2019年臨床醫(yī)學(xué)檢驗技師考試《微生物檢驗》輔導(dǎo)講義 腸桿菌科及檢驗

腸桿菌科及檢驗

?考點

＞概述

概念；命名與分類原則；共同特點；自然與人體內(nèi)的分布；微生物學(xué)檢查方法；臨床意義。

＞埃希菌屬、沙門菌屬、志賀菌屬、變形桿菌屬、耶爾森菌屬及其他腸桿菌科細菌。

生物學(xué)性狀；微生物學(xué)檢驗；臨床意義。

【內(nèi)容講解】

一、概述（共性）

腸桿菌科是由多個菌屬組成，6桿菌，生物學(xué)性狀相似。

大多數(shù)腸道桿菌屬于正常菌群。當機體免疫力降低或侵入腸道外組織時成為條件致病菌而引起疾病。

部分為致病性細菌。

（一）分類

腸桿菌科細菌的種類繁多。主要根據(jù)細菌的形態(tài)、生化反應(yīng)、抗原性質(zhì)以及核酸相關(guān)性進行分類。根

據(jù)《伯杰系統(tǒng)細菌學(xué)手冊》（1984年）將腸桿菌科的細菌分為20個屬即埃希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬、

枸椽酸桿菌屬、克雷伯菌屬、腸桿菌屬、沙雷菌屬、哈夫尼亞菌屬、愛德華菌屬、普羅威登斯菌屬、變形

桿菌屬、摩根菌屬、耶爾森菌屬等。

（二）生物學(xué)特性

1.形態(tài)與染色

，桿菌,大小為（1.0~6.0）UmX（0.3~1.0）um。

多數(shù)有周鞭毛（除志賀菌屬、克雷伯菌屬、鼠疫耶爾森菌和EIEC）,無芽胞，少數(shù)菌屬細菌可形成莢

膜。

2.培養(yǎng)

需氧或兼性厭氧；營養(yǎng)要求不高；

普皿和麥康凱培養(yǎng)基：中等大小、表面光滑的菌落；

液體培養(yǎng)基：混濁生長。

3.生化反應(yīng)

發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸、或產(chǎn)酸產(chǎn)氣；

乳糖發(fā)酵試驗：非致病菌+.致病菌-（除外變形桿菌）。觸酶陽性；氧化酶陰性；硝酸鹽還原為亞

硝酸鹽。

4.抗原構(gòu)造

＞菌體（0）抗原］

＞｝腸桿菌科血清學(xué)分群和分型的依據(jù)

＞鞭毛（H）抗原J

＞表面抗原（如Vi抗原、K抗原）：包繞在?？乖獾牟荒蜔岬亩嗵强乖勺钄?抗原與相應(yīng)抗體

之間的反應(yīng)，加熱處理能破壞其阻斷作用。

5.變異

＞菌落S?R變異

＞鞭毛H?。變異

＞耐藥性變異

＞生化反應(yīng)性質(zhì)的改變

6.抵抗力

不強。加熱60℃,30分鐘即被殺死。不耐干燥，對一般化學(xué)消毒劑敏感。對低溫有耐受力，能耐膽鹽。

7.腸桿菌科的初步分類

苯丙氨酸脫氨酶

變形桿菌屬葡萄糖酸鹽試驗

普羅威登斯菌屬(+)（-）

摩根菌屬

克雷伯菌屬埃希菌屬

腸桿菌屬志賀菌屬

沙雷菌屬沙門菌屬

哈夫尼亞菌屬枸檬酸桿菌屬

愛德華菌屬

耶爾森菌屬

（三）致病性

1.致病性腸道桿菌：以腸內(nèi)感染為主，腹瀉為共顯癥狀，引起急慢性腸道感染、食物中毒、旅游者腹

瀉及腸熱癥等。

2.條件致病菌：為醫(yī)院感染主要病原菌，出現(xiàn)移位感染。大腸埃希菌、變形桿菌及克雷伯菌等條件致

病菌可引起泌尿生殖道、傷口等部位的感染。

（四）微生物檢驗

1.分離培養(yǎng)

