獸醫(yī)化驗室檢驗分析技術(shù)

血液生化檢驗一、血糖的測定

血糖的測定采用光電比色法（福林-吳法）。原理無蛋白血濾液與堿性硫酸銅試劑混合加熱后，濾液內(nèi)的葡萄糖將二價的高銅[Cu(OH)2]還原為一價的低銅[Cu2O]，再加磷鉬酸試劑后，生成藍色的化合物鉬藍[Mo2O8]，藍色的深淺與葡萄糖濃度成正比。與同樣處理的標準管比色，即可求得血液中葡萄糖的濃度1．特制的血糖測定管2．堿性硫酸銅溶液3．磷鉬酸試劑4．0.25%安息香酸和10%鎢酸鈉5．1/3mol/L硫酸6．葡萄糖標準貯備液7．葡萄糖標準使用液材料與設(shè)備一、血糖的測定1.制備無蛋白血濾液2.測血糖

取血糖測定管3支，標明標準、測定和空白操作方法一、血糖的測定葡萄糖（mg/dl）＝單位轉(zhuǎn)換：（葡萄糖）mmol/L＝mg/dl×0.05551

正常值（mmol/L）：犬3.89～5.55計算判定標準一、血糖的測定二、血清總蛋白、白蛋白及球蛋白的測定原理與方法：

蛋白質(zhì)中的肽鍵，與堿性酒石酸鉀、堿性酒石酸鈉、堿性酒石酸銅作用，產(chǎn)生紫色反應，稱為雙縮脲反應。根據(jù)顏色深淺，與經(jīng)同樣處理的蛋白標準溶液比色，即可求得血蛋白質(zhì)含量參考值：犬總蛋白為54～78g/L，白蛋白為24～38g/L；貓的總蛋白為58～78g/L，白蛋白為26～41g/L臨床意義總蛋白增高

見于重癥脫水、水分攝入障礙的失水、糖尿病、酸中毒和休克總蛋白減少

見于長時間重度蛋白尿的各種腎病、肝硬化、營養(yǎng)不良、重度甲狀腺亢進、中毒、大量出血及貧血分光光度法原理

分光光度法，常被用來測定溶液中存在的光吸收物質(zhì)的濃度，其基本原理是根據(jù)Lambert和Beer定律。

Lambert定律

一束平行單色光垂直照射于一均勻物質(zhì)（溶液）時，由于溶液吸收一部分光能，使光的強度減弱，若溶液的濃度不變，則溶液的厚度愈大，光線強度的減弱也愈顯著。設(shè)：入射光強度為I0L表示溶液的厚度（即光程）出射光（透過光）強度為I根據(jù)輻射能理論推導，I0與I之間關(guān)系為lg（I0/I）=K1L（1）K1是常數(shù)，受光線波長、溶液性質(zhì)、溶液濃度的影響。

Beer定律

當一束單色光通過一溶液時，光能被溶液介質(zhì)吸收一部分，若溶液的厚度不變，則溶液濃度C愈大，光吸收愈大，透射光線強度的減弱也愈顯著，光強度減弱的量與溶液濃度增加量成正比

lg（I0/I）=K2C（2）K2為吸收系數(shù)，是常數(shù)，溶液對光吸收的大小與溶液濃度C成正比。Lambert-Beer定律（又稱吸收定律）

上二式合并（即（l）與（2）合并）

lg（I0/I）=

CL令A=lg（I0/I），T=I/I0

；則A=

CL，A=-lgT。T為透光率，A為吸光度（光密度、消光度）。其中

為常數(shù)，又稱消光系數(shù)（extinctioncoefficient），表示物質(zhì)對光線吸收的能力，其值因物質(zhì)種類和光線波長而異。對于相同物質(zhì)和相同波長的單色光則消光系數(shù)不變。分光光度計的結(jié)構(gòu)

光源：鎢燈和氫燈（或氘燈）單色器：分解為單一波長光的裝置狹縫：調(diào)節(jié)入射單色光的強度，形成平行光線吸收池：又稱比色杯、比色皿、比色池，裝待測溶液用檢測系統(tǒng)：感受光能，轉(zhuǎn)化為電能，輸出A值、T值。幾類分光光度計S54型紫外分光光度計UV8500型紫外分光光度計比色杯（比色皿）玻璃比色杯石英比色杯熒光比色杯比色杯使用注意事項

1、拿取比色皿時，只能用手指接觸兩側(cè)的毛玻璃，避免接觸光學面,光玻璃面對著光路。

2、不得將光學面與硬物或臟物接觸。盛裝溶液時，液面高于光路,高度為比色皿的2/3處即可，光學面如有殘液可先用濾紙輕輕吸附，然后再用檫鏡紙擦拭。

3、測定時濃度由低到高，進行潤洗。比色皿在使用后，應立即用水沖洗干凈。必要時可用1：1的鹽酸浸泡，然后用水沖洗干凈。

4、不能將比色皿放在火焰或電爐上進行加熱或干燥箱內(nèi)烘烤；

5、在測量時如對比色皿有懷疑，可自行檢測。微量移液器吸嘴裝在吸液桿上，應套牢避免間隙。依據(jù)所需容量旋轉(zhuǎn)手輪，使數(shù)輪顯示所需值。輕輕地將推動按鈕下壓，使推動按鈕推移至第一停點位置。手持取液器垂直浸入溶液中，吸嘴浸入深度為2-4mm，停留2-3秒后緩慢放松按鈕，即回到原來位置，溶液吸入后稍停即可將吸嘴移出液面。將取液器吸嘴置于排液容器內(nèi)。使吸嘴尖緊貼容器內(nèi)壁，按壓推動按鈕至第二停點位置，使溶液排盡，松開按鈕。移液完畢，按壓卸嘴按鈕，將吸嘴脫卸。分光光度計的使用樣品測試操作①打開電源開關(guān)，使儀器預熱20分鐘②用“波長設(shè)置”按鈕將波長設(shè)置在您將要使用的分析波長位置上③

打開樣品室蓋，將參比溶液倒入比色皿中放入比色皿架靠近測定者一端位置，并將樣品溶液倒入比色皿中放入比色皿架的其它位置，蓋好樣品室蓋。④拉動比色皿架拉桿一小格使比色皿架擋住光路，按“0%T”鍵調(diào)透射比零⑤

推入比色皿架使參比溶液位于光路中，蓋好樣品室蓋，按“100%T”調(diào)100%透射比⑥按“方式鍵”（MODE）將測試方式設(shè)置為吸光度方式(A)⑦打開樣品室蓋，將盛有溶液的比色皿分別插入比色皿槽中，蓋上樣品室蓋⑧將參比溶液推入或拉入光路中，按“100%T”調(diào)A零⑨

