組織學(xué)與胚胎學(xué)緒論 培訓(xùn)教學(xué)課件

組織學(xué)與胚胎學(xué)

Histology

and

Embryology第一頁，共二十四頁。緒論

Introduction組織學(xué)

histology第二頁，共二十四頁。組織學(xué)(histology)：研究機(jī)體微細(xì)結(jié)構(gòu)及其相關(guān)功能的科學(xué)。組織上皮組織結(jié)締組織肌肉組織神經(jīng)組織細(xì)胞細(xì)胞間質(zhì)器官系統(tǒng)人體細(xì)胞cell：是機(jī)體形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能的基本單位。細(xì)胞間質(zhì)intracellular：由細(xì)胞分泌產(chǎn)生，對細(xì)胞起支持、營養(yǎng)、保護(hù)等作用，構(gòu)成細(xì)胞生存的微環(huán)境。組織tissue：由一些形態(tài)結(jié)構(gòu)相似、生理功能相近的細(xì)胞和細(xì)胞間質(zhì)組成的群體結(jié)構(gòu)，是構(gòu)成機(jī)體器官的基本成分。分為上皮組織、結(jié)締組織、肌組織和神經(jīng)組織等4種基本組織。器官organ：由組織有機(jī)組合而成，具有一定的形態(tài)結(jié)構(gòu)，并執(zhí)行特定的生理功能。如心、肝、脾、肺、腎。系統(tǒng)system：由一些結(jié)構(gòu)連續(xù)、功能相關(guān)的器官組合而成，完成連續(xù)的生理活動。一、組織學(xué)的定義和研究內(nèi)容第三頁，共二十四頁。組織學(xué)結(jié)構(gòu)觀察組織學(xué)結(jié)構(gòu)光鏡結(jié)構(gòu)：用光學(xué)顯微鏡觀察的結(jié)構(gòu)(lightmicroscope，LM，簡稱光鏡)電鏡結(jié)構(gòu)：又稱超微結(jié)構(gòu)，電子顯微鏡下觀察的結(jié)構(gòu)(electronmicroscope,EM，簡稱電鏡)第四頁，共二十四頁。二、組織學(xué)的常用研究方法問題解決方法觀察對象太小顯微鏡放大觀察對象無色，無反差染色(如HE染色)觀察對象生化成分不同組織化學(xué)、免疫組織化學(xué)觀察對象是活體培養(yǎng)組織學(xué)研究過程中存在的問題和解決方法第五頁，共二十四頁。組織學(xué)與胚胎學(xué)最常用的技術(shù)，最大放大倍數(shù)常為1000倍。1.切片術(shù)最常用組織切片標(biāo)本制備技術(shù)基本程序：①取材：0.5cm

②固定：甲醛、乙醇③脫水：如果是冰凍切片則不需要此步驟④包埋：石蠟、火棉膠、樹脂⑤切片：組織切片機(jī)、冰凍切片機(jī)⑥脫蠟：如果是石蠟包埋則需要此步驟⑦染色：最常用染色方法為HE染色⑧封片：2.非切片法：涂片法、鋪片法、磨片法等。(一)光學(xué)顯微鏡技術(shù)第六頁，共二十四頁。常用染色方法：HE染色蘇木精(Hematoxylin)堿性染料細(xì)胞核中的染色質(zhì)細(xì)胞質(zhì)中的核糖體染成藍(lán)色(嗜堿性)染成紅色

(嗜酸性)細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞間質(zhì)成份伊紅(Eosin)酸性染料第七頁，共二十四頁。嗜堿性：對堿性燃料有較強(qiáng)親和力，可使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的核糖體等結(jié)構(gòu)染成藍(lán)紫色嗜酸性：對酸性染料有較強(qiáng)親和力，可使多數(shù)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)染成粉紅色

中性：與兩種染液親合力都不強(qiáng)組織結(jié)構(gòu)的嗜色性嗜堿性嗜酸性第八頁，共二十四頁。

A嗜銀性B嗜鉻性C異染性其它染色方法第九頁，共二十四頁。普通光學(xué)顯微鏡

(lightmicroscope，LM)是觀察組織細(xì)胞微細(xì)結(jié)構(gòu)最常用的工具光學(xué)部分：起放大作用光鏡的分辨率約為0.2μm可放大1500倍左右機(jī)械部分：第十頁，共二十四頁。⑷倒置顯微鏡(invertedmicrscope)⑸暗視野顯微鏡(darkfieldmicroscope)⑹偏光顯微鏡(polarizationmicroscope)幾種特殊光學(xué)顯微鏡術(shù)⑴相差顯微鏡(phasecontrastmicroscope)用于觀察生活細(xì)胞和末經(jīng)染色細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)⑵熒光顯微鏡(fluorescencemicrscope)

是用以觀察細(xì)胞、組織內(nèi)熒光物質(zhì)的分布神經(jīng)球⑶激光共聚焦掃描顯微鏡(confocallaserscanningmicroscope，CLSM)

由激光光源、共焦成像掃描系統(tǒng)、電子光學(xué)系統(tǒng)和微機(jī)圖象分析系統(tǒng)四部份構(gòu)成。

可對樣品進(jìn)行斷層掃描重建三維圖像，進(jìn)行體視學(xué)分析；測定細(xì)胞內(nèi)pH、鈣濃度等；精確地檢測、識別組織細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu)及其變化。又稱細(xì)胞CT。CLSM第十一頁，共二十四頁。透射電鏡(transmissionelectronmicroscope,TEM)

觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)；分辨率為0.1-0.2nm,可放大幾萬－幾十萬倍掃描電鏡(scanningelectronmicroscope,SEM)

觀察組織或細(xì)胞表面的立體結(jié)構(gòu)冰凍蝕刻復(fù)型技術(shù)(freezeetchreplicamethod)觀察細(xì)胞斷裂表面形態(tài)結(jié)構(gòu)X-射線顯微分析術(shù)(X-raymicroanalysis)研究細(xì)胞、組織內(nèi)元素種類分布和含量冷凍割斷技術(shù)(freezecracking)掃描電鏡鑄型技術(shù)(scanningelectronmicroscopecasting)超高電壓電鏡(ultravoltageelectronmicroscope,UEM)掃描探針電鏡(scanningprobemicroscope,SPM)透射電鏡與照片TEM淋巴細(xì)胞掃描電鏡與照片1.纖毛2.微絨毛冰凍蝕刻細(xì)胞

冷凍斷裂腎小球右下線粒體冰凍蝕刻照片分析電鏡X線微區(qū)分析分析電鏡－X線微區(qū)分析圖片(二)電子顯微鏡技術(shù)(electronmicroscope,EM)第十二頁，共二十四頁。1.糖類顯示法：

過碘酸-希夫反應(yīng)(periodicacidSchiffreaction，PAS反應(yīng))：

檢測組織或細(xì)胞中有無多糖存在。

PAS反應(yīng)陽性部位即表示多糖和蛋白多糖的存在(三)組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)PAS陽性小腸上皮基本原理：多糖過碘酸氧化醛Schiff試劑紫紅色沉淀第十三頁，共二十四頁。酶細(xì)胞化學(xué)神經(jīng)元ACP酶陽性脂類顯示法

蘇丹Ⅲ

鋨酸

髓鞘染色

核酸顯示法：甲基綠-派若寧反應(yīng)2.酶類顯示法：

酸性磷酸酶(ACP)顯示法3.脂類顯示法：4.核酸顯示法：

福爾根反應(yīng)

甲基綠-派若寧反應(yīng)第十四頁，共二十四頁。

是將免疫學(xué)原理與組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)相結(jié)合建立的新技術(shù).利用抗原(antigen，Ag)，抗體(antibody)特異結(jié)合的原理，用已知抗體檢測未知抗原(組織細(xì)胞內(nèi)某些多肽、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì))的存在與分布的一種方法。(四)免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)第十五頁，共二十四頁。間接法--PAP法間接法--ABC法直接法第十六頁，共二十四頁。(五)原位雜交術(shù)--核酸分子雜交組織化學(xué)技術(shù)原位雜交(insituhybridization)是一種敏感性高、特異性強(qiáng)的，能在組織細(xì)胞原位進(jìn)行的核酸分子雜交技術(shù)。常用的標(biāo)記物有兩種：①放射性同位素，如3H、14C、32P、35S、125I；②為非放射性物質(zhì)，如熒光素、生物素、地高辛等。非放射性原位雜交：海馬GAP-43mRNA第十七頁，共二十四頁。(六)組織細(xì)胞定量技術(shù)1.顯微分光光度術(shù)

應(yīng)用顯微分光光度計(jì)(microspectrophotometer)對組織和細(xì)胞內(nèi)化學(xué)成分進(jìn)行定量分析。2.形態(tài)計(jì)量術(shù)

運(yùn)用數(shù)學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)原理對組織細(xì)胞內(nèi)各種成分的數(shù)量、體積、表面積等的測量。目前多應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)。3.流式細(xì)胞術(shù)

應(yīng)用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞定量分析和細(xì)胞分類研究。第十八頁，共二十四頁。(七)放射自顯影術(shù)(autoradiograph)旨在追蹤某些物質(zhì)在體內(nèi)、組織或細(xì)胞中的分布與代謝徑路。同位素注入→取材→制標(biāo)本→涂感光材料(核乳膠)或貼照相底片→暗室曝光→顯影、定影→染色→LM觀察放射自顯影

甲狀腺125I第十九頁，共二十四頁。(八)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和組織工程技術(shù)組織工程技術(shù)基本方法示意圖A.獲取組織B.分離、培養(yǎng)種子細(xì)胞C.制備三維支架D.將種子細(xì)胞種植于支架E.將細(xì)胞-支架復(fù)合物植入組織缺損處細(xì)胞培養(yǎng)--神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)第二十頁，共二十四頁。三、組織學(xué)的學(xué)習(xí)方法1.理論聯(lián)系實(shí)際2.結(jié)構(gòu)與功能的統(tǒng)一3.斷面與立體的關(guān)系4.建立動態(tài)變化的概念5.善于總結(jié)，掌握規(guī)律

第二十一頁，共二十四頁。本單元學(xué)習(xí)要求1.掌握組織學(xué)的定義和研究內(nèi)容。2.了解組織學(xué)與胚胎學(xué)常用研究方法。第二十二頁，共二十四頁。復(fù)習(xí)思考題1.組織學(xué)、胚胎學(xué)的定義和研究內(nèi)容。2.組織學(xué)與胚胎學(xué)的基本研究方法有哪些？第二十三頁，共二十四頁。內(nèi)容總結(jié)組織學(xué)與胚胎學(xué)

Hist