《食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)》課件-常用染色液的配制

常用染色液的配制目錄/Contents1常用染色液的配制染色液01常用染色液的配制1.呂氏堿性美藍(lán)染色液美藍(lán)0.3g95％乙醇30mL0.01％氫氧化鉀溶液100mL將美藍(lán)溶解于乙醇中，然后于氫氧化鉀溶液混合。染色時(shí)，先將涂片在火焰上固定，待冷卻后滴加染液，染1min~3min，水洗，待干，鏡檢。01常用染色液的配制2.奧爾特氏莢膜染色液（1）成分沙黃3g蒸餾水100mL用乳缽研磨溶解。01常用染色液的配制（2）染色法將涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加熱至產(chǎn)生蒸汽后，繼續(xù)染3min，水洗，待干，鏡檢。（3）結(jié)果炭疽芽孢桿菌菌體呈赤褐色，莢膜呈黃色。01常用染色液的配制3.瑞氏染色液（2015年新法）（1）成分瑞氏色素0.1g甲醇60mL用乳缽研磨溶解01常用染色液的配制3.瑞氏染色液（2015年新法）（2）染色法①待涂片自然干燥后，滴加染色液，固定1min。②加入等量磷酸鹽緩沖液，輕輕晃動(dòng)玻片或采用其他方式混合，使磷酸鹽緩沖液與瑞氏染液混勻靜置；③再用蒸餾水從一端輕輕沖洗，待干燥后，鏡檢。01常用染色液的配制4.革蘭氏染色法（1）染色液①結(jié)晶紫染色液結(jié)晶紫1g95％乙醇20mL1％草酸銨水溶液80mL將結(jié)晶紫溶解于乙醇中，然后與草酸銨溶液混合。01常用染色液的配制②革蘭氏碘液碘1g碘化鉀2g蒸餾水300mL將碘與碘化鉀先進(jìn)行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解后，在加蒸餾水至300mL。01常用染色液的配制③沙黃復(fù)染法染色液沙黃0.25g95％乙醇10mL蒸餾水90mL將沙黃溶解于乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。01常用染色液的配制（2）染色法①將涂片在火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染色液，染1min，水洗；②滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗；③滴加95％乙醇脫色，約30s；或?qū)⒁掖嫉螡M整個(gè)涂片，立即傾去，再用乙醇滴滿整個(gè)涂片，脫色10s；④水洗，滴加復(fù)染液，復(fù)染1min，水洗，待干，鏡檢。（3）結(jié)果革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。01常用染色液的配制5.耐酸性染色法（1）染色液①石炭酸品紅染色液堿性品紅0.3g95％乙醇10mL5％苯酚水溶液90mL將品紅溶解于乙醇中，然后與苯酚溶液混合。01常用染色液的配制②3％鹽酸-乙醇濃煙酸3mL95％乙醇97mL③復(fù)染液呂氏堿性美藍(lán)染色液01常用染色液的配制（2）染色法①將涂片在火焰上固定，滴加石炭酸品紅染色液，徐徐加熱至有蒸汽出現(xiàn)，但切不可使沸騰。染液因蒸發(fā)減少時(shí)，應(yīng)隨時(shí)添加。染5min，傾去染液，水洗；②滴加鹽酸-乙醇脫色，直至無紅色脫落為止，（所需時(shí)間視涂片厚薄而定，一般為1min~3min），水洗；③加呂氏堿性美藍(lán)染色液，復(fù)染30min，水洗，待干，鏡檢。（3）結(jié)果耐酸性細(xì)菌呈紅色，其他細(xì)菌、細(xì)胞等物質(zhì)呈藍(lán)色。01常用染色液的配制6.柯氏染色法（1）染色液成分0.5％沙黃液0.5％孔雀綠液（2）染色法①將涂片在火焰上固定，滴加0.5％沙黃液，并加熱至出現(xiàn)氣泡，約2min~3min，水洗；②滴加0.5％孔雀綠液，復(fù)染40s~50s，水洗，待干，鏡檢。（3）結(jié)果布氏桿菌呈紅色，其他細(xì)菌及細(xì)胞呈綠色。01常用染色液的配制7.鞭毛染色法（1）染色液的配制①甲液稱丹寧酸5g、氯化高鐵（FeCl3）1.5g，溶于100mL蒸餾水中，待溶解后加入1％的氫氧化納溶液1mL和15％的甲醛溶液2mL。01常用染色液的配制7.鞭毛染色法②乙液稱2g硝酸銀溶于100mL蒸餾水中。在90mL乙液中滴加濃氫氧化銨溶液，到出現(xiàn)沉淀后，繼續(xù)滴加使其變?yōu)槌吻?，然后用其?0mL乙液小心滴加至澄清液中，至出現(xiàn)輕微霧狀為止（此為關(guān)鍵性操作，應(yīng)特別小心）。滴加氫氧化銨和用剩余乙液回滴時(shí)，要邊滴邊充分搖蕩，染液當(dāng)天配，當(dāng)天使用，2d~3d后基本無效。01常用染色液的配制（2）染色法在風(fēng)干的載玻片上滴加甲液，4min~6min后，用蒸餾水輕輕沖凈，再加乙液，緩緩加熱至冒汽，維持約半分鐘（加熱時(shí)注意勿出現(xiàn)干燥面），在菌體多的部位可呈深褐色到黑色，停止加熱，用水沖凈，干后鏡檢。菌體及鞭毛為深褐色到黑色。01常用染色液的配制8．考馬斯亮藍(lán)R-250染色液考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)濃度,是利用蛋白質(zhì)―染料結(jié)合的原理,定量的測定微量蛋白濃度的快速、靈敏的方法。01常用染色液的配制8．考馬斯亮藍(lán)R-250染色液考馬斯亮藍(lán)R-250染色液的配置方法（1L的量）：（1）稱取1g考馬斯亮藍(lán)R-250，置于1L燒杯中。（2