診斷酶學(xué)自編

診斷酶學(xué)自編第一節(jié)概述

通過(guò)本節(jié)學(xué)習(xí)，掌握的知識(shí)點(diǎn)1、酶的組成、結(jié)構(gòu)及功能特點(diǎn)。2、酶的催化機(jī)制。3、什么是同工酶，LDH、CK等同工酶的分布及臨床意義。4、何謂工具酶，工具酶參與的指示反應(yīng)。5、終點(diǎn)法和動(dòng)力學(xué)法測(cè)定代謝物濃度的原理及區(qū)別。第2頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述一、酶的概念與特征（一）、酶的概念：

酶是活細(xì)胞分泌產(chǎn)生的具有催化活性的蛋白質(zhì)或RNA。第3頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述（二）酶的組成及功能按照酶的分子組成：

單純酶：酶蛋白結(jié)合酶：金屬離子輔助因子

小分子有機(jī)化合物

第4頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述（三）、酶的催化作用機(jī)制1、酶的活性中心：

酶分子中能和底物特異性結(jié)合并將底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的區(qū)域稱為酶的活性中心。

第5頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述2、誘導(dǎo)契合學(xué)說(shuō)在酶促反應(yīng)中，酶與底物結(jié)合時(shí)，底物首先和酶分子上的活性中心相結(jié)合，形成酶-底物中間復(fù)合物（ES）。在構(gòu)象上相互誘導(dǎo)，致使活性中心與底物完全緊密結(jié)合，這一過(guò)程稱為誘導(dǎo)契合學(xué)說(shuō)。第6頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述（四）酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)1、底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響2、酶的濃度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響3、溫度、PH、激活劑和抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響。第7頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述二、同工酶的概念與特征1、概念

指催化相同的化學(xué)反應(yīng)，但酶蛋白的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)乃至免疫學(xué)性質(zhì)不同的一組酶。第8頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述二、同工酶的概念與特征2、特征（1）同工酶是由不同基因編碼的多肽，或由同一基因轉(zhuǎn)錄生成的不同的mRNA所翻譯的不同多肽鏈組成的蛋白質(zhì)。（2）同工酶存在同一種屬或同一個(gè)體的不同組織或同一細(xì)胞的不同亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中，它使不同組織、器官和不同的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)具有不同的代謝特征。第9頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述二、同工酶的概念與特征3、臨床常用的同工酶第10頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第11頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述二、同工酶的概念與特征3、臨床常見(jiàn)的同工酶（1）LDH：

該酶是四聚體酶，由兩種亞基類(lèi)型即骨骼肌型（M）和心肌型（H）。種類(lèi)：LDH1，LDH2，LDH3,LDH4，LDH5。主要分布于心肌，紅細(xì)胞，骨骼肌和肝臟中。第12頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第13頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述二、同工酶的概念與特征3、臨床常見(jiàn)的同工酶（2）CK——肌酸激酶

該酶是二聚體酶，有兩種亞基類(lèi)型即骨骼肌型（M）和腦型（B）。該酶有三種：CK1—腦中

CK2—心肌

CK3—骨骼肌

第14頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述二、同工酶的概念與特征3、人體重要的同工酶（2）CK——肌酸激酶

CK

肌酸+ATP磷酸肌酸+ADP

血清中CK2的活性測(cè)定有助于心肌梗死的早期診斷。第15頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述三、工具酶（一）定義：

酶學(xué)分析中作為試劑用于測(cè)定化合物濃度或酶活性濃度的酶稱為工具酶。第16頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述三、工具酶（二）工具酶參與的指示反應(yīng)1、利用特異性較高的氧化酶產(chǎn)生過(guò)氧化氫，再通過(guò)加氧化發(fā)色劑進(jìn)行比色的方法第17頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述三、工具酶（二）工具酶參與的指示反應(yīng)例：多胺氧化酶多胺氨基酸+H2O2+NH3+H2O2和4-AAP（氨基安替比林）顯色反應(yīng)。第18頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述三、工具酶（二）工具酶參與的指示反應(yīng)2、NAD（P）H在340nm具有特征性光吸收，NAD（P）+在340nm處不具有特征性光吸收，利用氧化-還原酶反應(yīng)使其連接到NAD（P）+/NAD（P）H正/逆反應(yīng)中，通過(guò)該兩種物質(zhì)量的變化間接反應(yīng)待測(cè)酶的活性。第19頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述三、工具酶（二）工具酶參與的指示反應(yīng)例：己糖激酶法測(cè)定血清中葡萄糖濃度己糖激酶葡萄糖+ATP6-磷酸葡萄糖+ADP

