動(dòng)物胚胎移植的原理及操作程序（動(dòng)物繁殖技術(shù)課件）

胚胎移植的原理胚胎移植

胚胎移植又稱受精卵移植，俗稱“借腹懷胎”，是指將受精卵或早期胚胎移植到受體動(dòng)物輸卵管或子宮角內(nèi)，通過受體動(dòng)物的妊娠而孕育出后代的技術(shù)。

胚胎移植

供體：經(jīng)過超數(shù)排卵提供卵母細(xì)胞、受精卵或早期胚胎的動(dòng)物。供體決定移植后代的遺傳持性，在動(dòng)物繁殖生產(chǎn)或育種工作中，供體通常為優(yōu)良品種或優(yōu)秀個(gè)體，或特定目的的動(dòng)物種類或個(gè)體。胚胎移植

受體：接受不同來源胚胎移植的動(dòng)物。受體動(dòng)物只影響其體質(zhì)發(fā)育，一般為生產(chǎn)性能一般的品種或個(gè)體。胚胎移植（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）

動(dòng)物胚胎移植從19世紀(jì)后期的嘗試距今已有100多年的歷史。實(shí)驗(yàn)生物學(xué)階段；家畜試驗(yàn)階段；生產(chǎn)應(yīng)用階段。胚胎移植概況1978年我國(guó)首次牛胚胎移植成功1982年我國(guó)首次牛冷凍（常規(guī)）胚胎移植成功胚胎移植概況充分發(fā)揮優(yōu)良母畜的繁殖潛力，加快品種改良和育種的進(jìn)程加快特定品種擴(kuò)群速度保護(hù)遺傳資源誘發(fā)肉畜懷雙胎，提高生產(chǎn)效率代替種畜引進(jìn)滿足防疫需要和克服不孕為發(fā)育生物學(xué)和其他胚胎生物技術(shù)提供研究手段胚胎移植的意義生理學(xué)基礎(chǔ)母畜發(fā)情后的生殖生理變化特性早期胚胎發(fā)育與營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)特性母體的妊娠識(shí)別與妊娠免疫學(xué)特性胚胎遺傳特性的穩(wěn)定性胚胎移植的原理

胚胎移植的價(jià)值原則：胚胎移植技術(shù)只適用于提高優(yōu)良品種、優(yōu)秀個(gè)體或具有特殊用途的母畜的繁殖效率，要考慮供體的種用價(jià)值或經(jīng)濟(jì)價(jià)值，通過胚胎移植迅速提高優(yōu)良品種或優(yōu)秀個(gè)體后代數(shù)量，提高群體生產(chǎn)性能和畜牧養(yǎng)殖效益。胚胎移植的原則移植前后所處環(huán)境的一致性分類學(xué)上的一致性：供體和受體的親緣關(guān)系比較近，一般要求是同種。生理學(xué)上的一致性：保證供體和受體的發(fā)情同步化，一般要求相差不超過24h。解剖學(xué)上的一致性：移植胚胎的部位要與胚胎在供體動(dòng)物的生理部位一致。胚胎移植的原則

（1）胚胎收集的期限：胚胎采集和移植的期限(胚胎的日齡)不能超過周期黃體的壽命.最遲要在周期黃體退化之前數(shù)日進(jìn)行。因此，胚胎采集多在發(fā)情配種后的3~8d內(nèi)進(jìn)行，受體也在相同時(shí)間接受移植。胚胎移植的要求胚胎移植的要求

