2019年臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技師考試《微生物檢驗(yàn)》輔導(dǎo)講義 真菌檢驗(yàn)

真菌檢驗(yàn)

?考點(diǎn)

真菌的基本特性

真菌微生物學(xué)檢查方法

念珠菌；隱球菌；曲霉菌；皮膚真菌

【內(nèi)容講解】

真菌:

真核細(xì)胞型微生物,屬于真菌界。具有典型細(xì)胞核,不含葉綠素，不分根、莖、葉。以寄生或腐生方

式生存。由單細(xì)胞或多細(xì)胞組成的，細(xì)胞壁含"M和（或）纖維素。能進(jìn)行有性生殖和（或）無性生殖。

第一節(jié)真菌的基本特性

一、真菌的分類

r粘菌門

r接合菌亞門（條件致病，如毛霉）

子囊菌亞門（如芽生菌屬、組織胞漿菌屬、

真菌門.

L醉母菌屬）

擔(dān)子菌亞門（食用菌蘑菇、新生隱球菌）

L半知菌亞門（球胞子菌屬、假絲酵母菌屬）

二、生物學(xué)性狀

（-）真菌的基本形態(tài)

單細(xì)胞真菌多細(xì)胞真菌二相性真菌

呈圓形或橢圓形，常見的由菌絲和胞子組成，菌絲伸長在體內(nèi)或體外含動(dòng)物蛋白的培養(yǎng)基上

有酵母菌或類酵母菌，以分支，分枝交織成絲狀體，稱37C培養(yǎng)為酵母型真菌，而在體外普通

出芽方式繁殖為絲狀菌，又稱霉菌培養(yǎng)基上25C培養(yǎng)時(shí)霉菌型真菌

如球泡子菌、組織胞漿菌、芽生菌和抱

如白假絲酵母、隱球菌。如皮膚癬菌

子絲菌、副球抱子菌

（二）真菌的結(jié)構(gòu)

＞菌絲

＞范子

菌絲：

真菌在適宜環(huán)境中，由苑子生出芽管逐漸延長呈絲狀。菌絲繼續(xù)生長并向兩側(cè)分枝，交織成團(tuán)，稱為

菌絲體。

根據(jù)菌絲生長方式不同分：

＞營養(yǎng)菌絲：伸入到培養(yǎng)基內(nèi)的菌絲；

＞氣中菌絲：露出培養(yǎng)基表面、向空間生長：

＞生殖菌絲：氣中菌絲可產(chǎn)生有性或無性抱子的。

根據(jù)菌絲形狀：有助于真菌的鑒別。

＞單純菌絲：分枝或不分枝，有隔或無隔，有色或無色的管狀組織。菌絲有隔，稱為有隔菌絲，無橫

隔的稱無隔菌絲。

＞球拍狀菌絲：菌絲一端粗大如球拍，多見于小抱子菌屬的奧杜盎小抱子菌、鐵銹色小抱子菌。

＞破梳狀菌絲：菌絲側(cè)端長短突出，形如破梳，多見于石膏樣癬菌、黃癬菌、紫色癬菌、疊瓦癬菌及

羊毛狀小狗子菌。

＞鹿角狀菌絲：形如鹿角，僅見于黃癬菌。

＞結(jié)節(jié)狀菌絲：菌絲纏繞成結(jié)節(jié)狀，多見于石膏樣小電子菌及石膏樣癬菌。

＞螺旋狀菌絲：呈螺旋狀，多見于石膏樣癬菌。

＞關(guān)節(jié)狀菌絲：由關(guān)節(jié)抱子組成，多見于粗球抱子菌。

＞假菌絲：

由抱子延長后形成，形如菌絲，但不是真正的菌絲。

與真菌絲的主要區(qū)別為它的壁兩邊有時(shí)交叉，而真菌菌絲則壁兩邊永遠(yuǎn)是平行的。多見于白色念珠菌

及隱球菌。

A：螺旋狀菌絲B：球拍狀菌絲

C：結(jié)節(jié)狀菌絲D：鹿角狀菌絲

E：破梳狀菌絲F：關(guān)節(jié)狀菌絲

泡子

＞有性抱子：

由同一個(gè)菌體或不同菌體上的兩個(gè)細(xì)胞融合形成。

包括卵抱子、接合抱子、子囊抱子和擔(dān)抱子。

＞無性泡子：

由菌絲直接生成，并不發(fā)生細(xì)胞融合。

致病性真菌多為無性抱子。

無性酒子：

「芽生泡子（如酵母菌、隱球菌及念珠菌）

-葉狀子包子厚膜池子

關(guān)節(jié)抱子

大分生擔(dān)子（多細(xì)胞性的）

無性胞子一分生狗子

小分生胞子（單細(xì)胞性的）

狗子囊抱子

真菌抱子和細(xì)菌芽胞不同:

真菌抱子細(xì)菌芽胞

抵抗力不強(qiáng)，60-70℃短時(shí)間即死強(qiáng)，煮沸短時(shí)間不死

數(shù)目一條菌絲可產(chǎn)生多個(gè)抱子一個(gè)細(xì)菌體只形成一個(gè)芽胞

作用為繁殖方式之一不是繁殖方式

形狀形狀多種多樣圓形或橢圓形

（三）真菌的培養(yǎng)與繁殖

營養(yǎng)要求不求,最常用的為沙保弱培養(yǎng)基。

最適生長溫度為絲?28℃,某些深部病原性真菌在37℃生長良好,最適pH5.0~6.0。需要較高的濕度

和氧氣。

單細(xì)胞真菌中雖有少數(shù)酵母菌可以二分裂繁殖,但多數(shù)真菌是以年芽、形成菌絲、產(chǎn)生抱了?以及菌絲

分枝與斷裂等方式進(jìn)行繁殖。

真菌的繁殖力極強(qiáng)，但生長速度較慢。

真菌菌落有3種類型：

1.酵母型菌落：類似一般細(xì)菌菌落，菌落光滑、濕潤、柔軟、致密，顯微鏡檢查可見圓形或橢圓形生

芽細(xì)胞。

2.酵母樣菌落：外觀性狀同酵母型菌落，但在菌落表面除有芽生細(xì)胞外，還有假菌絲伸入培養(yǎng)基中，

如白色念珠菌。

3.絲狀菌落：菌落疏松，呈棉絮狀、絨毛狀或粉末狀，菌落正面和背面可顯示各種不同的顏色，常作

為鑒定菌種的參考。

（四）真菌抵抗力

對熱的抵抗力不強(qiáng)，一般60℃lh即被殺死。

對干燥、日光、紫外線及多數(shù)化學(xué)藥品的耐受性較強(qiáng)。

用甲醛熏蒸被真菌污染的物品，可達(dá)到消毒的目的。

對常用抗生素如四環(huán)素、青霉素、鏈霉素等均不敏感，灰黃霉素、制霉菌毒、兩性霉素等對某些真菌

有抑制作用。

三、致病性

1.致病性真菌感染主要是一些外源性真菌感染，可引起皮膚、皮下及全身性真菌感染。

2.條件致病真菌感染主要是一些內(nèi)源性真菌引起的，如假絲酵母菌、曲霉菌、毛霉菌等。

3.真菌變態(tài)反應(yīng)性疾病在臨床變態(tài)反應(yīng)性疾病中有一部分是由真菌引起的。常見的變態(tài)反應(yīng)性疾病

有尊麻疹、接觸性皮炎、哮喘等。

4.真菌性中毒有些真菌在糧食和飼料上生長，人、畜食用后可導(dǎo)致急性或慢性中毒，引起中毒的可

以是真菌本身，也可以是真菌產(chǎn)生的毒素。

5.真菌毒素與腫瘤的關(guān)系近年來不斷發(fā)現(xiàn)有些真菌產(chǎn)物與腫瘤有關(guān)，例如：黃曲霉毒素有較強(qiáng)致癌

作用，攝入一定量的黃曲霉毒素可導(dǎo)致肝癌。

第二節(jié)真菌的基本微生物檢驗(yàn)方法

真菌檢查方法，常用直接檢查、培養(yǎng)檢查，一般即可確定致病真菌的種類，必要時(shí)可用生化反應(yīng)、皮

膚試驗(yàn)、免疫學(xué)檢查、核酸檢查以輔助診斷。

一、真菌的直接檢測法

（一）不染色標(biāo)本的直接檢查

將少量標(biāo)本置于載玻片上，加適量生理鹽水，如為毛發(fā)、皮屑，須加10%?20%氫氧化鉀，蓋上蓋玻片,

并加熱使標(biāo)本組織溶解透明，用低倍鏡和高倍鏡檢查，觀察時(shí)有酵母型細(xì)胞、菌絲、菌絲體和胞子。若發(fā)