6-磷酸葡萄糖脫氫酶

6-磷酸葡萄糖6-磷酸葡萄糖酸

NADP+NADPH+H+

第20頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述三、工具酶（三）酶循環(huán)法1、定義：采用兩類(lèi)工具酶進(jìn)行循環(huán)催化反應(yīng)，使被測(cè)物放大擴(kuò)增，從而提高檢測(cè)靈敏度。第21頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述三、工具酶（三）酶循環(huán)法2、實(shí)例：酶循環(huán)法測(cè)定總膽汁酸第22頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述三、工具酶（三）酶循環(huán)法2、實(shí)例：酶循環(huán)法測(cè)定總膽汁酸

解釋：硫代-NADH在405nm處有強(qiáng)值，膽汁酸的濃度與此處吸光值的變化成正比?！鰽/min（樣品）總膽汁酸濃度=△A/min（標(biāo)準(zhǔn)品）

第23頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述三、工具酶（三）酶循環(huán)法3、優(yōu)勢(shì)：（1）特異性好（2）反應(yīng)溫和，無(wú)污染。（3）靈敏度高第24頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述三、工具酶（四）代謝物濃度的酶法測(cè)定技術(shù)

1、終點(diǎn)法（end-pointassay）

（1）定義：在代謝物酶促反應(yīng)中，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，待測(cè)物濃度逐漸減少而產(chǎn)物逐漸增多，一定時(shí)間后反應(yīng)趨于平衡，測(cè)定反應(yīng)達(dá)到平衡后待測(cè)物（底物）或產(chǎn)物的變化總量。第25頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述三、工具酶（四）代謝物濃度的酶法測(cè)定技術(shù)1、終點(diǎn)法（end-pointassay）（2）終點(diǎn)法測(cè)定的基本條件：①待測(cè)物濃度〔S〕應(yīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于其米氏常數(shù)Km，此時(shí)任何時(shí)刻的反應(yīng)速率

V=Vmax〔S〕/Km②反應(yīng)配方中所用的酶量(V)應(yīng)足夠大，而Km應(yīng)小，以保證有較快的反應(yīng)速度完成測(cè)定。第26頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述三、工具酶（四）代謝物濃度的酶法測(cè)定技術(shù)

1、終點(diǎn)法（end-pointassay）

（3）種類(lèi)

直接法：待測(cè)物和產(chǎn)物在理化性質(zhì)上有可直接進(jìn)行檢測(cè)的差異，可以直接測(cè)定待測(cè)物或產(chǎn)物本身信號(hào)的改變來(lái)進(jìn)行定量分析。第27頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述三、工具酶（四）代謝物濃度的酶法測(cè)定技術(shù)

1、終點(diǎn)法（end-pointassay）

（3）種類(lèi)酶偶聯(lián)法：

如果酶促反應(yīng)的底物或產(chǎn)物無(wú)可直接檢測(cè)的成分，則可將反應(yīng)某一產(chǎn)物偶聯(lián)到另一個(gè)酶促反應(yīng)中而達(dá)到的檢測(cè)目的。第28頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述酶偶聯(lián)法：

EXEiABCEx：為輔助酶Ei：為指示酶C：被檢測(cè)的物質(zhì)第29頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述酶偶聯(lián)法（實(shí)際例子）：

血漿葡萄糖測(cè)定的氧化酶法（GOD）葡萄糖氧化酶葡萄糖+水+氧葡萄糖酸+H2O2

過(guò)氧化物酶

4-氨基安替比林+酚+H2O2紅色醌類(lèi)化合物+水+氧

色原性氧受體第30頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述三、工具酶（四）代謝物濃度的酶法測(cè)定技術(shù)1、終點(diǎn)法（end-pointassay）（4）終點(diǎn)法實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的考慮因素①工具酶的特異性高特異性②Km大小合適：在保證測(cè)定線性的前提下，Km值要盡量小。第31頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述三、工具酶（四）代謝物濃度的酶法測(cè)定技術(shù)1、終點(diǎn)法（end-pointassay）（4）終點(diǎn)法實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的考慮因素③酶的用量：酶的用量足夠大，保證反應(yīng)在較短的時(shí)間內(nèi)完成。④工具酶中的雜酶應(yīng)低于允許限制。⑤反應(yīng)平衡點(diǎn)：保證反應(yīng)朝正反應(yīng)方向進(jìn)行⑥附加劑：反應(yīng)中添加的附加劑不抑制酶的活性，不影響試劑穩(wěn)定性，不與底物或反應(yīng)液中的物質(zhì)發(fā)生作用。第32頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述三、工具酶（四）代謝物濃度的酶法測(cè)定技術(shù)2、動(dòng)力學(xué)法（定時(shí)法）：