將被測溶液拉入光路中，此時，顯示器上所顯示是被測樣品的吸光度參數(shù)⑩實驗完成后，關(guān)閉電源，洗凈比色皿，并蓋好蓋布。光路光路血液葡萄糖測定(費吳氏法)血液非蛋白氮測定血清總蛋白、白蛋白及球蛋白測定（雙縮脲法）血清尿素測定（二乙酰-肟法）(一)血液葡萄糖測定(費吳氏法)原理無蛋白血濾液中的葡萄糖，具有還原性，與堿性高銅混合加熱后，將高銅還原成氧化低銅而呈紅色沉淀，此沉淀物再被磷鉬酸氧化成藍色物質(zhì)。與同樣處理的標準葡萄糖管比色，而求得血糖含量。試劑0.25％苯甲酸溶液葡萄糖貯存標準液(1ml含10mg葡萄糖)

葡萄糖應用標準液(1ml≌0.1毫克葡萄糖)

堿性銅溶液磷鉬酸試劑

10％鎢酸鈉溶液

1/3mol／L硫酸溶液操作方法

鎢酸鈉法制備無蛋白血濾液50ml：取小燒杯或大試管一支，先加入蒸餾水7ml，再加入新鮮抗凝血1ml，充分混勻，使之溶血。然后，加入10％鎢酸鈉溶液1.0ml，混勻。最后，徐徐加入2／3N硫酸溶液1ml，隨加隨搖，充分混勻。放置5～10min后，用優(yōu)質(zhì)濾紙過濾或離心沉淀，即可獲得無色清亮無蛋白血濾液以供備用。

此法所得無蛋白血濾液近中性，不僅適用于葡萄糖的測定，還可用于非蛋白氮、尿素氮，肌酐等的測定。

步驟測定管標準管空白管1無蛋白血濾液（ml）葡萄糖標準應用液（ml）蒸餾水（ml）堿性銅溶液（ml）2002020200222混合后，在沸水中煮沸8min，取出后浸于冷水中2-3min（不可搖動）3磷鉬酸試劑2ml2ml2ml4混合后，于室溫下靜置2min5蒸餾水加至25ml25ml25ml6混勻，待管內(nèi)二氧化碳逸出后比色，選用620nm濾光板比色，讀取各管密度值取血糖測定管3支，分別標明測定管、標準管及空白管，按表操作。全血血糖含量（mg/100ml）＝測定管光密度/標準管光密度×0.2×100/0.2臨床意義增高病理性增高糖尿病、甲狀腺機能亢進腎上腺皮質(zhì)機能亢進暫時性增高全麻后、肺炎、腎炎、顱內(nèi)壓增高、中樞神經(jīng)感染缺氧窒息減低生理性減低病理性減低胰島素分泌過多、嚴重貧血腎功能衰竭的慢性腎炎及功能減弱、甲狀腺功能減弱、腦垂休功能減退。多見長時間的劇烈運動過后、過分饑餓及哺乳期竺(二)血液非蛋白氮測定原理血中的非蛋白氮物質(zhì)主要有尿素、尿酸、肌酸和肌醇等，均為蛋白質(zhì)代謝中間產(chǎn)物或最終產(chǎn)物。由于這些化合物不被蛋白沉淀，故測定無蛋白血濾液的含氮量即為非蛋白氮含量。試劑硫酸銨貯存標準液(1ml≌1mg氮)

硫酸銨應用標準液(1ml≌0.03mg氮)50%硫酸溶液碘化汞鉀試劑貯存液碘化汞鉀試劑應用液步驟測定管標準管空白管1無蛋白血濾液（ml）硫酸銨標準應用液（ml）50%硫酸溶液（ml）玻璃珠（粒）100.21010.21000.202

將測定管置酒精燈上以小火加熱消化，至管內(nèi)充滿白煙，管底液體有黑色轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色透明時為止，冷卻30min。3蒸餾水加至（ml）7774碘化汞鉀試劑應用液（ml）3335

混合后，待10min，用480nm波長或藍色濾光板光電比色，以空白管校正光密度至0點，分別讀取各管讀數(shù)。此項操作應在20min內(nèi)完成。

操作方法取草酸鉀抗凝全血（不能用雙草酸鹽抗凝血），以鎢酸鈉法制備無蛋白血濾液后，按表操作。全血非蛋白氮含量（mg/100ml）＝測定管光密度/標準管光密度×0.03×100/0.1降低增高急、慢性腎炎尿毒癥腎盂積水泌尿系結(jié)核、結(jié)石阻塞嚴重燒傷大量嘔吐腹瀉腸梗阻血紅蛋白尿甲狀腺機能亢進末期腎上腺機能不全重金屬中毒等中毒性肝炎膽道術(shù)后妊娠晚期臨床意義(三)血清總蛋白、白蛋白及球蛋白測定原理蛋白質(zhì)中的肽鍵，與堿性酒石酸鉀/納/銅作用，產(chǎn)生紫色反應，成為雙縮脲反應。根據(jù)顏色的深淺，與經(jīng)同樣處理的蛋白標準溶液比色，即可求得血液蛋白質(zhì)含量。試劑27.8%硫酸鈉-亞硫酸鈉混合液雙縮脲試劑原理：當脲加熱至180℃時，兩分子脲縮合，放出一分子氨而形成雙縮脲。雙縮脲在堿性條件下能與硫酸銅生成紫紅色絡(luò)合物，即發(fā)生雙縮脲反應。蛋白質(zhì)分子中含有肽鍵，與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似，故蛋白質(zhì)與堿性硫酸銅也能形成紫紅色絡(luò)合物,在一定條件下其顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，可用來進行蛋白質(zhì)定量。最大波長位于540nm處。本法測定蛋白質(zhì)范圍1-10mg。雙縮脲法測定蛋白質(zhì)濃度操作方法1、制備標準血清及測定其總蛋白量若無已備標準血清時，可收集多份健畜血清混合而成標準血清，并用微量定氮法測其總蛋白量。微量定氮法取血清1ml置于50ml量瓶中，用生理鹽水做50倍稀釋，混勻，供測總蛋白。另用血清制備無蛋白血濾液（同全血制備無蛋白血濾液法），供測非蛋白氮。然后按后表操作：步驟總蛋白測定管非蛋白氮測定管標準管空白管1硫酸銨標準應用液（ml）0.9%氯化鈉稀釋血清（ml）無蛋白血濾液（ml）50%硫酸溶液（ml）玻璃珠（粒）00.200.21001.00.211.0000.210000.202除空白管外，均需加熱消化，至管內(nèi)充滿白煙，管底液體有黑色轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色透明為止，冷卻3蒸餾水加至（ml）77774碘化汞鉀試劑應用液（ml）33335

