘導(dǎo)融合PEG是乙二醇的多聚化合物，可改變各類細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)，使兩細(xì)胞接觸點(diǎn)處脂類分子發(fā)生疏散和重組，誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞融合。聚乙二醇使用起來(lái)很方便，誘導(dǎo)細(xì)胞融合的頻率比較高。聚乙二醇PEG誘導(dǎo)融合

20世紀(jì)80年代建立起來(lái)的電融合技術(shù)，是將兩種細(xì)胞的混合液置于低壓交流電場(chǎng)中，使細(xì)胞聚集成串珠狀，然后施加高壓電脈沖，以促使細(xì)胞融合。緊密排列的細(xì)胞，當(dāng)受到電擊時(shí)，這個(gè)區(qū)域就會(huì)被擊穿，產(chǎn)生脂雙層膜孔，導(dǎo)致細(xì)胞之間的細(xì)胞質(zhì)連通，進(jìn)而發(fā)生細(xì)胞融合。電融合技術(shù)有許多優(yōu)點(diǎn)，如誘導(dǎo)細(xì)胞融合的頻率高，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒害作用，操作簡(jiǎn)便，可重復(fù)性好。

電融合

器具:顯微鏡、離心機(jī)、離心管、細(xì)滴管、載玻片、蓋片2.試劑:

（由老師提供）50%聚乙二醇(PEG)：GKN液：

NaCl8g，KCl0.4g，Na2HPO4.2H2O1.77g，

NaH2PO4.2H2O0.69g，葡萄糖2g，酚紅

0.01g，溶于1000ml重蒸水中。0.85%NaCl液：0.85gNaCl溶于100ml重蒸水中。二、實(shí)驗(yàn)用品三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及方法1.

實(shí)驗(yàn)時(shí)取稀釋好的鴨血1ml于離心管中，加入3ml

0.85%NaCl液，混勻平衡后以1200rpm

離心5min。2.倒去上清液。再加入3ml0.85%NaCl液重復(fù)洗兩次，最后一次離心10min，棄上清。3.在沉降血球中加入1mlGKN液，混勻，使之成為細(xì)胞懸。4.在細(xì)胞懸液中加入6-8滴（約0.5ml）50%的PEG液，迅速混勻，常溫下作用2-3min；5.滴片，蓋上蓋玻片，普通顯微鏡鏡檢。在高倍鏡下可以看到有兩個(gè)或兩個(gè)以上的鴨紅細(xì)胞膜融合在一起，形成一個(gè)異核體細(xì)胞。要注意辨別融合細(xì)胞與重疊的紅細(xì)胞。五、融合率的計(jì)算在高倍鏡下（40×10）隨機(jī)計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞(包括融合的與未融合的細(xì)胞)，以融合細(xì)胞(含兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞核的