結(jié)核分枝桿菌資料講解

2024/5/9結(jié)核分枝桿菌1結(jié)核分枝桿菌1結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌2選題？2結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌31.結(jié)核的現(xiàn)狀

結(jié)核病是全球嚴重的公共衛(wèi)生問題之一。據(jù)WHO統(tǒng)計，全球約有20億人感染結(jié)核分枝桿菌，每年有約200萬人死于結(jié)核。我國是世界上22個結(jié)核病高負擔國家之一，結(jié)核感染導致的死亡人數(shù)是其他傳染性疾病總死亡人數(shù)的2倍以上，曾經(jīng)一度控制良好，再次死灰復燃，隨著耐藥菌株的出現(xiàn)和傳播，結(jié)核控制更加棘手。3結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20244結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌53.醫(yī)生的需求有醫(yī)生咨詢結(jié)核病的檢查5結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌64.各類考試常見的考點中級職稱高級職稱研究生考試6結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌7分枝桿菌屬Mycobacterium一類直或微彎曲的桿菌，有分枝生長趨勢，可呈絲狀或菌絲樣生長。細胞壁脂質(zhì)含量高（分枝菌酸），耐酸，抗酸染色陽性。對氧和營養(yǎng)要求高，生長慢。又稱抗酸桿菌(acid-fastbacillus)---不易著色，可抵抗鹽酸酒精的脫色作用分類屬放線菌科，本屬有80多種，可分三類：結(jié)核分枝桿菌、非結(jié)核分枝桿菌和麻風分枝桿菌。細菌的DNAG+Cmol%為62－707結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌8結(jié)核分枝桿菌一、分類結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium

Tuberculosis，TB）復合群：

人結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)

牛分枝桿菌(M.bovis)

非洲分枝桿菌田鼠分枝桿菌8結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌9二、細菌特性形態(tài)染色

TB菌細長略彎曲，有時可見分枝，呈單、成堆或成束排列，無鞭毛、無芽胞，有莢膜?？沙霈F(xiàn)多形性，在陳舊的病灶和培養(yǎng)物中，形態(tài)常不典型，可呈顆粒狀，串球狀，短棒狀，長絲形等。TB菌革蘭染色陽性。熒光染料金胺O染色，在熒光下菌體呈橘黃色。萋～尼氏抗酸性染色法染色，菌體染成紅色。

9結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌10培養(yǎng)特性專性需氧菌，3%－5%的CO2能促進生長。最適ph6.5～6.8，最適溫度為37℃，低于30℃難生長，營養(yǎng)要求高，在含有蛋黃、馬鈐薯、甘油和天門冬素等的固體培養(yǎng)基上才能生長，且生長緩慢。固體培養(yǎng)基---典型菌落為干燥、堅硬、表面呈顆粒狀、乳酪色或淡黃色，形似菜花樣。液體培養(yǎng)基---生長較快呈粗糙皺紋狀菌膜生長，有毒株可呈索狀生長（吐溫干擾）。10結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌11生化反應

生化不活潑。不發(fā)酵糖類，多數(shù)菌株觸酶陽性，熱觸酶陰性，非結(jié)核分枝桿菌正好相反。結(jié)核分枝桿菌煙酸和硝酸鹽試驗陽性，耐噻吩－2－羧酸肼(T2H)，牛型則相反。有毒株中性紅試驗陽性。變異性

TB菌易發(fā)生形態(tài)、菌落、最適生長溫度、毒力和耐藥性的變異。如卡介苗、Much顆粒和多重耐藥菌株出現(xiàn)等。11結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌12抵抗力