現(xiàn)有真菌菌絲或胞子存在時(shí)可初步判定為真菌感染。

（二）染色標(biāo)本檢查

觀察有無酵母型細(xì)胞、菌絲、菌絲體和抱子。

1.革蘭染色

適用于酵母菌和類酵母菌的染色。

酵母型細(xì)胞和菌絲、抱子被染為革蘭陽性。

2.墨汁負(fù)染色

適用于隱球菌的檢查。可見新型隱球菌具有寬厚莢膜。

3.乳酸酚棉蘭染色

適用于各種真菌的檢查。

酵母型細(xì)胞，菌絲和抱子被染為藍(lán)色。

4.瑞氏染色

適用于檢測骨髓和外周血中的莢膜組織胞質(zhì)菌。

（三）直接檢測抗原

用乳膠凝集試驗(yàn)、ELISA檢測血清和腦脊液標(biāo)本中的隱球菌抗原。

用膠乳聚集試驗(yàn)檢測標(biāo)本中白假絲酵母菌抗原。

二、真菌的培養(yǎng)檢查法

（一）常用真菌培養(yǎng)基

一般可選用沙保弱培養(yǎng)基。

無菌區(qū)標(biāo)本，如血液、腹腔液、心包液、腦脊液、關(guān)節(jié)液等，一般采用自動(dòng)化血培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行培養(yǎng)。

大部分真菌在25?28℃生長良好，有些需要37℃培養(yǎng)，所有分離標(biāo)本應(yīng)孵育至少4周。

觀察菌落生長情況是鑒別真菌的主要方法之一。

常用真菌培養(yǎng)基及用途：

培養(yǎng)基用途

沙保弱培養(yǎng)基深淺部真菌的常規(guī)培養(yǎng)

皮膚真菌試驗(yàn)培養(yǎng)基分離皮膚真菌

左旋多巴-枸檬酸鐵和咖啡酸分離新生隱球菌

培養(yǎng)基

酵母浸膏磷酸鹽瓊分離莢膜組織胞漿菌和皮炎芽生菌

馬鈴薯葡萄糖瓊脂觀察真菌菌落色素，用于鑒別真菌

腦心葡萄糖血瓊脂培養(yǎng)深部真菌，使二相性真菌呈酵母型

用于鑒別酵母菌（+）和類酵母菌"），石膏樣毛癬菌（+）和紅

尿素瓊脂

色毛癬菌（-）

培養(yǎng)白色念球菌（白色假絲酵母），以觀察其形成的厚膜抱子和假

玉米粉聚山梨酯-80瓊脂

菌絲。

（二）培養(yǎng)方法

1.試管培養(yǎng)是真菌分離培養(yǎng)、傳代和保存菌種最常用的方法。將標(biāo)本接種在瓊脂斜面上，每個(gè)標(biāo)本

接種兩支瓊脂斜面，一支放于37℃,另一支放于22?28℃,需氧培養(yǎng)。

2.玻片小培養(yǎng)主要用于在顯微鏡下觀察真菌的自然形態(tài)和結(jié)構(gòu)及生長發(fā)育的全過程?？捎糜谡婢?/p>

種的鑒定。

3.平皿培養(yǎng)表面較大可使標(biāo)本散布，便于觀察菌落形態(tài)，但水分易蒸發(fā)，只能培養(yǎng)生長繁殖較快的

真菌。

三、鑒定

主要依靠菌落特點(diǎn)、菌絲和抱子的形態(tài)特點(diǎn)，菌絲體上有無特殊的結(jié)構(gòu)。

生化反應(yīng)：常用的有糖類發(fā)酵試驗(yàn)、同化碳源試驗(yàn)等。

動(dòng)物試驗(yàn)