混勻后，用440nm波長或藍色濾光板光電比色，以空白管校正光密度至0點，分別讀取各管讀數(shù)。記錄。血清氮含量（mg/100ml）＝總蛋白測定管光密度/標準管光密度×0.03×1000/0.004血清非蛋白氮含量（mg/100ml）＝非蛋白測定管光密度/標準管光密度×0.03×1000/0.1血清總蛋白質(zhì)含量（g/100ml）＝（含氮量－非蛋白氮）×6.25/10002、制備標準血清應用液未經(jīng)稀釋標準血清0.2ml，加27.8%硫酸鈉-亞硫酸鈉混合液3.8ml，混勻，備用。3、制備被檢血清總蛋白混懸液和白蛋白澄清液被檢血清0.2ml置試管中加入27.8%硫酸鈉-亞硫酸鈉混合液3.8ml，混勻即得總蛋白混懸液。放置片刻，待氣泡上升后，取此混懸液1ml，做總蛋白測定。想剩余部分內(nèi)加入乙醚2.5ml，振搖混勻，2500rpm離心5min。后斜執(zhí)試管，用1ml吸管小心吸取下層澄清的白蛋白液1ml，供測白蛋白用。步驟總蛋白測定管非蛋白氮測定管標準管空白管1被檢血清總蛋白混懸液液（ml）被檢血清白蛋白澄清液（ml）標準血清應用液（ml）27.8%硫酸鈉-亞硫酸鈉混合液（ml）雙縮脲試劑（ml）00.200.21001.00.211.0000.210000.202充分混合均勻，置37℃恒溫箱或室溫暗處30min后，以540nm或綠色濾光板光電比色，以空白管校正光密度到0點，讀取各管讀數(shù)，記錄被檢血清總蛋白含量（g/100ml）＝總蛋白測定管光密度/標準管光密度×標準血清總蛋白被檢血清白蛋白含量（g/100ml）＝白蛋白測定管光密度/標準管光密度×標準血清總蛋白被檢血清球蛋白含量（g/100ml）＝被檢血清總蛋白量－被檢血清白蛋白量總蛋白升高重癥脫水、水分攝入障礙的失水、糖尿病、酸中毒、休克總蛋白減低長時間中毒蛋白尿的各種腎病、肝硬化腹水、營養(yǎng)不良、重度甲狀腺功能亢進、中毒、大量出血、貧血白蛋白增高嚴重腹瀉、嘔吐、飲水不足、燒傷造成脫水及大出血，致使血漿濃縮而白蛋白相對增高白蛋白減少

白蛋白丟失過多腎病綜合征、嚴重出血、大面積燒傷、胸腹腔積水

白蛋白合成功能不全慢性肝臟疾病、惡性貧血和感染

蛋白質(zhì)攝入量不足營養(yǎng)不良、消化吸收功能不良、蛋白攝入不足

蛋白質(zhì)消耗過大甲狀腺功能亢進、各種慢性消耗性疾病、感染、外傷球蛋白增高肝硬化、絲蟲病、肺炎、細菌性心內(nèi)膜炎、結(jié)合活動期臨床意義(四)血清尿素測定（二乙酰-肟法）原理在酸性反應環(huán)境中加熱，二乙酰-肟分解二乙酰和羥胺，二乙酰與樣品中的尿素反應，縮合成紅色的二嗪衍生物，成為Fearon反應。反應中加入硫胺脲和硫酸鎘，可提高反應的靈敏度和顯色的穩(wěn)定性試劑酸性試劑

二乙酰-肟溶液

50%硫酸溶液尿素標準貯存液尿素標準應用液操作方法步驟測定管標準管空白管1二乙酰-肟溶液（ml）血清（ml）尿素標準應用液（ml）蒸餾水（ml）酸性試劑（ml）100.21010.21000.202

混勻，置沸水浴中加熱12min，置冷水中冷卻5min，以空白管校正光密度至0點，540nm波長比色血清尿素含量（mmol/L）＝測定管光密度/標準管光密度×5尿素含量增高腎前性

失水，引起血液濃縮，腎血流量減少，腎小球濾過率降低，使血中尿素潴留。腎性

急性腎衰竭時腎功能輕度受損腎后性

因尿道狹窄、尿路結(jié)石、膀胱腫瘤等致使尿道受壓臨床意義五、自動生化分析儀及其在獸醫(yī)臨床上的應用檢測系統(tǒng)樣品、試劑處理系統(tǒng)反應系統(tǒng)清洗系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)

三、血清各類離子的測定

血清鈉測定

常用的測定方法有醋酸鈾鎂比色法、火焰光度計法、原子吸收分光光度計法和離子選擇電極法等參考值：犬

138～156mmol/L

貓

147～

156mmol/L臨床意義：1.血清鈉含量升高

臨床上少見，但也可見腎上腺皮質(zhì)機能亢進或原發(fā)性醛固酮增多癥、失水性脫水和過多輸入高滲鹽水及食鹽中毒

2.血清鈉含量降低

（1）胃腸道失鈉

可見幽門梗阻、嘔吐、腹瀉、引流等都可丟失大量消化液而發(fā)生缺鈣

（2）鈉排出增多

可見嚴重腎盂腎炎、腎小管嚴重損害、腎上腺皮質(zhì)機能不全、糖尿病、應用利尿劑治療、皮膚失鈉等（3）抗利尿激素過多

腎病綜合征的低蛋白血癥、肝硬化腹水等

常用的測定方法有四苯硼鈉比濁法、亞硝酸鈷鈾法、火焰光度計法、原子吸收分光光度計法和離子選擇電極法等

血清鉀測定正常值：犬

3.80～5.80mmol/L，貓

3.80～4.60mmol/L臨床意義：

血清鉀含量增高

見于腎上腺皮質(zhì)功能減退癥、急性或慢性腎功能衰竭、休克、組織擠壓傷、嚴重溶血、口服或注射含鉀液過多等

血清鉀含量低

常見于鉀鹽攝入不足，嚴重腹瀉、嘔吐、腎上腺皮質(zhì)機能亢進，服用利尿劑，胰島素作用等

常見的測定方法有鈦黃比色法和原子吸收分光光度計法等參考值：犬

0.79～1.06mmol/L，貓

0.62～1.03mmol/L

血清鎂測定臨床意義1.血清鎂含量升高

見于腎衰竭、甲狀腺、甲狀旁腺機能減退及多發(fā)性骨髓瘤2.血清鎂含量降低

消化道丟失、消化吸收不良、尿路丟失、甲狀腺、甲狀旁腺機能亢進等

常用的測定方法有乙二胺四乙酸二鈉滴定法、火焰分光光度計法、高錳酸鉀滴定法和離子選擇電極法等參考值：犬

2.57～2.97mmol/L貓

2.09～2.74mmol/L

血清鈣測定臨床意義1.血清鈣含量升高

見于甲狀旁腺機能亢進、內(nèi)服和注射維生素D過量、多發(fā)性骨髓瘤、胃腸炎和由于脫水而發(fā)生酸中毒時2.血清鈣含量降低

見于甲狀旁腺機能減退、維生素D缺乏、骨軟病、產(chǎn)后低鈣血癥及慢性腎炎和尿毒癥等

四、血漿二氧化碳結(jié)合力的測定原理臨床意義1．二氧化碳結(jié)合力增加（1）代謝性堿中毒：由于碳酸氫鈉過多所致，如胃酸分泌過多、小腸阻塞、嘔吐、攝入堿過多等（2）呼吸性酸中毒：由于二氧化碳過多所致。當呼吸發(fā)生障礙時，二氧化碳不能自由呼出，血液中碳酸濃度增加，見于肺氣腫、肺炎、心力衰竭等

2.二氧化碳結(jié)合力降低（1）代謝性酸中毒由于碳酸氫鈉不足所致，見于長期饑餓、腎炎后期、嚴重腹瀉、服用氯化銨過多等（2）呼吸性堿中毒由于二氧化碳不足所致，如換氣過度呼出二氧化碳過多，見于發(fā)熱性疾病、腦炎等

