黃酮類化合物R

黃酮類化合物R第2頁,共61頁，2024年2月25日，星期天早在20世紀30年代初，歐洲一位獲得諾貝爾化學獎的藥物化學家從檸檬皮發(fā)現(xiàn)了維生素P，后來才知維生素P為多種黃酮組成的一類化合物總稱；黃酮類化合物作為保健產品首次引起國際醫(yī)藥界的注意是在20世紀80年代末；

至2003年，黃酮類化合物總數超過9000個。第3頁,共61頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)黃酮類化合物的結構與分類第二節(jié)黃酮類化合物的理化性質第三節(jié)黃酮類化合物的提取與分離第四節(jié)黃酮類化合物的鑒定

本章內容第4頁,共61頁，2024年2月25日，星期天一、定義：

以前，黃酮類化合物(flavonoids)主要是指基本母核為2-苯基色原酮(2-phenyl-chromone)類化合物;

現(xiàn)今，黃酮類化合物是泛指兩個苯環(huán)通過三碳相互連接而成的一系列化合物。第一節(jié)結構與分類第5頁,共61頁，2024年2月25日，星期天二、分類依據：母核中三碳鏈的氧化程度，三碳鏈是否成環(huán)以及B環(huán)的連接位置C3-位：無OH

黃酮

有OH

黃酮醇C2－3飽和：二氫黃酮第一節(jié)結構與分類第6頁,共61頁，2024年2月25日，星期天C3與B環(huán)相連：異黃酮、二氫異黃酮第一節(jié)結構與分類第7頁,共61頁，2024年2月25日，星期天C環(huán)開環(huán)：查耳酮、二氫查爾酮第一節(jié)結構與分類第8頁,共61頁，2024年2月25日，星期天C環(huán)還原：黃烷類其它類型：花色素類第一節(jié)結構與分類第9頁,共61頁，2024年2月25日，星期天

雙黃酮類：由兩分子黃酮或兩分子二氫黃酮或一分子黃酮及一份子二氫黃酮以C-C或C-O-C鍵連接而成。第一節(jié)結構與分類第10頁,共61頁，2024年2月25日，星期天另外，還有黃酮木脂類、生物堿黃酮類第一節(jié)結構與分類第11頁,共61頁，2024年2月25日，星期天例第一節(jié)結構與分類(+)-兒茶素

R1=R2=H，大豆素

OHOOHOHOHOHHH第12頁,共61頁，2024年2月25日，星期天多以苷的形式存在：O-苷和C-苷苷中常見糖的種類：

單糖：D-葡萄糖，D-半乳糖，D-木糖，L-鼠李糖

雙糖：槐糖，龍膽二糖，蕓香糖（Rha1—6Glc）等

三糖：龍膽三糖，槐三糖

酰化糖：2-乙酰葡萄糖，咖啡?；咸烟堑谝还?jié)結構與分類三、存在形式第13頁,共61頁，2024年2月25日，星期天

本章內容第一節(jié)黃酮類化合物的結構與分類第二節(jié)黃酮類化合物的理化性質第三節(jié)黃酮類化合物的提取與分離第四節(jié)黃酮類化合物的鑒定

第14頁,共61頁，2024年2月25日，星期天一、一般性狀形態(tài)：多為結晶，少數為無定形粉末。顏色：結構存在交叉共軛體系，因此化合物多有顏色。

黃酮（醇）及其苷：呈黃色-灰黃色

查耳酮：黃-橙色

二氫黃酮（醇）：無色

異黃酮：微黃色

花色素可隨著pH值的變化顏色有所不同：

紅色（pH<7），紫色(pH8.5)，藍色(pH>8.5)第二節(jié)理化性質第15頁,共61頁，2024年2月25日，星期天溶解度黃酮(醇),查耳酮：平面型分子二氫黃酮(醇)：非平面型分子花色素：離子苷元：難溶于水，易溶于乙酸乙酯，乙醚等有機溶劑中

苷：易溶于水、乙醇、甲醇中，糖鏈越長水溶性越大第二節(jié)理化性質水中溶解度增加第16頁,共61頁，2024年2月25日，星期天二、酸堿性酸性：來源分子中的酚羥基；可溶于堿性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺。酸性強弱的比較：取決于羥基的數目和位置：

7,4′-OH>7-或4′-OH>一般Ar-OH>5-OH第二節(jié)理化性質（可用于提取、分離及鑒定工作）第17頁,共61頁，2024年2月25日，星期天來源：1-位氧原子的未共用電子對，顯微弱的堿性；可與強酸（如：濃硫酸，鹽酸等）生成

鹽而溶于酸水中。第二節(jié)理化性質堿性：二、酸堿性第18頁,共61頁，2024年2月25日，星期天三、顯色反應（一）還原反應（可用于各類化合物的鑒別）HCl-Mg反應:

多數黃酮、黃酮醇、二氫黃酮及二氫黃酮醇類化合物顯橙紅~紫紅色，少數顯紫~藍色；查耳酮、兒茶素類不顯色；異黃酮類一般不顯色。(2)HCl－Zn:

（同HCl-Mg反應）第二節(jié)理化性質第19頁,共61頁，2024年2月25日，星期天(3)四氫硼鈉（NaBH4)反應：NaBH4是對二氫黃酮（醇）類化合物專屬性較高的一種還原劑。

顏色多為橙紅-紫紅，其它黃酮類化合物均不顯色。第二節(jié)理化性質第20頁,共61頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)理化性質三、顯色反應（二）金屬鹽類試劑的絡合反應黃酮類化合物分子結構中多具有下列結構：可與金屬鹽類試劑產生絡合反應（1）鋯鹽（4）鎂鹽（2）鋁鹽（5）氯化鍶（3）鉛鹽第21頁,共61頁，2024年2月25日，星期天（1）鋯鹽（ZrOCl2）-枸櫞酸反應：區(qū)分C3-OH和C5-OH第二節(jié)理化性質第22頁,共61頁，2024年2月25日，星期天（2）鋁鹽（3）鉛鹽第二節(jié)理化性質可用于定性或定量分析*醋酸鉛（中性）：鄰二酚、3-OH和4-酮基好或5-OH和4-酮第23頁,共61頁，2024年2月25日，星期天（4）鎂鹽二氫黃酮(醇),顯天藍色熒光,有5-OH更明顯第二節(jié)理化性質（5）氯化鍶（SrCl2）第24頁,共61頁，2024年2月25日，星期天（三）硼酸顯色反應第二節(jié)理化性質三、顯色反應——鑒別5-OH黃酮和2

-羥基查耳酮

在無機酸或有機酸存在下，反應生成亮黃色。第25頁,共61頁，2024年2月25日，星期天（四）堿性試劑

NH3蒸氣：顏色加深，可逆；Na2CO3反應不可逆。1)二氫黃酮遇堿開環(huán)：生成查耳酮，顯橙黃色。2)黃酮醇：在堿液中先呈黃色，通入空氣后變?yōu)樽厣瑩丝膳c其他黃酮區(qū)別。3)黃酮類有鄰二酚羥基：在OH-中易氧化，生成由黃色深紅色

綠棕色沉淀。第二節(jié)理化性質三、顯色反應第26頁,共61頁，2024年2月25日，星期天

HCl-Mg反應HCl-Zn反應NaBH4反應鋯-枸櫞酸反應SrCl2反應硼酸+草酸反應Molish反應（+）（+）（-）黃色，加枸櫞酸,褪色（+）（+）黃色（+）第二節(jié)理化性質練習：下面的一個化合物可能發(fā)生的反應第27頁,共61頁，2024年2月25日，星期天

本章內容第一節(jié)黃酮類化合物的結構與分類第二節(jié)黃酮類化合物的理化性質第三節(jié)黃酮類化合物的提取與分離第四節(jié)黃酮類化合物的鑒定

第28頁,共61頁，2024年2月25日，星期天

一、提取精制

根據化合物的性質，可采取以下提取方法

化合物：極性——溶劑萃取

酸性——堿提酸沉

解離性——離子交換

碳粉吸附法第三節(jié)提取與分離第29頁,共61頁，2024年2月25日，星期天

溶劑萃取法：

被分離物質與混入的雜質性質不同，選用不同極性溶劑萃取達到去雜質目的。例如：醇提液用石油醚萃取可除去油脂、蠟、葉綠素；

水提液加醇沉淀可去除蛋白、多糖等水溶性雜質。

第三節(jié)提取與分離第30頁,共61頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)提取與分離

藥材甲醇或乙醇提取，回收醇第31頁,共61頁，2024年2月25日，星期天原理：酚羥基與堿成鹽，溶于水；加酸后析出。堿：常用飽和Ca(OH)2水溶液，石灰乳，5%NaCO3溶液，稀NaOH水溶液等。優(yōu)點：可使含酚羥基化合物成鹽溶解，另一方面可使含COOH的果膠、粘液質、蛋白質等雜質形成沉淀而除去。第三節(jié)提取與分離2.

堿提酸沉法第32頁,共61頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)提取與分離2.

堿提酸沉法注意：堿性不宜過強，以免破壞黃酮母核；酸化時，酸性不宜過強，pH3~4即可，以免形成佯鹽而溶解。第33頁,共61頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)提取與分離3.離子交換原理：酚羥基與堿成鹽，溶于水；采用陰離子交換樹脂交換，加酸后析出，用有機溶劑回流提取。第34頁,共61頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)提取與分離4.

