非洲豬瘟疫苗研究進(jìn)展與方向

目前，非洲豬瘟疫情重創(chuàng)中國(guó)以及東南亞國(guó)家的養(yǎng)豬業(yè)，在這種嚴(yán)峻的形勢(shì)下，極大地改變了科學(xué)家和政府部門(mén)對(duì)非洲豬瘟疫苗研究的態(tài)度。我國(guó)科學(xué)家在非洲豬瘟疫苗研發(fā)領(lǐng)域另辟蹊徑，對(duì)非洲豬瘟病毒（ASFV）基因組進(jìn)行人工改造的重組減毒活病毒（LAVs）疫苗具有較好的安全性和有效性，加速了非洲豬瘟疫苗的正式注冊(cè)和商業(yè)轉(zhuǎn)化。由于非洲豬瘟病毒（ASFV）的復(fù)雜性，加上缺乏對(duì)其免疫保護(hù)機(jī)制和其中涉及的特定抗原的了解，疫苗的研發(fā)仍然需要進(jìn)一步加大研究力度和資金的投入。盡管亞單位疫苗與重組減毒活病毒（LAVs）疫苗保護(hù)效果相差甚遠(yuǎn)，但亞單位疫苗仍然是未來(lái)研究的最佳方向。一非洲豬瘟疫苗的必要性迄今為止，宿主機(jī)體對(duì)ASFV免疫應(yīng)答反應(yīng)機(jī)制還沒(méi)有研究清楚，能產(chǎn)生免疫保護(hù)的抗原仍有待鑒定，這些研究工作的滯后，阻礙了疫苗的研發(fā)和設(shè)計(jì)。雖然存在很多的局限性，致力于ASF疫苗研究的少數(shù)實(shí)驗(yàn)室在這一領(lǐng)域做出了一些開(kāi)創(chuàng)性的研究。目前的可以得出明確的結(jié)論：第一、ASF的疫苗是可以真實(shí)實(shí)現(xiàn)的；第二，重組減毒活病毒（LAVs）疫苗將在近期可以研發(fā)成功；第三，最安全和最佳的非洲豬瘟疫苗仍然是亞單位疫苗。二經(jīng)典疫苗的問(wèn)題基于ASFV滅活的經(jīng)典疫苗，已經(jīng)被證明是保護(hù)效果不佳。盡管滅活疫苗在誘導(dǎo)抗體方面非常有效，有時(shí)能夠阻斷體液中的病毒，但它們?cè)谡T導(dǎo)特異性細(xì)胞毒性的CD8+

的T細(xì)胞（CTLs）方面并不十分有效，CTLs對(duì)清除病毒感染細(xì)胞至關(guān)重要。CTLs有兩種不同的表型能夠裂解ASFV感染的細(xì)胞：一種是CD8+表型

，另一種是CD4+CD8αβ+表型，它們都是穿孔素，并且具有豬白細(xì)胞抗原I（SLAI）限制性的細(xì)胞毒性。適當(dāng)?shù)南忍煨悦庖叻磻?yīng)和適應(yīng)性反應(yīng)（包括抗體和CD8+