五、血清酶學檢驗

小動物臨床檢驗常測定的血清酶有轉(zhuǎn)氨酶、肌酸磷酸激酶、乳酸脫氫酶同工酶等。主要了解以上酶簡單的測定方法和理解其臨床意義。常用的測定方法為肌酸顯色法犬正常值為60～359IU/L，貓正常值為95～1294IU/L

對心肌、骨骼肌損失及肌營養(yǎng)不良的診斷有特異性。當各種類型進行性肌萎縮、腦損傷時，CPK增高；不適當?shù)刈⑸淇股乜梢餋PK增高。CPK數(shù)值降低時，無臨床意義肌酸磷酸激酶（CPK）測定常用的測定方法有金氏比色法和賴氏比色法正常參考值：犬

23～56IU/L；貓

26～43IU/L谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST/GOT）測定臨床意義

血清谷草轉(zhuǎn)氨酶活性升高，見于急性肝炎、肝硬變、心肌炎及骨骼肌損傷

血清谷草轉(zhuǎn)氨酶活性降低，見于維生素吡哆醇缺乏和大面積肝壞死降低

GPT又稱丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT），測定方法常用金氏比色法和賴氏比色法正常參考值:犬

21～66IU/L；貓

6～64IU/L谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT/ALT）測定臨床意義

犬許多組織、器官中含有谷丙轉(zhuǎn)氨酶，其中以肝臟中含量最高

血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性升高，見于犬傳染性肝炎、貓傳染性腹膜炎、馬傳染性貧血、肝膿腫和膽管組塞、甲狀腺機能降低、心臟功能不足、嚴重貧血和休克等

常用的測定方法為醋酸纖維薄膜電泳法正常參考值:犬

45～233IU/L；貓

63～273IU/L乳酸脫氫酶（LDH）測定臨床意義：

LDH存在于肝臟、心肌、骨骼肌、腎臟等組織、器官。肌肉損傷、肝臟疾病、貧血或急性白血病時，血液中LDH會升高血液學檢查紅細胞沉降率的測定紅細胞壓積容量測定紅細胞滲透脆性的測定血液凝固時間測定血紅蛋白(Hb)含量測定血細胞檢驗血小板計數(shù)紅細胞計數(shù)白細胞計數(shù)白細胞分類計數(shù)內(nèi)容任務(wù)2血細胞相關(guān)性檢查定義:血液加入抗凝劑后，一定時間內(nèi)紅細胞向下沉降的毫米數(shù)，叫做紅細胞沉降速度，簡稱血沉（ESP）。紅細胞沉降率測定魏氏法先向10ml刻度試管中加入3.8%枸櫞酸1ml，再自靜脈采血4ml，顛倒混合數(shù)次，然后用魏氏血沉管吸取抗凝劑至刻度0處，擦去管外血液，在室溫條件下，垂直放于血沉管架上，經(jīng)15、30、45、60min，分別觀察并記錄細胞沉降數(shù)值?！椒?/p>

1魏氏血沉管長30cm，內(nèi)徑2.5mm管上有0~200的刻度，每一刻度的距離為1mm，其溶積為1ml?！傲濉毙脱凉芊ㄓ谘凉苤屑尤肟鼓齽ú菟徕c0.015~0.02g，枸櫞酸鈉粉末0.04~0.05g）,自頸靜脈直接采血至刻度“0”處，立即充分混合，于室溫垂直立于試管架上，鏡15、30、45、60min各觀察一次，并記錄紅細胞沉降的數(shù)值?！椒?/p>