（2）胚胎的質(zhì)量：移植的胚胎必須經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定，確認(rèn)形態(tài)完整、發(fā)育正常，才能移植給同期發(fā)情受體。同時(shí)，在操作中須避免胚胎受到物理、化學(xué)、微生物等任何不良因素的影響而危及胚胎的存活和發(fā)育能力。胚胎移植的要求（3）對(duì)場(chǎng)地、設(shè)備和技術(shù)的要求：胚胎移植應(yīng)配備能滿足工作要求的無菌手術(shù)室、胚胎無菌操作室及其附屬設(shè)施等基本條件，以及消毒滅菌、動(dòng)物保定、胚胎操作或保存（培養(yǎng)）設(shè)備等基本設(shè)備。在胚胎移植前，須制訂詳細(xì)的操作程序，并嚴(yán)格按照程序操作。胚胎移植的操作程序供體選擇

供體應(yīng)該是良種母畜，最好是青壯年母畜，具備遺傳優(yōu)勢(shì)，生產(chǎn)性能或經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，譜系清楚，健康無病，營(yíng)養(yǎng)良好，體質(zhì)健壯。

經(jīng)產(chǎn)母畜應(yīng)在生殖機(jī)能恢復(fù)正常后方可作為供體。受體選擇

受體母畜可選用非優(yōu)良品種的個(gè)體，但要求體格健壯，營(yíng)養(yǎng)狀況良好，處于未孕狀態(tài)，無生殖系統(tǒng)疾病。青年母畜和經(jīng)產(chǎn)母畜均可作為胚胎移植受體。

在一般情況下，難以找到足夠數(shù)量的自然發(fā)情母畜作受體，所以多采用對(duì)受體母畜進(jìn)行同期發(fā)情處理。同期發(fā)情利用某些外源激素人為控制并調(diào)整一群母畜發(fā)情周期的過程，使之在預(yù)定的時(shí)間內(nèi)集中發(fā)情，以便有計(jì)劃地合理組織胚胎移植所進(jìn)行的同期化處理方法，也稱同期發(fā)情。超數(shù)排卵在母畜（供體）發(fā)情周期的某一時(shí)期，用外源性的促性腺激素處理，從而促使其卵巢上較正常有更多個(gè)卵泡同時(shí)發(fā)育，并且能夠同時(shí)或準(zhǔn)同時(shí)排出多個(gè)具有受精能力的卵子，這一技術(shù)稱為超數(shù)排卵。供體的超數(shù)排卵（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）供體的發(fā)情鑒定與配種

結(jié)束超數(shù)排卵處理后，密切觀察供體的發(fā)情征狀，每天早、中、晚至少觀察3次。為了獲得較多發(fā)育正常的胚胎，應(yīng)根據(jù)育種的需要，使用活率高、密度大的優(yōu)質(zhì)精液，輸精次數(shù)增加到2~3次，兩次輸精間隔為8~10h。胚胎的采集

胚胎的采集:在超數(shù)排卵動(dòng)物發(fā)情配種后一定時(shí)間把受精卵或早期胚胎從超排配種動(dòng)物的生殖道中沖洗出來，并收集在器皿內(nèi)。

沖洗時(shí)必須考慮排卵時(shí)間、配種時(shí)間，根據(jù)發(fā)育階段確定胚胎的具體位置，才能得到較高的收集率。胚胎的采集

胚胎采集方法：

（1）胚胎手術(shù)法：適用于羊、豬和其他中小動(dòng)物；

（2）胚胎非手術(shù)法：適用于牛、馬等大動(dòng)物；

（3）胚胎離體生殖道回收法：小鼠、大鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。123畜別排卵時(shí)間發(fā)育速度2細(xì)胞4細(xì)胞8細(xì)胞桑葚胚囊胚期進(jìn)入子宮牛發(fā)情結(jié)束后10~12h1~1.52~2.52.5~34~67~83~3.5綿羊發(fā)情開始后24~30h1~1.51.5~22~2.53~45~73~4豬發(fā)情開始后35~45h1~1.52.5~33~44~55~62~2.5兔交配后10~11h11~1.51.5~22.53~43~4排卵時(shí)間和胚胎發(fā)育速度123胚胎的采集手術(shù)法：通過手術(shù)操作直接從雌性動(dòng)物輸卵管或子宮角回收受精卵或不同發(fā)育階段早期胚胎。