（1）定義：根據(jù)固定時(shí)間內(nèi)底物消耗量和產(chǎn)物生成量計(jì)算酶的活性。（2）原理：當(dāng)酶促反應(yīng)為一級(jí)反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)速度V=K〔S〕。此時(shí)測(cè)定酶促反應(yīng)的初速度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)濃度法即可求得待測(cè)物的濃度。

第33頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述三、工具酶（四）代謝物濃度的酶法測(cè)定技術(shù)2、動(dòng)力學(xué)法（定時(shí)法）：（3）條件：實(shí)際操作中在底物濃度消耗小于5%時(shí)即可采用該方法。第34頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)通過(guò)本節(jié)的學(xué)習(xí)掌握如下知識(shí)：1、血清酶活性濃度測(cè)定技術(shù)有哪些？2、酶活性濃度定量系數(shù)K值的計(jì)算與實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用。3、臨床酶學(xué)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化要求和臨床意義。4、酶活性濃度單位？目前通用的酶單位的表示方法有哪些？5、酶質(zhì)量免疫化學(xué)測(cè)定法的原理和優(yōu)缺點(diǎn)6、同工酶分析方法及原理第35頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)

定時(shí)法酶活性測(cè)定連續(xù)監(jiān)測(cè)法酶學(xué)測(cè)定方法酶質(zhì)量測(cè)定：免疫酶法第36頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)一、酶活性測(cè)定（一）定時(shí)法測(cè)定酶活性（動(dòng)力學(xué)法）1、定義

在足量底物系統(tǒng)中，加入一定量的酶試劑，反應(yīng)一定時(shí)間后，加入終止試劑終止反應(yīng)，然后測(cè)定該段時(shí)間內(nèi)底物消耗量或產(chǎn)物的生成量計(jì)算酶的活性。第37頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)一、酶活性測(cè)定（一）定時(shí)法測(cè)定酶活性（動(dòng)力學(xué)法）2、定時(shí)法計(jì)算酶活性假設(shè)某一樣品的酶活性為X（U/L），取樣品Vs（ml）與底物緩沖液Vr（ml）孵育，經(jīng)反應(yīng)后，加入終止液Ve（ml），檢測(cè)到產(chǎn)物凈吸光度增加為A，該產(chǎn)物的摩爾消光系數(shù)ε，比色杯光徑為b（cm）。第38頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)一、酶活性測(cè)定（一）定時(shí)法測(cè)定酶活性（動(dòng)力學(xué)法）2、定時(shí)法計(jì)算酶活性第39頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天定時(shí)法中可能引起的誤差3、消除誤差方法：做預(yù)實(shí)驗(yàn)找出酶促反應(yīng)速率恒定的時(shí)期，確定線性時(shí)間，然后在該段時(shí)間內(nèi)測(cè)定。第40頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)（二）、連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定酶活性（終點(diǎn)法）

1、定義：

連續(xù)監(jiān)測(cè)法是將酶和底物在特定的條件下孵育，每隔一定時(shí)間（2-60s）連續(xù)測(cè)定酶促反應(yīng)過(guò)程中某一底物或產(chǎn)物的特征信號(hào)的變化，從而計(jì)算出每分鐘的信號(hào)變化速率。第41頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)第42頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)3、分類(lèi)（1）、直接法

直接通過(guò)測(cè)定反應(yīng)體系中底物或產(chǎn)物理化特性的變化，從而計(jì)算出酶活性濃度。第43頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)（2）、間接法——酶偶聯(lián)反應(yīng)

ExEiABCExEaEiABCD

Ex：待測(cè)酶Ea：輔助酶Ei：指示酶第44頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)采用酶偶聯(lián)法測(cè)定酶活性前提：延滯期越短越好第45頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)采用酶偶聯(lián)法測(cè)定酶活性前提：指示酶量的選擇標(biāo)準(zhǔn)①Vx/（Km）x=Vi/（Km）iVx：測(cè)定酶的測(cè)定上限（Km）x\（Km）i是測(cè)定酶和指示酶的Km值。第46頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)采用酶偶聯(lián)法測(cè)定酶活性前提：指示酶量的選擇標(biāo)準(zhǔn)②米-曼氏方程