2“六五”型血沉管法內(nèi)徑0.9cm，全長17~20cm，管上有100個刻度容積為10ml。各種動物的正常血沉值動物種類15min30min45min60min測定方法馬驢黃牛水牛奶牛山羊豬31329.80.33497530.80.785396.7650.752055110.70.891.61.20.630六五型法魏氏法魏氏法魏氏法魏氏法魏氏法六五型法①測定血沉時必須用新配制的抗凝血；②血液與抗凝劑混合要充分，柱面上不應有氣泡，它可使血沉變慢；③用魏氏法測定時，事先應檢查血沉架是否好用，以防漏液；④測定時室溫以20℃左右為宜，溫度過低可以減慢血沉。血沉值沒有獨立的診斷意義。血沉加快，見于馬傳染性貧血、梨形蟲病、結(jié)核、鼻疽、豬瘟、化膿性炎癥、風濕癥等。血沉減慢，見于大出汗、多尿、劇烈腹瀉、馬流行性腦脊髓炎、破傷風、牛瓣胃阻塞、腹痛癥等。臨床意義定義:是指壓緊的紅細胞在全血中所占的百分率,是鑒別貧血的一項不可缺少的指標,簡稱比容。紅細胞壓積容量測定紅細胞壓積容量測定管（溫氏測定管）長約11cm,內(nèi)徑約2.5mm，管壁刻有0-10cm刻度，分度刻度1mm。用毛細玻璃吸管或長針頭吸滿抗凝全血，將血液自上而下擠入溫氏測定管內(nèi)，至刻度10處；3000rpm離心30-40min。讀取紅細胞柱層的刻度數(shù)，即為紅細胞壓積容量數(shù)值，數(shù)值用百分率表示。▲方法1、壓積升高2、壓積降低各種貧血生理性升高病理性升高各種脫水每超出高限一個小格（１mm)一天的補液量＝８００－１０００毫升臨床意義定義:是指紅細胞在低滲氯化鈉溶液中的抵抗力，故又稱為紅細胞抵抗。紅細胞滲透脆性的測定取10ml刻度試管22支，分別標明管號，每管分別加入個濃度低滲氯化鈉溶液5ml，再加入10%紅細胞生理鹽水懸浮液2滴，混勻。室溫下放置10-15min，離心5min并觀察結(jié)果。抗凝血1份，先用生理鹽水將紅細胞洗滌1次，然后做成10%紅細胞生理鹽水懸浮液備用。配制1%NaCl溶液，以0.02%為濃度梯度配制從0.76%-0.34%共22份濃度的低滲溶液。分別裝入100ml細口瓶中備用，每6-8周更換一次。溶液變?yōu)闇\桃紅色，管底有大量紅細胞沉淀，即開始溶血，此管的鹽水濃度代表紅細胞的最小抵抗；溶液呈深紅色，管底無紅細胞沉淀，即完全溶血，此管的鹽水濃度代表紅細胞最大抵抗?！椒ㄔ龈呓档腿辫F性貧血免疫性溶血性貧血臨床意義定義:是指血液自血管流出直到完全凝固所需的時間，用以測定血液的凝固能力。血液凝固時間測定頸靜脈采血，見到出血后立即用秒表記錄時間。取血一滴，滴在玻片一端，隨即玻片稍稍傾斜，滴血一端向上。此時未凝固血液自上而下流動，形成一條血線，放在室溫下的平皿內(nèi)，防止血液中水分蒸發(fā)，靜置2min，之后每隔30s用針尖跳動血線一次，待針頭挑起纖維絲時，即停止秒表，記錄時間，即為血凝時間。▲方法玻片法簡單易行，但不及試管法準確試管法采血前準備刻度小試管3支，并預先放在25-37℃恒溫水浴箱內(nèi)。頸靜脈采血，剪刀出血立即開始計時。隨之將血液分別加入3支試管內(nèi)，每支試管各加1ml，再將試管放回水浴箱。放置3min后，先從第一管做起，每隔30s逐次傾斜試管一次，直到翻轉(zhuǎn)試管血液不能流出為止，并記錄時間。3支小試管的平均時間即為血凝時間。適用于出血性疾病的研究與診斷延長縮短重度貧血血斑病肝臟病炭疽病偶見于纖維素性肺炎臨床意義紅細胞遇酸溶解，游離出血紅蛋白，并被酸化為褐色的酸性血紅素，稀釋后與標準色柱比色，即可求得血紅蛋白的含量。血紅蛋白試紙測定法器材應備有測定血紅蛋白試紙和4g%~15g%血紅蛋白標準比色板。測定時，取試紙一條，吸附被檢血液一小滴，待血完全浸透后，立即置于所附標準色板的小孔下，肉眼與色板色澤進行比較，選擇顏色相同或近似者，即得100ml血液所含血紅蛋白的克數(shù)。血紅蛋白測定沙利氏血紅蛋白測定法沙利氏血紅蛋白計由比色架、標準比色柱、血紅蛋白測定管及血紅蛋白吸管組成。測定管有兩個刻度標志，一側(cè)的2~24刻度表示100ml血液中含有的血紅蛋白克數(shù)；另一側(cè)有20~160刻度，表示100ml血液中所含血紅蛋白的百分數(shù)。在血紅蛋白稀釋管內(nèi)加入0.1mol/L鹽酸溶液至刻度10%處。用血紅蛋白吸管吸取血液至20mm3刻度處，，拭凈管外附著血液，迅速將試管內(nèi)血液緩緩吹入血紅蛋白洗試管內(nèi)的鹽酸溶液中，再吸取上層鹽酸溶液反復吹洗數(shù)次，勿使產(chǎn)生氣泡。移去血紅蛋白吸管，用小玻璃棒攪拌或輕輕搖振，使血液與鹽酸溶液混合而呈褐色。將測定管插入比色架內(nèi)，靜置10min。慢慢分次沿測定管壁滴加蒸餾水，邊加邊混勻，邊比色，直至血紅蛋白測定管液體的顏色與標準比色柱一致為止，讀取測定管液體凹面最低處的刻度數(shù)，即為100ml血液內(nèi)所含血紅蛋白的克數(shù)或百分數(shù)。▲方法動物種類血紅蛋白值（克/100毫升）馬、騾11.0（9.0~13.0）牛10.0（9.0~11.0）水牛8.3（8.0~9.0）羊9.8（7.8~11.6）豬10.5（9.5~12.0）雞12.5（10.0~14.5）血紅蛋白增高見于各種原因引起的血液濃縮，如腹瀉、嘔吐、大汗、多尿及腸梗阻等。血紅蛋白減少見于各種貧血，如馬鼻疽、牛結(jié)核、牛羊肝片吸蟲病、仔豬蛔蟲等。臨床意義紅細胞計數(shù)白細胞計數(shù)白細胞分類計數(shù)血細胞檢驗紅細胞計數(shù)是將一定量的供檢全血經(jīng)一定倍數(shù)（200倍）稀釋后，在血細胞計數(shù)板的計數(shù)室內(nèi)，數(shù)一定體積的紅細胞數(shù)，然后再推算出1mm3血液內(nèi)的紅細胞數(shù)。紅細胞計數(shù)

（redbloodcellcount，RBC）沖液

計數(shù)方法

臨床上最常用的是改良紐巴（Neubauer）氏計數(shù)板，它是由一塊特制的玻璃板構(gòu)成，玻璃板中間有橫溝將其分為三個狹窄的平臺，兩邊的平臺較中間的平臺高0.1mm。中央平臺又有一縱溝相隔，其上各刻有一個計數(shù)室。每個計數(shù)室劃分為9個大方格，每一大方格面積為1.0mm2，深度為0.1mm；四角每一大方格劃分為16個中方格，為計數(shù)白細胞用。中央一大方格用雙線劃分為25個中方格，每個中方格又劃分為16個小方格，共計400個小方格，此為紅細胞計數(shù)之用。血細胞計數(shù)板

用5ml吸管吸取紅細胞稀釋液3.98ml（或4ml亦可）置于試管中。用沙利氏吸血管吸取全血樣品至2020mm3刻度處（或吸血至刻度10處，紅細胞稀釋液用2ml）。擦去吸管外壁多余的血液，將此血液吹入試管底部，再吸、吹數(shù)次，以洗出沙利氏管內(nèi)粘附的血細胞，然后試管口加塞，顛倒混合數(shù)次，再用毛細吸管（或玻棒）吸取已稀釋好的血液，放于計數(shù)室與蓋玻片接觸處，即可自然流入計數(shù)室中。注意充液不可過多或過少，過多則溢出而流入兩側(cè)槽內(nèi)，過少則計數(shù)池中形成氣泡，致使無法計數(shù)。

計數(shù)時，先用低倍鏡，光線要稍暗些，找到計數(shù)室的格后，把中央的大方格置于視野之中，然后轉(zhuǎn)用高倍鏡。在此中央大方格內(nèi)選擇四角與最中的五個中方格（或用對角線的方法數(shù)五個中方格），每個中方格有16個小方格，所以共計數(shù)80個小方格。計數(shù)時注意壓在左邊雙線上的紅細胞計在內(nèi)，壓在右邊雙線上的紅細胞則不計數(shù)在內(nèi)；同樣，壓在上線的計入，壓在下線的不計入，此所謂“數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下”的計數(shù)法則。計算1mm3血液中紅細胞個數(shù)=X/80×400×200×10。X:5個中方格(即80個小方格)內(nèi)的紅細胞總數(shù)。400:一個大方格，即1mm2面積內(nèi)共有400個小方格。200:稀釋倍數(shù)。10:血蓋片與計數(shù)板的實際高度是1/10mm，乘10后則為1.0mm。上式簡化后為:1mm3紅細胞數(shù)=X×10,000充液量不可過多或過少，過多可使血蓋片浮起，過少則計數(shù)室中形成小的空氣泡，使計數(shù)結(jié)果偏低甚至無法計數(shù)。顯微鏡臺應保持水平，否則計數(shù)室內(nèi)的液體流向一側(cè)而計數(shù)不準。沙利氏吸血管或試管，每次用完后，先用清水吸吹數(shù)次，然后用蒸餾水、酒精、乙醚，按次序分別吸吹數(shù)次，干后備下次使用。血細胞計數(shù)板用蒸餾水沖洗后，用絨布輕輕擦干即可，切不可用粗布擦試，也不可用酒精、乙醚等溶液沖洗。注意事項健康豬紅細胞數(shù)為5.5×1012/L；奶牛5.98×1012/L；奶山羊17.2×1012/L；健康犬紅細胞數(shù)為6.8×1012/L，變動范圍為5.5-8.5×1012/L；健康貓紅細胞數(shù)為6.5-9.5×1012/L。紅細胞增多