核酸檢測

真菌毒素的檢測

第三節(jié)病原性真菌

r表面感染真菌

淺部感一皮膚癬真菌

染真菌

L皮下組織感染真菌

病原性真菌-

「致病性（新生隱球菌、組織胞漿菌）

深部感

染真菌一

L條件致病性（白假絲酵母菌、曲霉、毛霉）

一、假絲酵母菌（俗稱念珠菌）

（-）生物學(xué)性狀

菌體圓形或卵圓形，G；著色不均勻。

以出芽繁殖，稱芽生抱子。抱子伸長成芽管，不與母菌體脫離，形成較長的假菌絲。

在普通瓊脂、血瓊脂與沙保弱培養(yǎng)基上生長良好。需氧、室溫或37℃孵育1?3天，菌落呈灰白色或奶

油色，表面光滑。

（二）微生物學(xué)檢查

1.直接鏡檢：

一般用于淺部念珠菌病檢查，也可用于血、尿、腦脊液、活檢組織等標(biāo)本的檢查。顯微鏡下觀察，念

珠菌呈圓形或橢圓形的芽生抱子，假菌絲和菌絲。G\但著色不均。

2.分離培養(yǎng)及鑒定：

可接種沙保弱、血平板等培養(yǎng)基。

常用的白色念珠菌的鑒定方法有：

（1）芽管形成試驗(yàn)：

接種于血清中，37℃孵育3小時(shí)（一般不超過4小時(shí)），鏡檢觀察酵母細(xì)胞是否形成了芽管。

念珠菌屬內(nèi)的大多數(shù)白色念珠菌可形成芽管，但也不盡然，同時(shí)也會有假陽性。試驗(yàn)最好有陰性和陽

性對照。

（2）糖同化或發(fā)酵試驗(yàn)：根據(jù)這兩種實(shí)驗(yàn)可將常見的幾種假絲酵母菌進(jìn)行鑒別。

（3）厚壁抱子形成試驗(yàn)：在玉米粉瓊脂上，25℃?28℃孵育24?48小時(shí)，念珠菌屬中僅白色念珠菌

產(chǎn)生厚壁抱子。

（4）商品化產(chǎn)色培養(yǎng)基可用于快速鑒定。

（三）臨床意義

對人類有致病性的主要有：白假絲酵母菌、熱帶假絲酵母菌、克柔假絲酵母菌、光滑假絲酵母菌等。

其中以白假絲酹母菌的感染最為常見。

大多是人體正常菌群，感染既可以是內(nèi)源性，也可以是外源性的。

假絲酵母菌可引起淺部和全身性感染。

淺部假絲酵母菌病包括鵝口瘡、陰道炎、角膜炎、甲溝炎等?？谇患俳z酵母菌病與艾滋病關(guān)系密切。

全身性感染依其侵犯部位及患者狀態(tài)而表現(xiàn)不同臨床癥狀。有支氣管和肺假絲酵母菌病、假絲酵懸菌

性腸炎，假絲酵母菌性膀胱炎或腎盂腎炎、假絲酵母菌性心內(nèi)膜炎等。

（四）治療原則

對淺部感染者，可外用藥物和口服藥物聯(lián)合治療。

對深部感染者，可選用口服或注射抗真菌藥物治療，如酮康嗖、氟康哇及伊曲康哇等。

二、隱球菌

（-）生物學(xué)性狀

圓形的酵母型菌，外周有莢膜,折光性強(qiáng)。一般染色法不著色，難以發(fā)現(xiàn)。印度墨汁作負(fù)染色鏡檢,

在黑色的背景中可見圓形的透明菌體，為雙壁細(xì)胞，外包有一層透明的美膜。菌體常見有出芽現(xiàn)象。在沙

保弱和血瓊脂上，25℃和37℃均可生長，而非致病的隱球菌在37℃則不生長。

（二）微生物檢驗(yàn)

1.直接檢查

墨汁負(fù)染色一標(biāo)本中菌體較大，呈較大的球型，菌體周圍有肥厚的莢膜。乳膠凝集試驗(yàn)、ELISA檢測血

清和腦脊液標(biāo)本中的隱球菌莢膜多糖特異性抗原。PCR檢測。

2.分離培養(yǎng)及鑒定

在沙保弱培養(yǎng)基上，25℃及37℃均可生長，菌落白色或奶油色，黏稠，不透明。

以下試驗(yàn)進(jìn)行鑒定：

（1）尿素酶試驗(yàn)：新型隱球菌（+）,白假絲酵母菌。

（2）糖同化及發(fā)酵試驗(yàn)：新型隱球菌，淺白隱球菌等可同化纖維二糖、肌醇等，但均不能發(fā)酵糖類。

（3）酚氧化醐試驗(yàn)：接種左旋多巴-枸檬酸鐵和咖啡酸培養(yǎng)基，經(jīng)2?5天，新型隱球菌呈棕黑色菌落。

（三）臨床意義

致病物質(zhì)是莢膜。

屬外源性感染。

經(jīng)呼吸道侵入人體，經(jīng)血流播散至腦及腦膜，也可侵犯皮膚、骨和關(guān)節(jié)。

隱球菌病好發(fā)于免疫功能低下者，特別是隱球菌性腦膜炎常在系統(tǒng)性紅斑狼瘡、白血病、淋巴瘤、艾

滋病等疾病患者中發(fā)生。

（四）治療原則

抗真菌藥物：兩性霉素B.氟胞喀咤、氟康哇、伊曲康理等。

對于神經(jīng)系統(tǒng)隱球菌感染,一般主張分期治療。初期可應(yīng)用兩性霉素B和氟胞喀咤聯(lián)合治療，盡快使腦

脊液轉(zhuǎn)陰；后期可口服咪唾類抗真菌藥物，維持3?4個(gè)月，以防復(fù)發(fā)。

三、曲霉菌

（-）形態(tài)特征

有隔菌絲。

分生抱子產(chǎn)生在由菌絲分化出來的分生抱子梗頂部。分生抱子梗多不分枝，有或無橫隔。其頂端膨大

形成頂囊，頂囊表面直接產(chǎn)生瓶梗，為單層?；蛘呦犬a(chǎn)生?；儆晒；仙銎抗?，即為雙層，瓶梗頂

端生成分生泡子.