Vx=

Vi=Vx[1+]Vi×PP+（Km）i（Km）iP第47頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)采用酶偶聯(lián)法測(cè)定酶活性前提：指示酶量的選擇標(biāo)準(zhǔn)③第48頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)（三）干擾因素1、其他酶和物質(zhì)的干擾2、酶的污染3、非酶反應(yīng)4、分析容器的污染5、沉淀形成第49頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)（四）血清酶活性濃度測(cè)定條件的優(yōu)化1、方法的選擇2、儀器和設(shè)備3、試劑4、自動(dòng)生化分析儀參數(shù)的設(shè)置第50頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)（五）分析前因素對(duì)酶活性測(cè)定的干擾1、溶血2、抗凝劑3、標(biāo)本的儲(chǔ)存溫度第51頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)（六）酶活性濃度的單位1、酶活性單位（1）慣用單位（2）國(guó)際單位

定義：在特定的條件下，一分鐘內(nèi)使底物轉(zhuǎn)變1μmol的酶量為一個(gè)國(guó)際單位，以IU表示。1IU=1μmol/min第52頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)（六）酶活性濃度的單位（3）Katal單位：

定義：在規(guī)定條件下，每秒內(nèi)催化轉(zhuǎn)化

1mol底物的酶量。1Katal=1mol/s

Katal是我國(guó)法定的酶活性單位，常用單位一般為μKatal或nKatal。

1Katal=60×106UIU=1μmol/min=16.67nmol/s=16.67nKatal第53頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)（六）酶活性濃度的單位2、酶活性濃度單位（臨床上，酶活性濃度以每單位體積所含的酶活性單位數(shù)表示）（1）表示方法：目前我國(guó)各級(jí)臨床中表示酶濃度的方法是U/L。

1U/L=16.67nKatal/L

第54頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)（六）酶活性濃度的單位2、酶活性濃度單位的計(jì)算

U/L=×

△AV×106minε×V×L說(shuō)明：V：反應(yīng)體系體積（ml）

ε：摩爾吸光系數(shù)（cm2/mol）

v：樣品量（ml）L：比色杯光徑（cm)

△A：吸光度變化106：將mol換算成μmol摩爾吸光系數(shù)的定義為：在特定的條件下，一定波長(zhǎng)的光，光徑為1.00cm時(shí)，通過(guò)所含吸光物質(zhì)的濃度為1.00mol/L的吸光度第55頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)（六）酶活性濃度的單位3、參考區(qū)間和正常上限的倍數(shù)應(yīng)用（1）參考區(qū)間第56頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第57頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)（六）酶活性濃度的單位3、參考區(qū)間和正常上限的倍數(shù)應(yīng)用（2）正常上限倍數(shù)的應(yīng)用正常上限（upperlimitsofnormal,ULN）第58頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)（七）系數(shù)K值的計(jì)算與應(yīng)用1、K：酶活性濃度定量系數(shù)，主要用于臨床酶活性測(cè)定的計(jì)算與校準(zhǔn)。

U/L=×KK=例：NADH的ε為6.22×103cm/mol，血清量50μm，底物溶液為1ml。比色杯光徑為1cm，則K=1.05×106/（6.22×103×0.05×1）=3376△AminV×106ε×V×L第59頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)（七）系數(shù)K值的計(jì)算與應(yīng)用2、K的意義與設(shè)置

K的設(shè)置應(yīng)該考慮測(cè)定酶的參考范圍上限及測(cè)定的時(shí)間兩個(gè)方面。過(guò)高：測(cè)定的線性范圍寬，但是重復(fù)性差

過(guò)低：線性范圍窄，但是精密度好第60頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)（八）臨床酶學(xué)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化1、標(biāo)準(zhǔn)化途徑（1）使用推薦方法和參考方法（2）使用公認(rèn)的酶校準(zhǔn)物或酶參考物第61頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)（八）臨床酶學(xué)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化2、酶活性濃度測(cè)定的參考系統(tǒng)（1）建立原級(jí)參考方法（2）制備原級(jí)參考物（3）建立參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)第62頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)二、酶質(zhì)量測(cè)定（一）免疫化學(xué)法測(cè)定酶質(zhì)量的原理1、放射免疫測(cè)定（RIA）將放射性核素標(biāo)記的酶分子與相應(yīng)的抗體作用產(chǎn)生沉淀，再將沉淀分離進(jìn)行定量測(cè)定。例：用RIA檢測(cè)尿中五項(xiàng)蛋白：β2-MG、IgG、Alb、THP、α1-MG診斷早起腎病。第63頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)二、酶質(zhì)量測(cè)定（一）免疫化學(xué)法測(cè)定酶質(zhì)量的原理2、其它方法：