糞便或肛拭標本一增菌一腸道曲選擇培養(yǎng)基

血,尿或膿汁等一肉湯增菌一血瓊脂培養(yǎng)基J

-----?純菌（菌落）-----?結(jié)合革蘭染色及氧化酶反應(yīng)結(jié)果作

進一步鑒定

2.鑒定

（1）初步鑒定：

①確定腸桿菌科的細菌，應(yīng)采用葡萄糖氧化-發(fā)酵試驗及氧化酶試驗與弧菌科和非發(fā)酵菌加以鑒別；

②腸桿菌科細菌的分群，多采用苯丙氨酸脫氨酶和葡萄糖酸鹽試驗，將腸桿菌科的細菌分為三個類群;

③選擇生化反應(yīng)進行屬種鑒別。KIA和MIU將細菌初步定屬。

（2）最后鑒定:

根據(jù)生化反應(yīng)的結(jié)果初步定屬、種，再用診斷血清做凝集反應(yīng)才能作出最后判斷。

二、埃希菌屬

5個種：大腸埃希菌、蟒螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫爾曼埃希菌和傷口埃希菌。

臨床最常見的是大腸埃希菌。

（-）生物學(xué)性狀

1.形態(tài)與染色

G,短桿菌，（1.0~3.0）umX（0.4-0.7）um。多數(shù)有周鞭毛，有菌毛，有莢膜或微莢膜。

2.培養(yǎng)特性

＞兼性厭氧菌；營養(yǎng)要求不高。

＞普通營養(yǎng)肉湯：渾濁生長。

＞普通營養(yǎng)瓊脂：圓形，凸起，邊緣整齊，灰白色的S型菌落,直徑2?3mm。

＞血瓊脂平板：少數(shù)菌株產(chǎn)生6-溶血環(huán)。

＞伊紅亞甲藍瓊脂：菌落呈藍紫色并有金屬光澤（發(fā)酵乳糖）。

＞麥康凱和SS瓊脂：粉紅色菌落。

3.生化反應(yīng)

＞發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖和甘露醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣，分解蔗糖因菌株而異，尿素酶試驗陰性。

＞口引噪、甲基紅、V-P、枸椽酸鹽試驗（IMViC試驗）為++-

＞克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）：斜面和底層均產(chǎn)酸產(chǎn)氣，H2S（-）o

＞動力-口引噪-尿素（MIU）培養(yǎng)基為++1

4.抗原結(jié)構(gòu)