可見于因各種原因引起的脫水，進而使血液濃縮，表現(xiàn)為紅細胞相對增多，如大出汗、胸膜炎和腹膜炎的滲出期等。紅細胞減少

多見于各種類型貧血，如失血性貧血、營養(yǎng)性貧血、溶血病等。此外，紅細胞生成不足或破壞增多，亦可導致紅細胞數(shù)減少。臨床意義白細胞計數(shù)

whitebloodcellcount，WBC

一定量的血液用冰醋酸溶液稀釋后，可將紅細胞破壞，然后在細胞計數(shù)板的計數(shù)室內(nèi)計數(shù)一定容積的白細胞數(shù)，一次推算出每立方毫米內(nèi)白細胞總數(shù)。用1ml吸管吸取白細胞稀釋液0.38ml（也可吸0.4ml）置一小試管中。用沙利氏管吸取被檢血至20mm3處，擦去管外粘附的血液，吹入小試管中，反復吸吹數(shù)次，以洗凈管內(nèi)所粘附的白細胞，充分振蕩混合。再用毛細吸管或沙利氏吸血管吸取被稀釋的血液，充入已蓋好蓋玻片的計數(shù)室內(nèi)，靜置1～2min，低倍鏡檢查。將計數(shù)室四角四個大方格內(nèi)的全部白細胞依次數(shù)完，注意壓在左線和上線的計入，壓在右線和下線的不計入。1mm3血液中白細胞數(shù)=x/4×20×10X：四角四個大方格內(nèi)的白細胞總數(shù)。x/4：一個大方格（面積為1mm2）內(nèi)的白細胞數(shù)。20：稀釋倍數(shù)10：血蓋片與計數(shù)板的實際高度是0.1mm，乘10后則為1mm。上式簡化后為1mm3血液中白細胞數(shù)=x×50計算白細胞增多可見于多數(shù)細菌性感染和炎癥，如豬丹毒、豬肺疫、結(jié)核、馬鼻疽、馬腺疫、肺炎、胸膜炎、腹膜炎等。白血病時以白細胞的顯著增多為特征。白細胞減少主要見于某些病毒性傳染病，如豬瘟、流感等；某些重度疾病的后期；長期應用某些藥物（如氯霉素等）；梨形蟲病等。臨床意義健康豬白細胞總數(shù)14.0±0.93×109/L；奶牛白細胞總數(shù)9.41±2.13×109/L；奶山羊白細胞總數(shù)13.2±1.88×109/L；健康犬白細胞總數(shù)為6.0-17.0×109/L。健康貓白細胞總數(shù)為9.0-24.0×109/L。白細胞分類計數(shù)

differentialcountofwhitebloodcell，DC

外周血液中的白細胞主要有5種，即嗜中性白細胞、嗜酸性白細胞、嗜堿性白細胞、淋巴細胞、單核細胞，它們各有其特定的生理機能，在正常時這5種白細胞之間有一定的比例。但在病理情況下，白細胞總數(shù)的變化反映機體防御機能的一般狀態(tài)，各種白細胞之間百分比的變化，則反映機體防御機能的特殊狀態(tài)。由于白細胞總數(shù)的增減并不一定表示各類白細胞平均增多或減少，常常僅限于某一種或兩種白細胞數(shù)的變化，從而引起白細胞之間百分比的相對改變。因此，白細胞計數(shù)對疾病的診斷具有一般意義，而白細胞分類計數(shù)則具有具體意義，在分析臨床意義時，必須把二者結(jié)合起來。

鏡檢技術(shù)將被檢血液涂片，經(jīng)瑞氏染色或姬姆薩染色，水洗，干燥后鏡檢。先用低倍鏡全面觀察血片上細胞分布情況及染色質(zhì)量，然后選擇染色良好，細胞分布均勻的部分，用油鏡進行分類。由于比重大的細胞(粒細胞，單核細胞等)多分布在血片的邊緣和尾部，比重小的細胞(如小淋巴細胞等)則多分布在血片的頭部和中間。為減少這種細胞分布的固有誤差并避免重復計數(shù)，血片必須按一定方向曲折移動而分類計數(shù)。計數(shù)時，為避免重復和遺漏，可用四區(qū)、三區(qū)或中央曲折計數(shù)法推移血片，記錄每一區(qū)的各種白細胞數(shù)。每張血片最少計數(shù)100個細胞(如果計數(shù)200-300個白細胞，當然其百分率更為準確)，連續(xù)觀察2～3張血片，求出各種白細胞的百分比。記錄時，可用白細胞分類計數(shù)器，也可事先設(shè)計一表格，用畫“正”字的方法記錄，以便于統(tǒng)計百分數(shù)。

各類白細胞的形態(tài)特征

在鏡下辨認各種白細胞時，必須掌握其主要特征，如細胞大小，核的形狀結(jié)構(gòu)及染色性，胞漿顏色、有無顆粒及顆粒特點等。在同一張血片上對照比較，互相鑒別。1．嗜中性白細胞。圓形，直徑約10—15μm。胞漿淡紅色，胞漿內(nèi)有多量紫紅色細小顆粒(染色不佳時則看不清楚)。核染成深紫色，其形狀多樣，核微呈腎形，染色稍淡的稱幼年核，呈帶形或S形，兩邊平行的稱桿狀核，分成2—3葉，在葉之間有細絲相連的稱分葉核。有時因核葉重疊看不到細絲，但核量較多，染色質(zhì)致密，也可認為是分葉核。2．嗜酸性白細胞。大小，形態(tài)與嗜中性白細胞大體相似，唯胞漿內(nèi)含有粗大的鮮紅色顆粒(馬的這種嗜酸性顆粒明顯大于其它家畜)。核多數(shù)為兩葉。3．嗜堿性白細胞。大小、形態(tài)與嗜中性白細胞相似，但胞漿內(nèi)含有粗大的深藍色顆粒，常遮蓋在核上。核分葉不明顯。4．淋巴細胞。分大小兩種，小淋巴細胞圓形，直徑約7—10μm，核染成深紫色，圓形或腎形。胞漿很少，常僅呈一小片月牙狀，染成藍色。大淋巴細胞直徑約10—19μm，核圓形或腎形。胞漿相對較多，染成天藍色，在胞漿與核之間有淡染帶。有時內(nèi)含少數(shù)紫紅色大顆粒。5．單核細胞。是外周血液中最大的細胞，直徑約為12—24μm。核染成紫色，其染色質(zhì)疏松，核形不規(guī)則，呈腎形，多角形，折疊狀等。胞漿較多，染成淺灰藍色，有時內(nèi)含少量灰塵樣淡紅色小顆粒。臨床意義白細胞增多嗜中性白細胞增多：見于急性炎癥及外傷感染、化膿性感染等。嗜酸性白細胞增多：見于某些寄生蟲病、過敏性疾病及濕疹等。淋巴細胞增多：見于結(jié)核、布氏桿菌病及犬瘟熱、流感等病毒病。單核細胞增多：見于敗血性疾病，某些焦蟲病及李氏桿菌等。白細胞減少嗜中性白細胞減少：見于病毒性傳染病、藥物中毒（如長期服用抗生素）、各種疾病的垂危期。嗜酸性白細胞減少：見于敗血癥、毒血癥、尿毒癥等。淋巴細胞減少：放射性損傷，多為嗜中性白細胞增多而造成的相對性變化。在分析嗜中性白細胞增、減變化時，還應注意嗜中性白細胞的成熟情況。若未成熟的嗜中性白細胞增多，即出現(xiàn)嗜中性髓樣細胞、幼稚型和桿狀核嗜中性白細胞的比例增多，則稱為核左移。若血液內(nèi)分葉核嗜中性白細胞大量增多，而且核的分葉數(shù)目也增多，則稱為核右移。白細胞總數(shù)增多的同時，出現(xiàn)核左移，表示骨髓造血機能加強，機體處于積極防御階段；而白細胞總數(shù)減少時見有核左移，則表示骨髓造血機能減退，機體的抗病力降低。至于核右移，乃骨髓造血功能衰退的標志，多因機體高度衰竭而引起，常提示預后慎重。臨床意義尿素能溶解紅細胞及白細胞而保存完整形態(tài)的血小板，經(jīng)稀釋后再細胞計數(shù)室內(nèi)直接計數(shù)，以求得1mm3血液內(nèi)的血小板數(shù)。稀釋液中的枸櫞酸鈉有抗凝作用，甲醛可以固定血小板的形態(tài)。血小板計數(shù)(plateletcount)