炭粉吸附法（主要適用于苷類的精制）第35頁,共61頁，2024年2月25日，星期天二、分離

（一）各種色譜方法：

1）硅膠吸附色譜

按極性大小分離，主要分離極性小和中等極性的化合物?？捎肅C（柱色譜），PTLC（制備薄層）主要適于分離異黃酮、二氫黃酮、二氫黃酮醇及高度甲基化（或乙酰化）的黃酮及黃酮醇類。少數情況下，在加水去活化后也可用于分離極性較大的化合物，如多羥基黃酮醇及其苷類等。

第三節(jié)提取分離方法第36頁,共61頁，2024年2月25日，星期天2）聚酰胺色譜：原理：聚酰胺分子中具有酰胺羰基，可與酚羥基形成氫鍵，主要依據與被分離物質成氫鍵能力不同進行分離。

吸附強度主要取決于：

①

黃酮類化合物分子中羥基的數目與位置以及溶劑；

②黃酮類化合物酚羥基與聚酰胺之間形成氫鍵締合能力的大小。

（形成氫鍵主要指酚羥基，糖部分不參與形成氫鍵）

第三節(jié)提取與分離第37頁,共61頁，2024年2月25日，星期天其洗脫規(guī)律：（順序先—后）

(1)

苷元相同,洗脫先后順序一般是：

三糖苷>雙糖苷>單糖苷>苷元(2)

母核上羥基增加，洗脫速度減慢(3)

羥基數目相同,有締合羥基>無締合羥基(4)

不同類型黃酮的洗脫順序：

異黃酮>二氫黃酮（醇）>查耳酮>黃酮>黃酮醇（芳香核、共軛雙鍵多者吸附力強）第三節(jié)提取與分離第38頁,共61頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)提取與分離習題：下列黃酮化合物，

（1）用聚酰胺柱色譜，含水甲醇梯度洗脫，（2）用硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇梯度洗脫，分別寫出洗脫順序第39頁,共61頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)提取與分離答案：聚酰胺柱色譜洗脫順序：由先到后D，E，C，B，A2.用硅膠柱色譜洗脫順序：由先到后A，B，C，D，E第40頁,共61頁，2024年2月25日，星期天機理：

分離游離黃酮（苷元）——靠吸附作用。吸附程度取決于游離酚羥基數目，苷元的羥基數越多,越難洗脫。

分離黃酮苷（苷）——分子篩起主導作用。在洗脫時，黃酮苷類按分子量由大到小的順序流出柱體。常用型號：

Sephadex-G（適用于水溶性成分分離）

Sephadex-LH20（可用于親脂性成分分離）3）葡聚糖凝膠色譜第三節(jié)提取與分離第41頁,共61頁，2024年2月25日，星期天例：下列化合物，用凝膠柱色譜，含水甲醇洗脫，寫出出柱順序。第三節(jié)提取與分離1）2）先后順序：A>B>C先后順序：C>A>B第42頁,共61頁，2024年2月25日，星期天應用：分離酸性強弱不同的黃酮苷元酸性比較：7,4’-OH>7-或4’-OH>一般OH>5-OH溶于NaHCO3

Na2CO3

不同濃度的NaOH樣品乙醚乙醚液依次萃取5%NaHCO35%Na2CO30.2%NaOH4%NaOH分別酸化各部分黃酮（二）梯度pH萃取法第三節(jié)提取與分離第43頁,共61頁，2024年2月25日，星期天醋酸鉛沉淀法：鄰二酚羥基黃酮＋醋酸鉛

沉淀不具有鄰二酚羥基＋堿式醋酸鉛

沉淀（三）利用分子中的特定基團第三節(jié)提取與分離第44頁,共61頁，2024年2月25日，星期天練習題：從某植物中分離出四種化合物，其結構如下試比較四種化合物的酸性，極性大小比較它們的Rf值大小順序：1）硅膠TLC2）聚酰胺TLCAR1=R2=HBR1=H,R2=RhaCR1=Glc,R2=HDR1=Glc,R2=Rha酸性A>C>B>D極性D>C>B>ARf：A>B>C>DD>B>C>A第三節(jié)提取與分離第45頁,共61頁，2024年2月25日，星期天

本章內容第一節(jié)黃酮類化合物的結構與分類第二節(jié)黃酮類化合物的理化性質第三節(jié)黃酮類化合物的提取與分離第四節(jié)黃酮類化合物的鑒定

第46頁,共61頁，2024年2月25日，星期天（一）色譜在黃酮類鑒定中的應用

第四節(jié)黃酮類化合物的鑒定1.

