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專題1基因工程1.2基因工程基本操作程序第1頁第2頁第3頁第4頁第5頁第6頁第7頁第8頁第9頁第10頁第11頁第12頁第13頁第14頁第15頁第16頁第17頁第18頁第19頁方法基因文庫構建PCR技術擴增人工合成基因組文庫部分基因文庫(如cDNA文庫)優(yōu)點操作簡單專一性可在短時間內(nèi)大量擴增目標基因專一性強,可產(chǎn)生自然界中不存在新基因缺點工作量大、盲目性大、專一性差操作過程較煩瑣,技術要求過高需要嚴格控制溫度,技術要求高適用范圍小第20頁比較項DNA復制PCR技術區(qū)分解旋方式解旋酶催化DNA在高溫作用下變性解旋場所細胞內(nèi)(主要在細胞核內(nèi))細胞外(主要在PCR擴增儀內(nèi))區(qū)分酶DNA解旋酶、普通DNA聚合酶等耐熱DNA聚合酶(Taq聚合酶)溫度條件細胞內(nèi)溫和條件需控制溫度,在較高溫度下進行合成對象DNA分子DNA片段或基因第21頁聯(lián)絡①模板:均需要脫氧核苷酸鏈作為模板進行物質合成;②原料:均為四種脫氧核苷酸;③酶:均需要DNA聚合酶進行催化;④引物:均需要引物,使DNA聚合酶從引物3′端開始連接脫氧核苷酸第22頁第23頁第24頁第25頁第26頁第27頁第28頁第29頁第30頁第31頁第32頁第33頁第34頁第35頁第36頁第37頁受體細胞方法植物細胞(體細胞)①農(nóng)桿菌轉化法:目標基因插入Ti質粒T-DNA→農(nóng)桿菌→導入植物細胞→穩(wěn)定維持和表示②基因槍法:是單子葉植物中慣用一個基因轉化方法,不過成本較高③花粉管通道法:這是我國科學家獨創(chuàng)一個方法,是一個十分簡便經(jīng)濟方法第38頁動物細胞(受精卵)顯微注射法:含有目標基因表示載體提純→取卵(受精卵)→顯微注射→受精卵發(fā)育→取得含有新性狀動物微生物細胞(原核細胞)Ca2+處理細胞→感受態(tài)細胞→表示載體與感受態(tài)細胞混合→感受態(tài)細胞吸收DNA分子→目標基因隨受體細胞繁殖而復制第39頁第40頁第41頁第42頁第43頁第44頁第45頁第46頁第47頁第48頁第49頁第50頁第51頁第52頁第53頁第54頁第55頁比較起始(終止)密碼子開啟(終止)子本質三個相鄰堿基DNA片段位置位于mRNA上位于DNA上作用開啟(終止)翻譯開啟(終止)轉錄第56頁第57頁第58頁第59頁第60頁第61頁第62頁第63頁
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