優(yōu)點(diǎn)：回收胚胎的數(shù)量較多

缺點(diǎn)：操作復(fù)雜，易引起輸卵管粘連，嚴(yán)重造成不孕。123胚胎的采集從子宮角頂端沖洗輸卵管：牛、羊、兔從輸卵管傘處沖洗輸卵管：豬、馬從子宮角上端向基部沖洗（張忠成，2004.家畜繁殖學(xué)）123胚胎的采集非手術(shù)法：

指借助胚胎非手術(shù)回收器械，經(jīng)陰道和子宮頸回收子宮角胚胎的方法。該方法簡(jiǎn)單易行，對(duì)生殖器官傷害程度小。123（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）胚胎的采集123胚胎的采集胚胎離體生殖道回收法：

先將動(dòng)物處死，分離輸卵管或子宮角，在離體條件下采集輸卵管內(nèi)受精卵和早期卵裂階段胚胎，或子宮角內(nèi)不同發(fā)育階段胚胎。123（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）胚胎的采集子宮角分離輸卵管分離胚胎檢查和鑒定

胚胎的檢查和鑒定：在體視顯微鏡下，從回收的沖胚液中檢出胚胎，經(jīng)過胚胎凈化處理和形態(tài)質(zhì)量鑒定，選出符合胚胎移植或科學(xué)研究要求的胚胎，并對(duì)其質(zhì)量和活力進(jìn)行評(píng)定（或等級(jí)分類）。胚胎檢查胚胎的檢查：

（1）非手術(shù)法：收集回收液，靜置后用緩慢吸除上部液體，或者在濾網(wǎng)之上吸去上部沖胚液，將最后剩余的50毫升左右回收沖胚液、倒入大檢卵杯中，用胚胎吸管吸去液體表面泡沫后在體視顯微鏡下檢出胚胎。胚胎檢查胚胎的檢查：

（2）手術(shù)法：由于使用的沖胚液總液體量較少，可以直接將集卵杯或?qū)⑵渌萜魇占幕厥找旱谷霗z卵杯，在體視顯微鏡下檢出胚胎。

（3）離體生殖道法回收胚胎：直接將表面皿放置在鏡下檢出胚胎。胚胎鑒定胚胎的鑒定：

（1）形態(tài)學(xué)法：觀察胚胎的形態(tài)、卵裂球的形態(tài)、卵裂球的大小與均勻度、色澤、細(xì)胞密度與透明帶間隙以及細(xì)胞變性等情況，將胚胎進(jìn)行質(zhì)量分級(jí)。

根據(jù)胚胎的形態(tài)特征將胚胎分為A（優(yōu)）、B（良）、C（中）、D（劣）四個(gè)等級(jí)，只有A和B級(jí)胚胎可以用于鮮胚保存和遠(yuǎn)距離運(yùn)輸。A級(jí)B

級(jí)C

級(jí)D

級(jí)胚胎分級(jí)胚胎鑒定（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）級(jí)別標(biāo)準(zhǔn)A級(jí)胚胎發(fā)育階段與胚齡一致，形態(tài)完整，輪廓清晰，呈球形，分裂球大小均勻，結(jié)構(gòu)緊湊，色調(diào)和透明帶適中，無游離的細(xì)胞和液泡（或很少），變性細(xì)胞比例<10%。B級(jí)胚胎發(fā)育階段與胚齡基本一致，輪廓清晰，分裂球大小基本一致，色調(diào)和透明帶及細(xì)胞密度良好，可見到一些游離的細(xì)胞和液泡，變性細(xì)胞比例10%~30%。C級(jí)胚胎發(fā)育階段與胚齡不太一致，輪廓不清晰，色調(diào)變暗，結(jié)構(gòu)較松散，游離的細(xì)胞和液泡較多，變性細(xì)胞比例30%~50%。D級(jí)有碎片的胚胎，細(xì)胞無組織結(jié)構(gòu)，變性細(xì)胞占胚胎大部分，約75%。其中，A、B、C級(jí)胚胎為可用胚胎，D級(jí)為不可用胚胎。胚胎分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)胚胎鑒定胚胎的鑒定：（2）熒光活體染色法：將二醋酸熒光素（FDA）加入待鑒定的胚胎中，培養(yǎng)3~6min，活胚胎顯示熒光，死胚胎無熒光。（3）測(cè)定代謝活性法：即通過測(cè)定胚胎的代謝活性，鑒定胚胎的活力。其方法是將待鑒定的胚胎放入含有葡萄糖的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)1h后，測(cè)定葡萄糖的消耗量，每培養(yǎng)1h消耗葡萄糖2~5μg以上者為活胚胎。胚胎的保存