＞菌體抗原（0）、表面抗原（K）和鞭毛抗原（H）三種構(gòu)成。

＞現(xiàn)已知有171種0抗原，100種K抗原和56種II抗原。

＞一個菌株的抗原類型由特殊的0、K和II抗原的代碼表示，其血清型別的方式是按0：K：II排列，例

如0111：K58：H2,

（二）致病性

致病物質(zhì)：主要是侵襲力、內(nèi)毒素、腸毒素等。

所致疾?。?/p>

1.腸道外感染以泌尿系統(tǒng)感染常見，還有菌血癥，膽囊炎，腹腔膿腫。

2.腸道感染（致病性大腸埃希菌）

腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌（ETEC）：引起霍亂樣腸毒素腹瀉（逅）o

腸致病型大腸埃希菌（EPEC）：主要引起嬰兒腹瀉。

腸侵襲型大腸埃希菌（EIEC）：可侵入結(jié)腸黏膜上皮，引起痢疾樣腹瀉（黏液膿血便）。

腸出血型大腸埃希菌（EHEC）：又稱產(chǎn)志賀樣毒素（生）大腸埃希菌（SLTEC或UTEC）,其中0157：

H7可引起出血性大腸炎和溶血性尿毒綜合征（業(yè)§）。

臨床特征為嚴重的腹痛、痙攣，反復(fù)出血性腹瀉，伴發(fā)熱、嘔吐等。嚴重者可發(fā)展為急性腎衰竭。

腸黏附型大腸埃希菌（EAggEC）：新近報道能引起腹瀉。

3.CDC將大腸埃希菌0157：H7列為常規(guī)檢測項目

＞在北美許多地區(qū)，0157；H7占腸道分離病原菌的第二或第三位，是從血便中分離到的最常見的病原

菌。

＞6、7、8三個月0157：H7感染的發(fā)生率最高。

＞0157是4歲以下兒童急性腎衰的主要病原菌。

（三）微生物檢驗

1.標本采集

＞腸道感染可采集糞便；

＞腸道外感染可根據(jù)臨床感染情況采集中段尿液、血液、膿汁、膽汁、腦脊液、痰、分泌液等。

2.檢驗方法及鑒定

膿液增菌培養(yǎng)物糞便

血平板弱選擇培養(yǎng)基

初報：

1~

形態(tài)、染色、性狀

純培養(yǎng)（菌落）

初步鑒定：

KIA：A/A或K/A、產(chǎn)氣或不

鑒定為大腸埃希菌＜—產(chǎn)氣、H2s一

JMIU：T-或一、+、~~,

IMViC：+、十、一、一

最后鑒定

最后鑒定：

＞補充系列生化試驗

＞致病性大腸埃希菌

□無動力的不發(fā)酵乳糖株，應(yīng)與志賀菌相鑒別

.鑒別試驗：醋酸鈉、葡萄糖鏤、粘質(zhì)酸鹽產(chǎn)酸試驗。

.大腸埃希菌均為陽性，而志賀菌均為陰性。

□血清學(xué)試驗

三、志賀菌屬

人類細菌性痢疾最常見的病原菌，通稱痢疾桿菌。

＞根據(jù)生化反應(yīng)與血清學(xué)試驗該屬細菌分為痢疾、福氏、鮑氏和宋內(nèi)志賀菌四群。

＞我國以福氏和宋內(nèi)志賀菌引起的菌痢最為常見。

（-）生物學(xué)特性

1.形態(tài)與染色

G,短小桿菌，（2?3）umX（0.5-0.7）Um,無莢膜，無芽胞，無鞭毛，有菌毛。

2.培養(yǎng)特性

需氧或兼性厭氧；

液體培養(yǎng)基：呈混濁生長；

普通瓊脂平板和SS培養(yǎng)基：中等大小、半透明的光滑型菌落（宋內(nèi)志賀菌可形成扁平、粗糙的菌落）。

3.生化反應(yīng)

氧化酶試驗陰性，動力陰性，不產(chǎn)生賴氨酸脫竣酶；

KIA：K/A,H2S（-）；

IMViC：-＞+、-、-?

志賀菌屬的細菌分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖（宋內(nèi)志賀菌可遲緩分解乳糖），叫I躲試驗陰性,

H6陰性，MR試驗陽性，VP試驗陰性，不產(chǎn)生賴就酸脫竣酶，不能利用檸檬酸鹽，氧化酶試驗陰性，動力

陰性。

4.抗原結(jié)構(gòu)

＞只有0抗原而無鞭毛抗原，個別菌型及新分離菌株有K抗原。

>0抗原分群特異性抗原和型特異性抗原兩類。

>根據(jù)抗原構(gòu)造可將志賀菌分為四個血清群，40余種血清型（包括亞型）。K抗原存在時能阻斷?？?/p>

原與相應(yīng)抗血清的凝集作用。加熱100℃、60分鐘可消除K抗原對0抗原的阻斷作用，在一定條件下可產(chǎn)

生S-R變異及耐藥性變異。

（-）臨床意義

致病物質(zhì)：

侵襲力：菌毛粘附于腸粘膜上皮細胞，誘導(dǎo)細胞內(nèi)吞。

內(nèi)毒素：破壞腸粘膜；腸壁通透性；腸壁植物神經(jīng)一一腹痛，腹瀉，里急后重，粘液膿血便。

外毒素（志賀毒素，ST）：腸毒素活性；細胞毒活性；神經(jīng)毒性。

所致疾?。杭毦粤〖?，簡稱菌痢。

1.急性菌痢。

2.中毒性菌痢。

3.慢性菌痢。

傳染源為病人和帶菌者，經(jīng)糞口傳播。

（三）微生物檢驗

1.標本米集

盡可能在發(fā)病早期及治療前采集新鮮糞便，選擇膿血便或黏液便，必要時可用肛拭子采集。

2.檢驗方法及鑒定

糞便肛拭標本

I

SS平板中國藍。r麥康凱平板

||

初步鑒定：

多價血清凝集試驗

KIA：K/A^產(chǎn)氣-/+、用S--志賀菌屬

MIU：-、+/-、-

氧化酶（一）

最后鑒定

最后鑒定:

增加生化反應(yīng)

志賀菌屬的診斷血清作群型鑒定

1

鑒別

鑒別:

動力乳糖靛基質(zhì)賴氨酸黏液酸、醋酸鹽、枸椽酸鹽

志賀菌----+

大腸埃希菌++++-

動力氧化酶試驗

志賀菌--

類志賀鄰單胞菌++

動力硫化氫A-F0診斷血清

志賀菌---

傷寒沙門菌+++

（四）防治原則

＞人工主動免疫用于預(yù)防目前尚不理想。

＞預(yù)防的主要措施是防止進食被污染的食品、飲料及水，及早發(fā)現(xiàn)及早積極治療攜帶者。

＞治療細菌性痢疾一般首選氟喳諾酮類抗生素。

（五）臨床意義

致病因素為侵襲力、內(nèi)毒素及外毒素（志賀菌A群/【型和H型產(chǎn)生志賀毒素，具有細胞毒、腸毒素、

神經(jīng)毒）?？梢鹑祟惣毦粤〖?，其中可分急性、慢性兩種，小兒易引起急性中毒性痢疾。慢性菌痢可

人-人傳播，污染水和食物可引起暴發(fā)流行。

四、沙門菌屬

（一）生物學(xué)性狀

1.形態(tài)與染色

G,直桿菌，（0.7~1.5）umX（2.0-5.0）um,無芽胞，無莢膜，周鞭毛（除雞沙門菌），多數(shù)有

菌毛。

2.培養(yǎng)特性

營養(yǎng)要求不高；

液體培養(yǎng)基：均勻混濁生長；

SS瓊脂和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基：約2?4mm的透明或半透明菌落，對膽鹽耐受。產(chǎn)H2s者在SS瓊脂上形

成黑色中心菌落。

3.生化反應(yīng)

不能發(fā)酵乳糖（除亞利桑那菌），不產(chǎn)生靛基質(zhì)，不分解尿素，甲基紅反應(yīng)陽性，V-P試驗陰性。大多

數(shù)菌株產(chǎn)生FLS,發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣（傷寒沙門菌產(chǎn)酸不產(chǎn)氣）。

4.抗原結(jié)構(gòu)

>0抗原：有58種，以阿拉伯數(shù)字依次標記。

>H抗原：H抗原是定型的依據(jù)。H抗原有兩相，第一相為特異性抗原，用a、b、c……表示；第二相

為共同抗原，用1、2、3...表示。

>表面抗原：已證實沙門菌屬有Vi、M和5抗原三種。

5.變異性

>S?R變異

>H?0變異

>相位變異：具有雙相H抗原（第I相為特異相，第n相為非特異相）的沙門菌變成只有其中某一相

H抗原的單相菌，稱相位變異。

AV?W變異：失去全部Vi抗原的變異。

（二）致病性

致病因素：侵襲力、內(nèi)毒素和腸毒素。

所致疾病：

1.腸熱癥即傷寒與副傷寒病。由傷寒與副傷寒沙門菌所引起的慢性發(fā)熱癥狀。為法定傳染病之一。

2.食物中毒

3.慢性腸炎

4.敗血癥

5.沙門菌的局部感染如頸部、腰部等。

全身疼痛、不適、

發(fā)熱澗I驅(qū)沖

胸導(dǎo)管

｛湃長期）

肝、脾、腎

及膽囊等

腸熱癥吞噬細胞吞噬

:瑟露|反腐壁淋巴組織|

羹便j膽囊

菌血衣

!（典型病例病程為3YR》搏陵高熱、肝脾腫

大、全身中毒、攻境

;并發(fā)癥：J&穿孔、血栓性靜腺炎、膽囊炎，落

（一由第】

（三）微生物檢驗

1.標本采集

根據(jù)不同