TB菌細胞壁含大量脂類，抵抗力較強干痰中存活6-8個月，粘附塵埃上保持傳染性8-10天，陰濕處能生存5個月以上。

3%HCL或4%NaOH、6%H2SO4溶液中能耐受30分鐘紫外線、酒精的抵抗力弱。

(如在水中煮沸1分鐘，陽光曝曬2～3小時，75%酒精內(nèi)數(shù)分鐘即死亡。)最簡單的方法是直接焚燒帶有病菌的痰紙。12結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌13致病物質(zhì)（未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生內(nèi)毒素、外毒素、侵襲性酶）1.脂質(zhì)－脂質(zhì)占菌體干重的20～40%，占胞壁干重的60%。①磷脂：能刺激單核細胞增生，并可抑制蛋白酶的分解作用，使病灶形成干酷樣壞死。②索狀因子：是分枝菌酸與海藻糖的復合物，具有破壞細胞線粒體膜，毒害微粒體酶類，抑制中性粒細胞游走和吞噬作用，引起慢性肉牙腫。具有該物質(zhì)的TB菌毒株，在液體培養(yǎng)基中能緊密粘成索狀。③蠟質(zhì)D：是一種肽糖脂與分枝菌酸復合物，能引起遲發(fā)型變態(tài)反應，并具有佐劑作用。④硫酸腦苷脂：TB菌毒株胞壁中含有，能抑制吞噬細胞中的吞噬體與溶酶體融合，使結(jié)核桿菌在細胞內(nèi)存活。13結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌14致病物質(zhì)2.莢膜－主要為多糖，少量脂質(zhì)和蛋白質(zhì)。①粘附和入侵②分解物質(zhì)提供營養(yǎng)③防止有害物質(zhì)入侵3.蛋白質(zhì)－TB菌菌體內(nèi)都含有數(shù)種蛋白質(zhì)，其中重要的蛋白質(zhì)是結(jié)核菌素。結(jié)核茵素與蠟質(zhì)D結(jié)合，能引起較強的遲發(fā)型變態(tài)反應。其他蛋白質(zhì)可引起機體產(chǎn)生相應的抗體，但無保護作用。14結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌15三、臨床意義

TB菌引起結(jié)核病。對人類致病的有人結(jié)核分枝桿菌、牛型結(jié)核桿菌和非洲分枝桿菌，人型結(jié)核桿菌感染引起的發(fā)病率最高。成為全球性重大公共衛(wèi)生問題。所致疾病TB菌的致病作用可能是細菌在細胞內(nèi)增殖引起炎癥反應，以及誘導機體產(chǎn)生免疫反應性損傷，屬于IV型（遲發(fā)型）變態(tài)反應。通過呼吸道、消化道和破損的皮膚粘膜進入機體，侵犯多種組織器官，引起相應器官，其中以肺結(jié)核最常見?？煞衷l(fā)感染和繼發(fā)感染。免疫性TB菌的感染率很高，發(fā)病率卻較低，這表明人體感染結(jié)核桿菌可獲得一定的抗結(jié)核免疫力，這種免疫稱為有菌免疫或傳染性免疫。TB菌的免疫原rRNA和變應原結(jié)核菌素誘發(fā)機體產(chǎn)生由T淋巴細胞介導細胞免疫反應。15結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌16導致的疾病1.肺結(jié)核，飛沫傳播為最常見方式原發(fā)性肺結(jié)核血行播散型肺結(jié)核浸潤型肺結(jié)核慢性纖維空洞型肺結(jié)核結(jié)核性胸膜炎16結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌17肺結(jié)核實驗室診斷結(jié)核菌檢查：痰中找到結(jié)核菌是確診肺結(jié)核的主要依據(jù)。直接厚涂片陽性率優(yōu)于薄涂片無痰或兒童不會咳嗽，可采用清晨的胃洗液找結(jié)核菌，成人亦可通過纖支鏡刷片或涮洗液查找結(jié)核菌PCR法，40個結(jié)核菌即可出現(xiàn)陽性結(jié)果17結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌182.腸結(jié)核患者多有開放性肺結(jié)核或喉結(jié)核，經(jīng)常吞咽含結(jié)核桿菌的痰液而患病。，主要位于回盲部。輔助診斷：結(jié)核菌素試驗

X線胃腸鋇餐造影或鋇劑灌腸結(jié)腸鏡，活檢找到干酪樣壞死性肉芽腫或結(jié)核桿菌具有確診意義。大便找抗酸桿菌？大便結(jié)核桿菌PCR？18結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌193.泌尿生殖系統(tǒng)結(jié)核---尿液4.結(jié)核性腦膜炎---腦脊液5.結(jié)核性腹膜炎---腹水6.關節(jié)結(jié)核---關節(jié)液19結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌20四、微生物學檢驗臨床標本涂片檢查分離培養(yǎng)核酸檢測抗體檢測直接涂片集菌涂片處理標本或無污染標本染色液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基動物試驗

（羅氏或米氏）抗酸..金胺O..