血小板具有重要的保護機能，參與血液凝固。血小板計數(shù)對于評價血液凝固機制提供一定的依據(jù)用1ml吸管吸取稀釋液0.38ml置一小試管中。用沙利氏管吸取被檢血至20mm3處，擦去管外粘附的血液，吹入小試管中，吸吹數(shù)次，充分混允。靜置20min以上，使紅細胞溶解。充分混勻后再用毛細吸管或沙利氏吸血管吸取被稀釋的血液，充入已蓋好蓋玻片的計數(shù)室內(nèi)，靜置10min，高倍鏡觀察。任選計數(shù)室內(nèi)一個大方格，按計數(shù)法計數(shù)。血小板在高倍鏡下，呈橢圓形、原形或不規(guī)則折光小體，注意切勿誤將塵埃等異物計入。

1mm3血液中血小板數(shù)=x×20×10X：一個大方格內(nèi)的白細胞總數(shù)。20：稀釋倍數(shù)10：血蓋片與計數(shù)板的實際高度是0.1mm，乘10后則為1mm。上式簡化后為1mm3血液中血小板數(shù)=x×200計算臨床意義血小板減少：血小板增多：生成減少破壞增多消耗過多原發(fā)性增多繼發(fā)性增多急性感染、急性出血急性溶血再生障礙性貧血、急性白血病放化療等原發(fā)性血小板減少性紫癜/脾功能亢進血管內(nèi)凝血、血栓性血小板減少性紫癜/任務(wù)三血液分析儀及其在寵物臨床上的應用

血液分析儀是目前臨床血液檢驗常用檢測儀器。20世紀40年代后期，美國人庫爾特（W.H.Coulter）發(fā)明電子血細胞計數(shù)儀并申請專利。其特點是檢測速度快、精確度高、操作簡便。目前，各類血液分析儀主要能完成兩大功能：①細胞計數(shù)功能。②細胞分類功能。血液分析儀檢測原理主要是電阻抗法。

電阻抗法血液分析儀器組成

①信號發(fā)生器：通過小孔的各種血細胞都能產(chǎn)生電阻信號，信號電平的高低與細胞的大小成正比。②放大器：血細胞通過小孔時產(chǎn)生的脈沖信號非常微弱，需通過電子放大器，將微伏級信號放大為伏級脈沖信號，才可觸發(fā)電路。③閾值調(diào)節(jié)：在計數(shù)不同細胞時，應調(diào)節(jié)閾值電平，以給出合適的閾值度，使計數(shù)結(jié)果盡量符合實際水平。④甄別器：各種微粒(血細胞、細胞碎片、雜質(zhì)等)通過小孔時均可產(chǎn)生相應脈沖信號；甄別器則根據(jù)閾值提供的參考電平，將低于參考電平的各種非計數(shù)目標的假信號去掉，以提高計數(shù)的準確性。⑤整形器：經(jīng)放大和甄別后的細胞脈沖信號，波形不一致，必須經(jīng)過整形器調(diào)整為一致標準的平頂波形后，才可觸發(fā)計數(shù)電路。⑥計數(shù)系統(tǒng)：血細胞產(chǎn)生的脈沖信號，經(jīng)過放大、甄別、整形后，送入計數(shù)系統(tǒng)；儀器對大小不同的脈沖進行選擇，區(qū)分出不同類型的細胞并分別進行計數(shù)。

電阻抗法檢測原理

又稱庫爾特原理(Coulterprinciple)白細胞計數(shù)和分類計數(shù)原理

儀器將體積為35～450fL的血細胞，分為256個通道（channel）。每個通道：1.64fl。根據(jù)細胞大小，分別置于不同的通道中，顯示血細胞體積分布直方圖(Histogram)。經(jīng)溶血素處理脫水后，血細胞體積大小發(fā)生了變化！第一群（35～90fl）小細胞區(qū)：淋巴細胞（體積最?。?。第二群（90～160fl）單個核細胞區(qū)，（中間細胞）：單核細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、原始、幼稚細胞、異常細胞等。第三群（160fl以上）大細胞區(qū)：嗜中性粒細胞（體積最大）。3590160300400450(fl)正常白細胞分類模式圖（直方圖）%正常參考值：各種常見寵物白細胞分類平均值(%)

紅細胞檢測原理

紅細胞計數(shù)和血細胞比容測定與白細胞計數(shù)相似100200300400(fl)%血小板檢測原理

血小板計數(shù)（platelet,PLT）：隨紅細胞在一個系統(tǒng)中進行檢測%

102030(fl)直方圖在2～28fl，主要在2～

15fl（不同儀器不一）實驗室檢驗分析技術(shù)項目1血液學檢查任務(wù)1血液樣品采集與抗凝血液樣品采集1.保定2.消毒3.采樣禽類：翅根靜脈、心臟豬：耳靜脈、前腔靜脈牛羊：頸靜脈犬貓：前臂頭靜脈、后肢隱小靜脈血液全血血漿血清血液學檢查血細胞計數(shù)分類與形態(tài)檢查血漿生理和病理檢驗內(nèi)分泌激素生化與免疫學檢查血液的抗凝草酸鹽是常用的抗凝劑，每1.5-2.0mg可抗凝1.0ml血液，可用于血液常規(guī)檢驗。因?qū)t細胞大小有影響，故不能用紅細胞壓積測定，如測定紅細胞壓積時，可用雙草酸鹽抗凝劑或乙二胺四乙酸二鈉。雙草酸鹽抗凝劑

草酸鉀0.8g草酸銨1.2g蒸餾水加至100ml溶解后吸取0.5ml，加入供采血試管或小瓶中，置干燥箱內(nèi)（溫度不超過80℃）烘干備用，可供5ml全血抗凝。血液檢驗乙二胺四乙酸（EDTA