紙色譜

苷元：分配層析。流動相：BAW系統(tǒng)。

苷：雙向紙層析。第一向：醇性溶劑展開，例如BAW系統(tǒng)，化合物極性大，吸附強。

第二向：水類溶劑展開，例如2-6%HOAC、3%NaCl等，化合物極性大，吸附弱。第47頁,共61頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)黃酮類化合物的鑒定Rf與結構的關系：

（1）水類溶劑展開時，平面型分子（黃酮、黃酮醇、查耳酮）幾乎停留原點不動，非平面型分子（二氫黃酮、二氫查耳酮）Rf較大。（2）醇性溶劑展開時，同一類型苷元，羥基越多，Rf越小。（3）醇性溶劑展開時，苷元相同時，Rf值大小通常為：苷元>單糖苷>雙糖苷（4）醇性溶劑展開時，羥基被甲氧基取代，Rf增大。（5）醇性溶劑展開時，羥基糖苷化，極性增大，Rf下降。（2）（3）（4）（5）用酸水展開時，上述順序顛倒。第48頁,共61頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)黃酮類化合物的鑒定2.

TLC主要指吸附薄層，常用硅膠TLC，聚酰胺TLC。

硅膠TLC：鑒定弱極性黃酮類化合物。

聚酰胺TLC：分離大多數黃酮及苷類，適用范圍廣，分離效果好。第49頁,共61頁，2024年2月25日，星期天二、紫外光譜法黃酮存在桂皮?；氨郊柞；M成的交叉共軛系統(tǒng)，在200~400

nm間，有兩個主要的紫外吸收帶A環(huán)苯甲酰系統(tǒng)峰帶II，220~280

nmB環(huán)桂皮?；到y(tǒng)峰帶I，300~400nm共性：B環(huán)OH增加，峰帶

I

紅移，特別是4

-OH，紅移大；

A環(huán)OH增加，峰帶II紅移。（一）第四節(jié)黃酮類化合物的鑒定第50頁,共61頁，2024年2月25日，星期天1.

黃酮、黃酮醇類帶I：

黃酮類304~350

nm

黃酮醇（3-OH被取代）328~357

nm

黃酮醇（3-OH游離）352~385

nm帶II：

240~285

nm峰帶I和II強度相似nmIII第四節(jié)黃酮類化合物的鑒定第51頁,共61頁，2024年2月25日，星期天取代基的影響：帶I：母核上的－OH、－OCH3等供電基，可引起相應吸收帶紅移。氧取代程度越高，帶I紅移越大。羥基甲基化或苷化，將引起紫移。帶II：峰位主要受A-環(huán)氧取代程度的影響，氧取代程度越高，帶II越向紅移。第四節(jié)黃酮類化合物的鑒定第52頁,共61頁，2024年2月25日，星期天2.

查耳酮類nmIII

查耳酮

帶

I340~390

nm

(有裂分)帶II220~270

nm帶I強，帶II次強峰第四節(jié)黃酮類化合物的鑒定第53頁,共61頁，2024年2月25日，星期天3.

異黃酮、二氫黃酮(醇)類nmIII只有A-環(huán)苯甲酰系統(tǒng)，帶II為主峰帶II：異黃酮245~270

nm二氫黃酮（醇）270~295

nm帶I弱，帶II強峰第四節(jié)黃酮類化合物的鑒定第54頁,共61頁，2024年2月25日，星期天（二）利用診斷試劑，判斷羥基位置1.

甲醇鈉（NaOMe）黃酮類化合物上所有酚羥基，均可在NaOMe中成鹽，引起紅移。確定4'-OH黃酮（醇）類：a.

帶

I位移

40~60

nm,強度不降。示有4'-OH.b.

帶

I

紅移

50~60

nm,強度下降。示有3-OH,但無

4'-OH。第四節(jié)黃酮類化合物的鑒定第55頁,共61頁，2024年2月25日，星期天2.

醋酸鈉（NaOAc）NaOAc堿性較NaOMe弱，只能使7-OH，4'-OH解離。確定7-OH黃酮（醇）：帶II紅移

5~20

nm，示有7-OH.二氫黃酮（醇）：帶II紅移

60

nm，示有7-OH.帶II紅移

35

nm，示有5、7-OH.第四節(jié)黃酮類化合物的鑒定異黃酮：帶

II紅移

6~20

nm，示有

7-OH。

第56頁,共61頁，2024年2月25日，星期天異黃酮，二氫黃酮（醇）：帶II紅移10~15

nm，A環(huán)具鄰二酚羥基(除5,6-二OH)。第四節(jié)黃酮類化合物的鑒定3.NaOAc/H3BO3鄰二酚羥基在NaOAc堿性下，可與H3BO3螯合，引起紅移。

黃酮（醇）：帶

I紅移12~30

nm；B

環(huán)具鄰二酚羥基。帶

II紅移5~10

nm