（1）免疫抑制法常用于同工酶的測(cè)定。例如：CK-M抗體檢測(cè)CK-MB的活性。第64頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)二、酶質(zhì)量測(cè)定（一）免疫化學(xué)法測(cè)定酶質(zhì)量的原理2、其它方法：（2）化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定（CLIA）將高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)與免疫法相結(jié)合的一項(xiàng)技術(shù)。第65頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)二、酶質(zhì)量測(cè)定（一）免疫化學(xué)法測(cè)定酶質(zhì)量的原理2、其它方法：（3）酶免疫測(cè)定（EIA）將酶催化作用的高效性與抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合的一種微量分析技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）酶免疫組化技術(shù)第66頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)二、酶質(zhì)量測(cè)定（一）免疫化學(xué)法測(cè)定酶質(zhì)量的原理2、其它方法：（4）熒光免疫測(cè)定（FEIA）是將抗原抗體反應(yīng)的特異性和敏感性與顯微示蹤技術(shù)相結(jié)合的測(cè)定方法。標(biāo)記物：熒光素第67頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)二、酶質(zhì)量測(cè)定（二）酶質(zhì)量免疫化學(xué)測(cè)定法的優(yōu)點(diǎn)1、靈敏度高2、特異性高3、能用于測(cè)定一些無(wú)活性的酶蛋白4、應(yīng)用于同工酶的測(cè)定第68頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)二、酶質(zhì)量測(cè)定（三）免疫化學(xué)測(cè)定法的局限性1、制備足夠量的提純酶做為抗原或制備具有免疫化學(xué)性質(zhì)的抗血清比較困難。2、測(cè)定繁瑣3、測(cè)定成本高第69頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)三、同工酶的檢測(cè)第70頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)三、同工酶的檢測(cè)（一）電泳法1、常用方法：醋酸纖維薄膜電泳（CAE）、瓊脂糖凝膠電泳（AGE），聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）等。第71頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)三、同工酶的檢測(cè)2、例：LD瓊脂糖電泳（1）電泳（2）染色（3）洗脫背景色（4）掃描區(qū)帶（或?qū)^(qū)帶切下比色測(cè)定）電泳結(jié)果是從正極向負(fù)極順序：LD1，LD2，LD3，LD4，LD5第72頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)三、同工酶的檢測(cè)第73頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)三、同工酶的檢測(cè)3、巨分子酶對(duì)電泳分析同工酶的影響（1）酶與免疫球蛋白形成復(fù)合物（2）酶與其它蛋白形成復(fù)合物（3）酶亞基與酶分子之間形成的聚合物第74頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)第75頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)酶測(cè)定技術(shù)三、同工酶的檢測(cè)（二）層析法（三）免疫分析法（四）同工酶的其它分析方法第76頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第三節(jié)常用酶及同工酶測(cè)定的臨床應(yīng)用

一、血清酶（一）、血清酶的來(lái)源與去路1、血清酶的種類(lèi)分類(lèi)依據(jù)：酶的來(lái)源以及在血漿中發(fā)揮催化功能的情況。（1）血漿特異酶：在血漿中發(fā)揮特定的催化作用的酶（血漿固有酶）來(lái)源：肝臟第77頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第三節(jié)常用酶及同工酶測(cè)定的臨床應(yīng)用（一）、血清酶的來(lái)源與去路1、血清酶的種類(lèi)分類(lèi)依據(jù)：酶的來(lái)源以及在血漿中發(fā)揮催化功能的情況。（2）非血漿特異性酶：在血漿中很少發(fā)揮作用。外分泌酶：來(lái)源于消化腺或其它外分泌腺的酶。細(xì)胞酶：存在于各組織細(xì)胞中進(jìn)行代謝的酶類(lèi)。第78頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第三節(jié)常用酶及同工酶測(cè)定的臨床應(yīng)用（一）、血清酶的來(lái)源與去路2、血清酶的去路

血清酶的半衰期是指酶失活至原來(lái)活性一半時(shí)所需要的時(shí)間。一般以半衰期代表酶從血液中清除的快慢。第79頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第80頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第三節(jié)常用酶及同工酶測(cè)定的臨床應(yīng)用（二）血清酶的生理差異1、性別