胚胎的保存是指將胚胎在體內(nèi)或體外正常發(fā)育溫度下，暫時(shí)貯存起來而不使其活力喪失；或?qū)⑵浔４嬗诘蜏鼗虺蜏厍闆r下，使細(xì)胞處于新陳代謝和分裂速度減慢或停止，一旦恢復(fù)正常發(fā)育溫度，又能繼續(xù)發(fā)育。

目前，哺乳動(dòng)物胚胎的保存方法有常溫保存、低溫保存和超低溫冷凍保存。胚胎的保存（1）常溫保存：將胚胎置于15~25℃的培養(yǎng)液中保存。這種溫度下胚胎能保存24h，隨時(shí)間的延長(zhǎng)其活力下降，此方法只能做短暫的保存和運(yùn)輸。（2）低溫保存：將胚胎置于0~10℃保存，此時(shí)，胚胎卵裂暫停，代謝減慢。這種方法使細(xì)胞的某些成分特別是酶處于不穩(wěn)定狀態(tài)，保存時(shí)間較短。但低溫保存操作簡(jiǎn)便，設(shè)備簡(jiǎn)單，適宜野外應(yīng)用。（3）超低溫保存:將胚胎置于超低溫環(huán)境中（-196℃）保存，其新陳代謝及發(fā)育暫時(shí)完全停止，但仍具有活力，一旦解凍、移植即可產(chǎn)生后代。其最大的優(yōu)點(diǎn)是胚胎可以長(zhǎng)期保存，而對(duì)其活力無影響。胚胎移植

手術(shù)法移植：在受體腹部做一切口，找到排卵一側(cè)的卵巢并觀察黃體的發(fā)育狀況，根據(jù)胚胎的發(fā)育階段，用注射器或移植管將胚胎注人排卵卵巢同側(cè)子宮角上端或輸卵管壺腹部?jī)?nèi)，然后迅速復(fù)位、縫合。胚胎移植

非手術(shù)法移植:將一只手伸入直腸，先檢查黃體位于哪一側(cè)及其發(fā)育情況然后握住子宮頸(如同直腸把握輸精操作)，另一只手將裝有發(fā)育正常胚胎的移植器經(jīng)陰道、子宮頸、子宮體最后插入與黃體同側(cè)的子宮角內(nèi)，將胚胎注入。羊的胚胎移植供體羊的選擇

供體羊：供體羊應(yīng)具備遺傳優(yōu)勢(shì)在育種上應(yīng)選擇生產(chǎn)性能高、經(jīng)濟(jì)價(jià)值大的母羊作為供體;供體羊應(yīng)具備良好的繁殖能力，即沒有遺傳缺陷和其他生殖疾病，發(fā)情周期正常，發(fā)情癥狀明顯;供體羊應(yīng)營(yíng)養(yǎng)良好，健康無病。年齡在2.5～6歲以內(nèi)為宜。