的T細(xì)胞）對(duì)誘導(dǎo)抗ASFV免疫至關(guān)重要。三走向商業(yè)化的重組減毒活病毒（LAVs）疫苗今天，使用重組技術(shù)或使用CRISPR-Cas9系統(tǒng)進(jìn)行基因組編輯來(lái)刪除特定基因，為獲得更安全的LAVs疫苗開(kāi)辟了新的道路。LAVs疫苗遇到的幾大難點(diǎn)主要有，同時(shí)刪除ASFV多個(gè)毒力基因并不能完全使毒株毒力減弱，也可能產(chǎn)生無(wú)法在體內(nèi)生長(zhǎng)的病毒或不能誘導(dǎo)保護(hù)性反應(yīng)的發(fā)生。最近,中國(guó)哈爾濱獸醫(yī)研究所在《中國(guó)科學(xué)：生命科學(xué)》雜志上發(fā)表的最新研究成果，證明了通過(guò)刪除MGF360/530和CD2v毒力基因而獲得的重組LAVs疫苗的具有良好的安全性和免疫保護(hù)效力，其它重組減毒活病毒（LAVs）疫苗研究情況可見(jiàn)表1。LAVs要成為真正意義上的合格疫苗需要滿足幾個(gè)條件：1、安全性。LAVs不僅要證明對(duì)接種疫苗的豬、接觸的動(dòng)物和環(huán)境都是安全的，而且是有效的。2、易于區(qū)分。接種疫苗的豬誘導(dǎo)的免疫抗體可以和自然感染的豬區(qū)別。3、高級(jí)別的疫苗生產(chǎn)車(chē)間。首先，需要穩(wěn)定的細(xì)胞系來(lái)大規(guī)模生產(chǎn)LAVs疫苗；其次，疫苗應(yīng)在高級(jí)別生產(chǎn)車(chē)間內(nèi)進(jìn)行生產(chǎn)（P3級(jí)別的生產(chǎn)車(chē)間），并遵守相應(yīng)監(jiān)管機(jī)構(gòu)的制定的政策。4、具有交叉免疫保護(hù)性。疫苗不僅能保護(hù)特定區(qū)域不受單一病毒的侵害，而且可以防止來(lái)自同一基因型或不同基因型（最好是24種基因型）的不同毒株。5、滿足野生動(dòng)物免疫需要：要完全控制和根除ASF，還需要適合野生動(dòng)物免疫的LAVs疫苗，并且疫苗需要具有較好的安全性和免疫保護(hù)力。中國(guó)LAVs疫苗的研發(fā)取得突破性成果。經(jīng)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)，哈獸研于4月上旬、5月上旬和6月上旬分別在黑龍江、河南和新疆等三個(gè)基地開(kāi)展了疫苗臨床試驗(yàn)，試驗(yàn)規(guī)模共計(jì)近3000頭商品育肥豬。截至目前，免疫豬群生長(zhǎng)狀態(tài)良好，無(wú)明顯臨床不良反應(yīng)；免疫豬剖檢無(wú)明顯病理變化，無(wú)疫苗毒排放，無(wú)水平傳播；免疫豬在高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室用強(qiáng)毒進(jìn)行攻毒，不同劑量接種組免疫保護(hù)率均在80%以上。中國(guó)非洲豬瘟疫苗的研發(fā)工作受到國(guó)家各個(gè)部門(mén)的高度重視。國(guó)務(wù)院副總理胡春華到中國(guó)農(nóng)科院哈爾濱獸醫(yī)研究所考察非洲豬瘟疫苗研發(fā)進(jìn)展情況。他強(qiáng)調(diào)，要高度重視、積極推進(jìn)非洲豬瘟疫苗研發(fā)工作，堅(jiān)持尊重科學(xué)規(guī)律，堅(jiān)持時(shí)間服從質(zhì)量，嚴(yán)格按照程序開(kāi)展研發(fā)工作，確保疫苗的安全性、有效性，確保經(jīng)得起科學(xué)和實(shí)踐檢驗(yàn)，為生豬產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展作出貢獻(xiàn)。表1.重組LAVs疫苗對(duì)基因II型病毒毒株的保護(hù)性

四非洲豬瘟保護(hù)性抗原研究和亞單位疫苗的研制為了更好的避免傳統(tǒng)滅活疫苗和減毒活疫苗的安全性和保護(hù)性問(wèn)題，非洲豬瘟亞單位疫苗可能成為未來(lái)發(fā)展的最佳方向。對(duì)目前ASFV有關(guān)抗原研究和針對(duì)ASF的亞單位疫苗研究的重要進(jìn)展在表2、表3、表4和表5中做一簡(jiǎn)介。表2.非洲豬瘟病毒不同蛋白的抗原性和免疫原性表3.非洲豬瘟病毒誘導(dǎo)的特異性T細(xì)胞免疫反應(yīng)表4.非洲豬瘟病毒誘導(dǎo)的特異性T細(xì)胞免疫反應(yīng)表5.非洲豬瘟亞單位疫苗的保護(hù)性試驗(yàn)五小結(jié)雖然基于ASFV片段研發(fā)的亞單位疫苗克服了LAVs疫苗的大部分風(fēng)險(xiǎn)，但迄今研究的亞單位疫苗保護(hù)性差，主要原因是缺乏對(duì)ASF保護(hù)機(jī)制的認(rèn)識(shí)不深刻，對(duì)保護(hù)性抗原的研究仍然未能深入，使得有效的ASFV亞單位疫苗的研究和設(shè)計(jì)的難度異常。未來(lái)亞單位疫苗研發(fā)方和出路主要在于：1、疫苗的基本特點(diǎn)：ASFV是一種通過(guò)干擾多種途徑抑制豬免疫系統(tǒng)的復(fù)雜病毒。最佳疫苗不僅要具有高的保護(hù)性，而且無(wú)有害的免疫反應(yīng)。2、加大抗原的研究：體液和細(xì)胞免疫都可以起到保護(hù)作用。在研究保護(hù)機(jī)制的同時(shí)要從整個(gè)蛋白質(zhì)組中鑒定出盡可能多的抗原或表位。3、抗原的特性：我們不僅需要知道每種抗原的誘導(dǎo)免疫機(jī)制，而且制備抗原的成本要足夠低廉。4、新型佐劑：抗原需要和新型的佐劑來(lái)誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫。佐劑是達(dá)到這一目標(biāo)的必要工具。5、其他方面：區(qū)分免疫和自然感染，針對(duì)ASFV的亞單位疫苗可設(shè)計(jì)免疫優(yōu)勢(shì)抗原用于鑒別診斷。然而，交叉保護(hù)是一個(gè)今天很難解決的問(wèn)題，因此我們需要首先確定相關(guān)的免疫機(jī)制和抗原