37℃，涂片鏡檢儀器培養(yǎng)

＜7天生長＞7天生長快速生長菌慢生長菌菌種鑒定抗酸染色菌落特點鑒定試驗藥敏試驗20結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌21標本采集感染部位不同，取不同的標本常見標本：痰、纖支鏡刷片、尿、胸腹水、腦脊液、關節(jié)液等檢查方法1.顯微鏡檢查

1）直接涂片：用萋－尼氏法染色，若鏡檢找到抗酸性桿菌，通常應報告：“找到抗酸性桿菌”，需進一步分離培養(yǎng)鑒定。

2）濃縮集菌涂片：如標本中菌量少，雜菌和雜質(zhì)多時，用離心沉淀法將菌濃縮聚集，再取沉淀物涂片作抗酸染色檢查

熒光染料金胺O染色，在熒光下菌體呈橘黃色。萋～尼氏抗酸性染色法染色，菌體染成紅色。21結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌2222結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌2323結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌2424結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌2525結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌2626結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌27菜花樣菌落27結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌282、分離培養(yǎng)

TB菌接種前處理－液化和處理雜菌

4%NaOH、6%H2SO4、胰酶15-20min培養(yǎng)基選擇—羅氏培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基(PNB、T2H、NAP)儀器培養(yǎng)—Bacte460、BacT/ALERT3D液體培養(yǎng)基培養(yǎng)時間—長一般6-8周鑒定1.染色性2.菌落特征3.生長速度4.色素產(chǎn)生5.生化試驗28結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌29鑒別試驗：

NAP(p-nitro-α-acetylamino-β-hydroxy-propiophenome)抑制試驗結(jié)核分枝桿菌NAP-

非結(jié)核分枝桿菌NAP+

29結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌30藥物敏感試驗動物接種

菌株分離和檢測毒力30結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌313、結(jié)核菌素試驗：OT或PPD遲發(fā)型超敏反應結(jié)核菌素的純蛋白衍化物（PPD）皮內(nèi)注射0.1ml（5IU）硬結(jié)≥5mm為陽性反應，如無反應，可在一周后再用5IU，如仍為陰性，大致可除外結(jié)核感染，但也要考慮感染的窗口期，還未建立充分的變態(tài)反應，應用糖皮質(zhì)激素等免疫抑制藥物、免疫力低下或營養(yǎng)不良也成陰性反應。結(jié)核菌素試驗對嬰幼兒的診斷價值較成人大，3歲以下強陽性反應者，應視為有新近感染的活動性肺結(jié)核。

31結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌324、抗體檢測檢測PPDIgG輔助診斷。目前血清抗阿拉伯糖甘露糖脂IgG抗體是一種新的較好的診斷結(jié)核病的指標。5、抗原檢測6、核酸檢測