受體羊的選擇

受體羊：受體羊應(yīng)選1~3歲的雜交一代或當(dāng)?shù)啬秆?，胎次?~3胎，體格接近供體羊，體重30kg以上，具有正常的發(fā)發(fā)情周期，無繁殖障礙，無傳染病，膘情中上等。羊的同期發(fā)情

同期發(fā)情：在同一天內(nèi)用孕激素處理，同時(shí)放置陰道栓，作用9~12天，供體與受體的發(fā)情時(shí)間相差不超過一天。

可使用藥物：孕激素或前列腺素。羊的同期發(fā)情陰道栓（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）供體羊的超數(shù)排卵

應(yīng)用超排技術(shù)使羊每次排卵增加，常用的激素有FSH、LH、PMSG、hCG、PGF2α和孕激素等。

超排方案：FSH+PG法

CIDR+FSH+PG法

供體羊的配種（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）自然交配人工輸精胚胎收集

（1）胚胎手術(shù)物品準(zhǔn)備：在羊胚胎手術(shù)回收前，按照胚胎移植主要設(shè)備、器材與藥品、試劑目錄準(zhǔn)備所需物品，尤其是羊胚胎回收手術(shù)器械和專用器材。胚胎收集（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）胚胎收集（2）手術(shù)動(dòng)物準(zhǔn)備：對(duì)胚胎手術(shù)回收母羊，應(yīng)做好手術(shù)準(zhǔn)備工作。包括術(shù)前饑餓、檢查卵巢反應(yīng)、手術(shù)部位剃毛、麻醉與保定、手術(shù)部位皮膚消毒和覆蓋固定手術(shù)創(chuàng)巾。胚胎收集（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）胚胎收集

（3）手術(shù)人員準(zhǔn)備：手術(shù)人員一般包括術(shù)者、手術(shù)助手、手術(shù)器械助手和胚胎回收專用器材助手，以上人員始終保持無菌狀態(tài)。主要包括手臂皮膚清洗與消毒、穿戴無菌手術(shù)服、口罩、帽子和手術(shù)手套。胚胎收集

（4）手術(shù)操作：選擇適宜的手術(shù)切口，用手術(shù)刀切開腹壁皮膚及皮下淺層組織，切開和分離各層組織時(shí)，避免切斷或損傷較大血管，引出子宮角、輸卵管和卵巢，回收胚胎，閉合切口。

胚胎回收：輸卵管胚胎回收，子宮角胚胎回收。輸卵管取胚1.選擇合適外徑的輸卵管胚胎回收管，插入輸卵管開口部?jī)?nèi)2厘米左右，用無齒手術(shù)鑷子或血管夾固定，防止回收管從輸卵管內(nèi)滑脫。輸卵管取胚2.將沖胚液進(jìn)液針由子宮角前段向輸卵管方向插入宮管接合部腔內(nèi)，捏住子宮角前端針頭插入的位置，防止沖胚液注入時(shí)倒流入子宮腔。輸卵管取胚3.沖胚液進(jìn)液針固定后，以右手持吸有沖胚液的注射器緩緩?fù)苿?dòng)活塞，使沖胚液經(jīng)宮管接合部注入輸卵管，流經(jīng)輸卵管后再經(jīng)輸卵管胚胎回收管流入集卵容器。輸卵管取胚4.一側(cè)輸卵管沖洗完畢后，除去器械，檢查輸卵管和卵巢有無出血，止血并用生理鹽水沖洗后，采用類似的操作方法，沖洗另一側(cè)輸卵管。

羊的輸卵管胚胎回收沖胚液用量為每側(cè)10～15毫升。輸卵管取胚

（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）子宮角取胚1.先在子宮角大彎上，避開可見血管，沿子宮角大彎向子宮角尖端方向插入胚胎回收針，確認(rèn)回收針進(jìn)入子宮腔后，用套有硅膠管的醫(yī)用腸鉗連同子宮角夾住胚胎回收針。子宮角取胚2.給子宮角注入沖胚液時(shí)，先用血管夾夾住宮管接合部靠近輸卵管側(cè)，并將沖胚液進(jìn)液針由從宮管接合部子宮側(cè)約2厘米處向?qū)m管接合部方向插入，使針尖抵達(dá)宮管接合部，以左手拇指和食指輕輕固定子宮角前端針頭插入的位置