（二）分離鑒定

在沙保弱培養(yǎng)基上形成絲狀菌落，開始為白色,隨著分生抱子的產(chǎn)生而呈現(xiàn)各種顏色。

常用察氏瓊脂，菌落氣生部分（分生抱子頭等）和基內(nèi)菌絲體以及培養(yǎng)基的顏色是鑒定菌種的依據(jù)之

（三）血清學(xué)診斷

用ELISA.RIA等方法檢測患者血清中的抗體。

用ELISA等方法檢測患者血清、尿液或其他體液中的抗原。

（四）皮膚試驗(yàn)

對過敏性支氣管肺炎患者可用曲霉菌抗原提取液作皮試。

（五）臨床意義

條件致病菌。

可侵犯機(jī)體許多部位，尤其是呼吸系統(tǒng)和全身性曲霉病。呼吸系統(tǒng)曲霉病引起支氣管哮喘或肺部感染。

全身性曲霉病原發(fā)病灶主要是肺，可隨血播散至腦、心肌和腎等。

有些曲霉菌能產(chǎn)生毒素引起機(jī)體食物中毒，黃曲霉毒、雜色霉素有致癌作用。

四、毛霉目真菌

常引起毛霉病的有：根霉屬、犁頭霉屬、毛霉屬、根毛霉屬，其中以根霉屬最為常見。

毛霉病是一種發(fā)病急，進(jìn)展快、病死率極高的系統(tǒng)性條件致病性真菌感染。免疫功能低下者易感。

臨床上常見眼眶及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的毛霉病。該病起初多發(fā)于鼻黏膜或鼻竇，繼而擴(kuò)散。

標(biāo)本直接鏡檢可見折光性強(qiáng)的粗大菌絲，無隔或少數(shù)分隔，偶見池子囊及抱子囊梗。

在培養(yǎng)基上生長較快，初起菌落表面呈棉花樣、白色，漸變?yōu)榛液稚蚱渌伾敹擞泻谏↑c(diǎn)。

依據(jù)菌落及鏡檢特征進(jìn)行鑒定。

五、組織胞漿菌

雙相性真菌。

主要侵犯網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)。有時(shí)也可由血行播散而侵犯全身各臟器。

引起三種不同臨床表現(xiàn)：原發(fā)急性型組織胞漿菌病、慢性空洞型、嚴(yán)重播散型。

標(biāo)本涂片姬姆薩染色可見在巨噬細(xì)胞內(nèi)卵圓形較小的一端有出芽，為可疑標(biāo)本。

六、卡氏肺抱菌

主要是空氣傳播，在健康人體內(nèi)多為無癥狀的隱性感染。

當(dāng)宿主免疫力下降時(shí)，導(dǎo)致間質(zhì)性漿細(xì)胞肺炎，又稱卡氏肺徇菌肺炎（PCP）。是AIDS最常見、最嚴(yán)

重的機(jī)會感染性疾病。

有包囊和滋養(yǎng)體兩種形態(tài)。包囊為感染型，滋養(yǎng)體為繁殖型。痰液涂片姬姆薩染色檢查包囊。利用單

抗查血清中的卡氏肺抱菌抗原。也可檢測核酸。

淺部感染真菌

1.毛癬菌屬

侵犯人體皮膚、指（趾）甲、毛發(fā)的角蛋白組織

皮屑等經(jīng)1CWK0H溶液消化后鏡檢，可有菌絲；病發(fā)內(nèi)、外可見菌絲或抱子

皮膚癬菌對伊曲康嚏等藥物敏感

2.表皮癬菌屬

對人致病的只有絮狀表皮癬菌

3.小抱子菌屬

感染皮膚和毛發(fā)，很少感染指（趾）甲

4.糠枇馬拉色菌：引起皮膚表面真菌感染

5.著色真菌和抱子絲菌：可引起皮下組織真菌感染

馬爾尼菲青霉

特征：雙相真菌，自然界以菌絲形式存在，組織中呈小圓形至橢圓形細(xì)胞