）鹽可適用于一般的血液學檢查，特別是血小板計數(shù)，但因為影響血小板聚集和白細胞吞噬功能，不適合于血象及血小板功能檢查。（EDTA－Na2－H2O）每10mg可使5ml全血抗凝；或配成10%的溶液，每2滴可使5ml全血抗凝。（EDTA－K2－2H2O）1%溶液0.1ml可使5ml血液不凝固。全血細胞分析及血細胞比容測定。3.8%枸櫞酸鈉溶液每1ml可使4ml全血抗凝。常用于血沉、凝血因子和血小板功能檢查。因其毒性小又可作為血液保養(yǎng)液。但不適用于血液化學檢驗。由于抗凝劑溶解緩慢，故只能配成溶液，不能用粉劑。血液檢驗肝素肝素價格最貴，其優(yōu)點是抗凝作用強，不影響血細胞的體積，不致溶血等，可用于多種血液生物化學分析和紅細胞壓積測定。但過量的肝素可引起白細胞聚集和血小板減少，故不適用于白細胞和血小板計數(shù)，也不適用于血涂片檢查，因其在瑞氏染色時會出現(xiàn)藍色背景，更不能用于血液學一般檢查。肝素是生理性抗凝劑,廣泛存在于肺、肝、脾等幾乎所有的組織和細胞周圍，肥大細胞和嗜堿性粒細胞的顆粒中。它是一種含硫酸基團的黏多糖?？鼓龣C制較為復雜，主要是加強抗凝血酶Ⅲ滅活絲氨酸蛋白酶的作用，從而阻止凝血酶的形成，并有阻止血小板聚集等多種抗凝作用。通常用肝素粉劑配成1g/L水溶液。取0.5ml置小瓶內(nèi)，放于37～50℃中烘干后貯于冰箱內(nèi)保存。能使5ml血液不凝固，肝素抗凝劑應及時使用，放置過久易失效。

如分離血清，應將全血采集在試管中（不加抗凝劑），在室溫下或25-37℃溫水中斜置，血清析出后即可分離。血漿應在抗凝血采集后離心分離。血液采集后應盡快送檢和檢測。不能立即送檢的血樣，血片應固定，抗凝血、血漿和血清應冷藏。送檢血樣應編號，并避免劇烈振搖。血液學檢查項目與血樣保存的期限見下表

血樣的處理檢查項目保存時間（h）檢查項目保存時間（h）白細胞計數(shù)2-3血紅蛋白含量48紅細胞計數(shù)24紅細胞壓積容量24血小板計數(shù)1紅細胞沉降速率2-3網(wǎng)織紅細胞計數(shù)2-3白細胞分類計數(shù)1-2注意:懷疑傳染病時，采血應防止到處流散，檢后殘余血液及所用器皿應進行消毒處理。紅細胞背景知識

紅細胞也稱紅血球，是血液中數(shù)量最多的一種血細胞，同時也是脊椎動物體內(nèi)通過血液運送氧氣的最主要的媒介。在所有的脊椎動物及若干無脊椎動物，其血紅素包含在特定的細胞中來進行其機能活動，這種血球稱為紅細胞。其它的血細胞，如白血球，則是免疫細胞。紅細胞中含有血紅蛋白，因而使血液呈紅色。血紅蛋白能和空氣中的氧結(jié)合，因此紅細胞能通過血紅蛋白將吸入肺泡中的氧運送給組織，而組織中新陳代謝產(chǎn)生的二氧化碳也通過紅細胞運到肺部并被排出體外。血紅蛋白更易和一氧化碳相合，當空氣中一氧化碳含量增高時，可引起一氧化碳中毒。紅細胞和血紅蛋白的數(shù)量減少到一定程度時，稱為貧血。紅細胞大量被破壞可引起溶血性黃疸。紅細胞描述：多，小而圓，中央著色較淺，無核。禽類稱為凝血細胞，一般為卵圓形，有細胞核，比哺乳動物的大得多，數(shù)量少。血液涂片的制備和細胞染色１、涂片的制作

選取一張邊緣平滑的載玻片作為推片(最好此載玻片稍窄或磨去兩角),用左手的拇指與中指夾持一張載玻片，取被檢血液一滴(最好是未加抗凝劑的新鮮血)置載玻片的一端，然后右手持推片傾斜30-40°角，由血滴的前方向后接觸血滴，待血液擴散成線狀后，立即以均等的速度輕而平穩(wěn)地向前推進，即形成血膜。涂片時，血滴越大，角度越大，推片速度越快，則血膜越厚，反之則血膜越薄。白細胞分類計數(shù)的血片宜稍厚，進行紅細胞形態(tài)及血原蟲檢查的血片宜稍薄。一張良好的血片，要求厚薄適宜，血液分布均勻，對光觀察呈霓虹色，邊緣整齊，能明顯分出頭，體，尾三部分，兩側(cè)留有空隙(以寫明畜別，編號、日期)。血膜分布不勻，主要是由于推片不齊，用力不勻，玻片不潔所致。推好的血片可在空氣中揮動，使其迅速干燥，以防細胞皺縮變形，并盡快固定染色。為了觀察細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，識別各種細胞及其異常變化，血涂片必須進行染色。原理染色是染料透入被染物并留存其內(nèi)部的一種過程，此過程既有物理的吸附作用，又有化學的親和作用。各種細胞成分化學性質(zhì)不同，對染料的親和力也不一樣。例如血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合，染成紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)；細胞核蛋白和淋巴細胞胞質(zhì)為酸性，與堿性染料美藍或天青結(jié)合，染成紫藍色或藍色，稱為嗜堿性物質(zhì)；中性顆粒呈等電狀態(tài)，與伊紅和美藍均可結(jié)合，染成紫紅色，稱為中性物質(zhì)。２、細胞染色瑞氏染色法姬姆薩氏染色法瑞－姬氏復合染色法（１）瑞氏染色法●瑞氏染料：酸性染料伊紅、堿性染料亞甲藍●瑞氏染液：瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml。將染色粉置于研缽中，加少量甲醇研磨，使其溶解，將已溶解的染液倒入潔凈的棕色玻璃瓶中，剩下未溶解的染料再加少量甲醇研磨，如此繼續(xù)操作，直至全部染料溶解并用完甲醇為止。在室溫中保存7日，每日震搖一次，過濾后即可應用。新配的染液偏堿性，放置后可呈酸性。保存時間愈久，染色能力愈佳?！裢科渭尤旧骸茫薄瞞in——加磷酸鹽緩沖液混合均勻——３～5min——水沖洗——自然干燥——鏡檢(所得血片呈櫻紅色者為佳)（２）姬姆薩氏染色法●姬姆薩氏染料：酸性染料伊紅、堿性染料天青●姬姆薩氏染液：姬姆薩氏染粉0.5g，中性甘油33ml，中性甲醇33ml。將染色粉置于研缽中，加少量甘油，充分研磨；加入所余甘油，在50～60℃水溶液中保溫1～2h，并用玻棒攪拌，使染粉溶解；最后加入甲醇，混