食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用

第九章體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用1食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024重點(diǎn)內(nèi)容：哺乳動(dòng)物細(xì)胞製備和培養(yǎng)以及細(xì)胞培養(yǎng)在食品毒理學(xué)中應(yīng)用。難點(diǎn)內(nèi)容：哺乳動(dòng)物細(xì)胞製備的基本技術(shù)。整體要求：掌握哺乳動(dòng)物細(xì)胞製備和培養(yǎng)以及細(xì)胞培養(yǎng)在食品毒理學(xué)中應(yīng)用。熟悉亞細(xì)胞組分製備及其檢測(cè)方法、生物膜的製備與其性質(zhì)的研究方法以及分子生物學(xué)技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用。瞭解體外試驗(yàn)系統(tǒng)。2食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024第九章主要內(nèi)容1.體外實(shí)驗(yàn)2.哺乳動(dòng)物細(xì)胞製備和培養(yǎng)3.新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用3食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024體外實(shí)驗(yàn)4食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024體外試驗(yàn)－－概述分類①篩選試驗(yàn)②附加試驗(yàn)③替代試驗(yàn)5食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024體外試驗(yàn)－－概述體外試驗(yàn)的優(yōu)缺點(diǎn)6食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024體外試驗(yàn)－－概述體外試驗(yàn)的優(yōu)缺點(diǎn)－－不足之處：①體外到體內(nèi)外推的問(wèn)題；②體外毒性試驗(yàn)難以預(yù)測(cè)慢性毒性。7食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024體外試驗(yàn)－－體外試驗(yàn)系統(tǒng)(一)臟器灌流(二)臟器切片(三)原代細(xì)胞培養(yǎng)(四)細(xì)胞培養(yǎng)(五)組織勻漿(六)亞細(xì)胞組分(七)酶8食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024哺乳動(dòng)物細(xì)胞製備和培養(yǎng)9食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024哺乳動(dòng)物細(xì)胞製備和培養(yǎng)細(xì)胞是生物體的結(jié)構(gòu)和功能單位，把細(xì)胞從生物體中分離出來(lái)，在體外模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，使之在人工環(huán)境下存活並生長(zhǎng)，以便於更直接地研究細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能、代謝和細(xì)胞對(duì)環(huán)境諸因素影響的反應(yīng)等，這就是細(xì)胞培養(yǎng)(CellCulture)研究的內(nèi)容。10食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024哺乳動(dòng)物細(xì)胞製備和培養(yǎng)細(xì)胞毒理學(xué)是研究外源性有害因數(shù)包括物理、化學(xué)和生物因數(shù)對(duì)生命細(xì)胞損傷作用規(guī)律，探討毒作用機(jī)制，並對(duì)其作出危險(xiǎn)評(píng)估的一門(mén)方法學(xué)，是毒理學(xué)的一個(gè)重要分支。細(xì)胞毒理學(xué)研究方法的特點(diǎn)：(1)操作簡(jiǎn)便、實(shí)驗(yàn)花費(fèi)少；(2)可在細(xì)胞存活的狀態(tài)下研究分析和評(píng)價(jià)；(3)實(shí)驗(yàn)條件易於控制，實(shí)驗(yàn)重複性好；(4)可避免實(shí)驗(yàn)動(dòng)物個(gè)體差異。11食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024哺乳動(dòng)物細(xì)胞製備和培養(yǎng)－－概述細(xì)胞在毒理學(xué)中應(yīng)用的優(yōu)、缺點(diǎn)：12食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024哺乳動(dòng)物細(xì)胞製備和培養(yǎng)－－基本技術(shù)儀器與設(shè)備培養(yǎng)用液消毒技術(shù)13食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024哺乳動(dòng)物細(xì)胞製備和培養(yǎng)－－培養(yǎng)細(xì)胞的鑒定

污染鑒定生存指標(biāo)細(xì)胞特性鑒定14食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024哺乳動(dòng)物細(xì)胞製備和培養(yǎng)－－細(xì)胞培養(yǎng)在食品毒理學(xué)中應(yīng)用毒理學(xué)中應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題：1.細(xì)胞類型的選擇2.代謝活化3.受試物的給予4.設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照組5.毒性指標(biāo)的選擇15食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024哺乳動(dòng)物細(xì)胞製備和培養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)網(wǎng)路資源1．/德克薩斯大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)研究生培養(yǎng)方面的網(wǎng)站2．/bio/bio181/BIOBK/BioBookCELL2.html一個(gè)細(xì)胞學(xué)教學(xué)網(wǎng)3．/bio/BIO181/BIOBK/BioBookTOC.html國(guó)外的細(xì)胞生物學(xué)線上圖書(shū)4．/courses/加州大學(xué)伯克利分校細(xì)胞與分子教學(xué)網(wǎng)站5．/Science/Cell_Biology/細(xì)胞生物學(xué)網(wǎng)址16食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用17食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用一、PCR技術(shù)PCR(polymerasechainreaction)技術(shù)稱聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)，又稱無(wú)細(xì)胞克隆技術(shù)，是一種對(duì)特定的DNA片段在體外進(jìn)行快速擴(kuò)增的新方法。其主要過(guò)程由變性、退火和延伸三個(gè)步驟反復(fù)的迴圈組成。18食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用二、毒理學(xué)中的mRNA定性與定量的測(cè)定方法Northern印跡分析(Northernblotanalysis)是廣泛使用的mRNA測(cè)定方法之一，其基本原理是將RNA固定於帶電荷的膜上，用特定的RNA探針與其雜交。19食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用三、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（一）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的產(chǎn)生1974年。Jaenisch等將病毒SV40的DNA注入小鼠的胚泡，發(fā)現(xiàn)40％子代鼠的器官中整合有外源基因，首次成功地培育了轉(zhuǎn)基因動(dòng)物；1982年，Palmiter等用顯微注射法，將小鼠金屬硫蛋白啟動(dòng)子和大鼠生長(zhǎng)激素基因拼接轉(zhuǎn)入小鼠受精卵原核中，得到7只轉(zhuǎn)基因小鼠。20食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用三、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（二）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型的構(gòu)建目的基因的構(gòu)建目的基因的導(dǎo)入轉(zhuǎn)基因動(dòng)物篩選及繁育轉(zhuǎn)基因品系21食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用三、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（三）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型在毒理學(xué)中的作用致突變檢測(cè)模型致癌檢測(cè)的模型其他毒理學(xué)機(jī)制研究模型22食品毒理學(xué)課件體外實(shí)驗(yàn)與新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用5/9/2024新生物技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用四、基因晶片技術(shù)基因晶片(genechip)，又稱DNA晶片，是指將許多特定的寡核苷酸片段或基因片段作為探針，有規(guī)律地排列固定於支持物上，然後與待測(cè)的標(biāo)記樣品的基因按堿基配對(duì)的原理進(jìn)行雜交，再通過(guò)鐳射共聚焦螢光檢測(cè)系統(tǒng)等對(duì)晶片進(jìn)行掃描，並配以電腦系統(tǒng)對(duì)每一探針上的螢光信號(hào)作比較和檢測(cè)，從而迅速得出所需要的資訊，分析出待測(cè)樣品DNA序列。23