快速診斷：PCR-特異性核酸探針7、高效液相色譜分析技術測分枝菌酸可鑒定菌種8、全血干擾素測定32結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌3333結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌34基于T淋巴細胞檢測結(jié)核感染的原理結(jié)核感染的免疫應答反應以細胞免疫為主，結(jié)核感染后體內(nèi)長期存在抗原特異性的記憶性T細胞當再次遇到抗原刺激時，能迅速活化增殖，釋放r干擾素r干擾素是結(jié)核分枝桿菌感染后機體免疫應答中最重要的細胞因子34結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌35由來----γ干擾素釋放試驗（IGRAs）IFN-γ在調(diào)節(jié)對結(jié)核分支桿菌的細胞介導的免疫反應中起重要作用，從而使得（interferongammareleaseassays）IGRAs用于檢測結(jié)核感染。IGRAs通過檢測代表結(jié)核分支桿菌的抗原刺激T淋巴細胞反應后釋放IFN-γ的量來判斷是否存在結(jié)核桿菌感染。35結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌36T-SPOT-TB—定義以結(jié)核特異的混合抗原A和混合抗原B（分別為ESAT-6和CFP-10的部分多肽片斷）刺激結(jié)核桿菌感染者外周血單核細胞中存在結(jié)核特異的活化T淋巴細胞分泌γ干擾素，從而應用ELISPOT方法檢測對結(jié)核桿菌反應的效應T細胞數(shù)量，對結(jié)核桿菌感染進行輔助診斷。特異抗原ELISPOT活化的T細胞否存在感染36結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌37T-SPOT-TB—幾個概念ELISPOT（enzyme-linkedimmunospotassay,）是一種新型的免疫酶技術，它是從單細胞水平檢測分泌抗體細胞或分泌細胞因子細胞。（簡單說：可以數(shù)出分泌特異因子的細胞的個數(shù)）ESAT-6和CFP-10蛋白：存在結(jié)核分枝桿菌及少數(shù)致病非結(jié)核分枝桿菌中名為“RD1”的基因序列，編碼產(chǎn)生兩種蛋白。在卡介苗菌株和大部分環(huán)境中的分枝桿菌基因中則缺乏次序列。37結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌38基于T淋巴細胞檢測結(jié)核感染的原理T-SPOT.TB技術：利用結(jié)核桿菌感染者外周血單個核細胞（PBMC）中存在結(jié)核特異性T細胞，這些淋巴細胞在受到結(jié)核特異抗原刺激后分泌r干擾素而設計的T細胞免疫斑點試驗。檢測外周血中受結(jié)核特異抗原刺激釋放r干擾素的T淋巴細胞，經(jīng)酶聯(lián)免疫顯色后，通過ELISPOT分析系統(tǒng)對斑點進行計數(shù)，1個斑點代表一個細胞，計算計算對結(jié)核桿菌反應的效應T細胞數(shù)量38結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌39基于T淋巴細胞檢測結(jié)核感染的原理包39結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌40基于T淋巴細胞檢測結(jié)核感染的原理40結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌41基于T淋巴細胞檢測結(jié)核感染的原理41結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌42基于T淋巴細胞檢測結(jié)核感染的原理空白對照孔內(nèi)斑點數(shù)小于10且陽性對照孔內(nèi)斑點數(shù)大于20時視為試驗有效T-SPOT.TB試驗結(jié)果用每106PBMCs中斑點形成細胞（SFCs）的數(shù)目來描述，即SFCs/106PBMCs42結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌43T-SPOT.TB的臨床意義T-SPOT.TB高靈敏度

43結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌44T-SPOT-TB—解釋非黃金標準敏感性95.3%-98.8%特異性94.1%-100%薩斯分枝桿菌(Mycobacteriumkansasii)、海分枝桿菌(Mycobacteriummarinum)、斯氏分枝桿菌(Mycobacteriumszulgai)等少數(shù)分枝桿菌中也存在完整RD1區(qū)，編碼ESAT6和CFP10,可造成檢測結(jié)果成假陽性。44結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌45T-SPOT-TB—應用在活動性結(jié)核病中的診斷意義

1.敏感性86-94%，特異性89-99%2.在肝移植術后、艾滋病、血液腫瘤等免疫抑制患者中，T-SPOT-TB陽性率略低于免疫正常組，但仍具有較高的敏感性，且優(yōu)于結(jié)核菌素試驗。

3.在肺外結(jié)核患者診斷中的，敏感性優(yōu)于結(jié)核菌素試驗。

4.對小于4歲兒童，與結(jié)核菌素實驗比較敏感性無優(yōu)勢，美國CDC更推薦結(jié)核菌素實驗。45結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/20242024/5/9結(jié)核分枝桿菌46T-SPOT-TB—應用在結(jié)核性腦膜炎、結(jié)核性胸膜炎中的診斷意義

1.敏感性優(yōu)于ADA、TB-DNA，約在62-75%，特異性無統(tǒng)計學差異。在結(jié)核病治療中的評價意義

1.其數(shù)值高低與嚴重程度無關。

2.效應T細胞隨結(jié)核桿菌的清除而消失，其陰性及陽性結(jié)果可作為評估治療效果的手段之一。

46結(jié)核分枝桿菌資料講解5/9/202