、防止針頭滑脫。子宮角取胚3.沖胚液進(jìn)液針插入后，右手持吸有沖胚液的注射器緩緩?fù)苿?dòng)活塞，沖胚液由子宮角注入宮管接合部管腔，由于宮管接合部靠近輸卵管側(cè)被血管夾阻塞，注入的沖胚液會(huì)在宮管接合部管腔內(nèi)轉(zhuǎn)向流入子宮角，并經(jīng)胚胎回收針及其連接的硅膠管流入集卵容器。子宮角取胚4.一側(cè)子宮角沖洗完畢后，除去器械，檢查針孔是否有出血，如有出血、采用按壓止血。然后以類似方法沖洗另一側(cè)子宮角。

羊子宮角胚胎回收的沖胚液用量為每側(cè)30～35毫升。子宮角取胚（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）胚胎檢查

將盛有沖胚回收液的器皿置于無菌室靜置10~20min，吸出上面的沖洗液，將器皿放在體視顯微鏡觀察胚胎的形態(tài)和發(fā)育情況，收集外形整齊、大小一致、卵裂球分裂均勻、外膜完整的胚胎，吸入細(xì)管內(nèi)備用。胚胎移植

（1）胚胎移植手術(shù)前動(dòng)物和手術(shù)人員準(zhǔn)備：胚胎移植手術(shù)前動(dòng)物和手術(shù)人員準(zhǔn)備與胚胎回收手術(shù)前動(dòng)物準(zhǔn)備和手術(shù)人員準(zhǔn)備方法類似。胚胎移植

（2）胚胎移植器械及胚胎的裝入：先給移植管內(nèi)吸入一段胚胎保存液（液段C，該段液體可稍長(zhǎng)），緊接著吸入一個(gè)氣泡，之后連同胚胎吸入第二段保存液（液段B），再吸入第二個(gè)氣泡，最后再吸入一段保存液（液段A），含胚胎段液體兩側(cè)各加一個(gè)氣泡的方式可防止在移動(dòng)移植管時(shí)丟失胚胎。胚胎移植

（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）A.液段3;B.

含胚胎液段2;

C.

液段1;

D.

移植管細(xì)段;

E.

移植管粗段;

F.

硅膠管;

Ｇ.玻璃珠;H.氣泡2;

I.

氣泡1.輸卵管移植管裝管胚胎移植

（3）胚胎手術(shù)移植操作步驟：腹壁切開，引出子宮角、輸卵管和卵巢，子宮、卵巢暴露后，檢查卵巢上黃體有無和黃體發(fā)育情況。胚胎移植手術(shù)時(shí)，應(yīng)盡量減輕手術(shù)損傷。操作要輕巧，動(dòng)作要穩(wěn)妥可靠，避免過度牽拉生殖器官，禁止擠壓卵巢。輸卵管移植

輸卵管移植時(shí)，引出黃體側(cè)輸卵管，找到輸卵管輸卵管喇叭口，將吸有胚胎的移植管由喇叭口插入輸卵管2～3厘米，輕輕給硅膠管施壓，將胚胎注入輸卵管。子宮角移植

子宮角移植時(shí)，在黃體側(cè)子宮角前1/3處避開血管把胚胎移植針插入子宮角內(nèi)，擺動(dòng)針頭，確認(rèn)針頭在子宮腔時(shí)注入胚胎。胚胎移植

羊的手術(shù)法移植胚胎（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）術(shù)后護(hù)理