CK，ALP及γ-GT等有性別差異，男性略高于女性。2、年齡新生兒略高于成人實(shí)例：ALP1~5歲增至成人的2~3倍

10~15歲可達(dá)成人的3~5倍

20歲降至成人水平第81頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第三節(jié)常用酶及同工酶測(cè)定的臨床應(yīng)用（二）血清酶的生理差異3、進(jìn)食在高脂、高糖飲食后血清中ALP活性增高。酗酒可使血清γ-GT升高第82頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第三節(jié)常用酶及同工酶測(cè)定的臨床應(yīng)用（二）血清酶的生理差異4、運(yùn)動(dòng)激烈的肌肉運(yùn)動(dòng)可使血清中多種酶如CK、

LD、AST、ALD和ALT等活性升高，其升高的幅度與運(yùn)動(dòng)量、運(yùn)動(dòng)時(shí)間、運(yùn)動(dòng)頻率及骨骼肌所含的酶量有關(guān)。第83頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第三節(jié)常用酶及同工酶測(cè)定的臨床應(yīng)用（二）血清酶的生理差異5、妊娠妊娠期，胎盤(pán)組織可分泌一些酶進(jìn)入母體血液，比如：ALP,LD,LAP,ALT等，引起血清中這些酶升高。6、其它血清中有些酶有種族差異。

第84頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第三節(jié)常用酶及同工酶測(cè)定的臨床應(yīng)用（三）血清酶的臨床應(yīng)用第85頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第86頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第三節(jié)常用酶及同工酶測(cè)定的臨床應(yīng)用二、尿液酶目前了解較多的尿液酶：AMS、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）白細(xì)胞酯酶

溶菌酶（LZM）、丙氨酸氨基肽酶（APP）β-葡萄糖苷酸酶（GRS）、亮氨酸氨基肽酶（LAP）

LD、ALP、γ-GT

第87頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第三節(jié)常用酶及同工酶測(cè)定的臨床應(yīng)用1、AMS-尿液淀粉酶（1）來(lái)源：唾液腺或胰腺（2）種類(lèi)：S型（唾液腺型）和P型（胰腺型）（3）用途：急性胰腺炎和急性腮腺炎（4）干擾因素

a、診斷胰腺炎的時(shí)候，應(yīng)排除腎病和巨淀粉酶血癥.b、尿液淀粉酶的活性影響因素：酸尿、草酸鹽、檸檬酸鹽可抑制該酶活性；磺胺類(lèi)藥物、止痛藥可使該酶活性增高。

c、急性闌尾炎、腸梗阻、胰腺癌等可使AMS升高。

第88頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第三節(jié)常用酶及同工酶測(cè)定的臨床應(yīng)用二、尿液酶（二）NAG：N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶1、來(lái)源：腎近曲小管上皮細(xì)胞2、用途（1）各種腎實(shí)質(zhì)早期損傷的敏感標(biāo)志物（2）糖尿病性腎病早期發(fā)現(xiàn)和病程監(jiān)測(cè)的重要項(xiàng)目（3）反映腎病綜合癥、腎小球腎炎、高血壓腎病和視網(wǎng)膜病的發(fā)展。（4）用于藥物治療時(shí)毒性反應(yīng)，腎重金屬毒害、腎移植排異監(jiān)測(cè)等。第89頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第三節(jié)常用酶及同工酶測(cè)定的臨床應(yīng)用三、漿膜腔積液酶漿膜腔：人體的胸腔、腹腔和心包腔、關(guān)節(jié)腔的統(tǒng)稱。漿膜腔積液：病理狀態(tài)下漿膜腔內(nèi)大量的液體潴留。第90頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第三節(jié)常用酶及同工酶測(cè)定的臨床應(yīng)用三、漿膜腔積液酶（一）腹水：腹腔內(nèi)的過(guò)多積液1、腹水中的主要酶：LD和ADA等2、臨床意義（1）結(jié)核性滲出液：ADA升高（2）惡性腹水：ADA偏低（3）胰腺炎或胰腺創(chuàng)傷：AMS增高

第91頁(yè),共99頁(yè)，2024年2月25日，星期天第三節(jié)常用酶及同工酶測(cè)定的臨床應(yīng)用三、漿膜腔積液酶（二）胸腔積液1、分類(lèi)（1）漏出液：代償性心力衰竭（2）滲出液：肺炎、惡性腫瘤或肺栓塞2、臨床意義：（1）L