術(shù)后護(hù)理：為了防止術(shù)后繼發(fā)感染，需連續(xù)注射抗生素3-7d，最好單獨(dú)組群，避免應(yīng)激，給予充足的營(yíng)養(yǎng)，注意羊舍清潔衛(wèi)生，并及時(shí)做好妊娠診斷，做好保胎防流工作。

妊娠診斷工作：可采取公羊試情法及超聲波檢查法。牛的非手術(shù)法胚胎移植供體牛的選擇

供體牛：供體牛應(yīng)選擇健康的良種母牛，具有較高的育種價(jià)值、良好的生產(chǎn)性能、穩(wěn)定的遺傳性、旺盛的繁殖機(jī)能，而且超排效果較好，年齡選擇最好在14月齡至10歲之間。受體牛的選擇

受體牛：受體?？蛇x用非良種個(gè)體，要求體型較大、膘情中等，具有正常的發(fā)情周期，繁殖性能良好，無繁殖機(jī)能和傳染疾病。供體牛的同步發(fā)情同步發(fā)情方法：縮短黃體期的前列腺法（PG法）、延長(zhǎng)黃體期的孕酮法。供體牛的超數(shù)排卵牛有FSH+PG法和CIDA+FSH+PG法兩種；發(fā)情后8－13天開始；常用的激素為FSH；注射方法一般是連續(xù)4d遞減注射,每天2次,間隔12小時(shí)（半衰期短）；發(fā)情后8－12小時(shí)配種，間隔12小時(shí)再配種一次。供體牛的超數(shù)排卵（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）

配種操作的要求：選擇系譜清晰，具有優(yōu)良性狀的種公牛，配種時(shí)對(duì)母牛外陰部清洗消毒，保持輸精槍無菌，選擇合適的輸精槍和輸精部位，輸精次數(shù)不少于2次。

確定發(fā)情時(shí)12h后進(jìn)行第一次人工輸精，間隔12h進(jìn)行第二次人工輸精，每次輸精的有效精子不少于3×107。供體牛的配種胚胎收集（1）動(dòng)物準(zhǔn)備：

牛的胚胎非手術(shù)回收前，需對(duì)動(dòng)物禁食24小時(shí)以上，以減輕腹壓和瘤胃的壓力對(duì)非手術(shù)回收操作的影響。在沖胚前使其鎮(zhèn)靜，作尾椎硬膜外局部麻醉，以松弛子宮頸環(huán)肌。對(duì)外陰進(jìn)行清洗、消毒，并吸除子宮頸粘液。

胚胎收集

（2）操作步驟：

1.插入子宮角胚胎回收管：術(shù)者通過直腸把握，將帶有鋼芯的子宮角胚胎回收管經(jīng)過母牛陰道和子宮頸送入一側(cè)子宮角大彎處。再將鋼芯稍微向后抽出，再將胚胎回收管送到子宮角大彎前至小彎基部。

胚胎收集2.利用氣囊固定子宮角胚胎回收管：利用注射器通過胚胎回收管后端的送氣管向回收管前端的氣囊慢慢送入空氣，一般青年牛充氣8～10毫升，經(jīng)產(chǎn)牛12～15毫升，充氣結(jié)束后，封閉送氣管，抽出鋼芯。

胚胎收集

3.子宮角胚胎沖洗：將胚胎回收管的沖胚液通過進(jìn)液管緩慢向子宮內(nèi)灌注，再回收沖胚液，反復(fù)沖洗，每次沖胚液注入量為30～50毫升，單側(cè)子宮角沖胚液總量為300～500毫升。兩側(cè)沖完，向子宮內(nèi)注入抗菌藥物。

子宮角回收的液體較多，可以通過專用胚胎漏斗除去多余的沖卵液，在實(shí)體顯微鏡下進(jìn)行檢卵；

胚胎的質(zhì)量評(píng)定：主要采用形態(tài)學(xué)方法，優(yōu)質(zhì)胚胎才能用于進(jìn)行胚胎冷凍或移植。胚胎檢查